柴胡龍骨牡蠣湯對慢性應激大鼠的抗抑郁作用

周勁光 楊霄鵬

1)河南大學淮河醫院臨床教學辦 開封 475000 2)鄭州大學第二附屬醫院神經內科 鄭州 450014

為探討柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯以及非小柴胡湯部分(即龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃)抗抑郁作用的差別,本實驗采用慢性應激的方法造成大鼠抑郁模型,觀察不同藥物組成對慢性應激引起的動物行為的變化。

1 材料

1.1 藥物與試劑 柴胡加龍骨牡蠣湯中各藥材(去鉛丹)均購自南京市金陵大藥房,包括人參、桂枝、半夏、茯苓、黃芩、柴胡、大黃、甘草、牡蠣、龍骨、姜、大棗。

柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯和龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃方(龍牡桂苓軍)均按原方比例配方。用10倍量水煎煮2次,并濾液蒸干,制備成浸膏凍干粉,柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯、龍骨牡蠣軍的獲得率分別為16.9%、19.8%及12.3%。各凍干粉放于-20℃冰箱里儲存備用,臨用時用蒸餾水配成所需濃度。

鹽酸氟西汀膠囊(Fluoxetine Hydrochloride Capsules,FLU)為加拿大奧貝泰克制藥有限公司生產,批號HD0560。1.2 動物 SD大鼠,雄性,體質量180～200 g,由中國藥科大學實驗動物中心提供。動物分籠飼養,保持晝夜節律,室溫(22±1)℃,食水自由。

2 方法

2.1 動物分組、造模及給藥方法 所有大鼠適應飼養7d后,用Open-Field法[1]作行為學評分,選擇得分相近的90只大鼠隨機分為9組,即正常組(Normal);模型組(M ode l);陽性藥對照組(FLU,20 mg?kg-1);CLMD高、低(500、200 mg?kg-1)劑量組;小柴胡湯高、低(800、320 mg?kg-1)劑量組;龍牡桂苓軍組高、低(200、80 mg?kg-1)劑量組。除正常組外,其余各組均連續接受各種不同的應激以復制慢性應激抑郁模型。動物模型根據文獻[2]方法改進,每天隨機選取以下應激中的任意一種:冷水游泳(4℃,5 m in)、熱應激(45℃,5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、夾尾(1 m in)、水平搖晃(60 HZ,15 min)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各3次,使大鼠不能預料刺激的發生,以避免發生適應性。各組每日上午8:00給藥,連續21 d,正常組和模型組給予等量蒸餾水。各組動物于1 d、7 d、14 d、21 d稱體質量。

2.2 行為學觀察指標

2.2.1 開野實驗[3]:所有動物于21 d后1～2 h,置于安靜、黑暗的屋子里進行實驗。水平運動得分:大鼠置于敞箱中央格,以穿越1格為1分(四爪均進入方格才計數);垂直運動得分:兩前爪騰空或攀附墻壁次數。水平活動得分反映大鼠的運動活動性水平;垂直活動得分則反映其興趣高低。

2.2.2 糖水消耗實驗[4]:所有大鼠于實驗d 19起禁食水24 h(期間灌胃1次),于20d予食物及1%蔗糖水溶液200m L,觀測大鼠在24 h內的飲用蔗糖水溶液量。比較正常組大鼠、模型組以及各給藥組大鼠在糖水消耗及糖水偏愛方面的差異。

糖水偏愛(Sucrose Preference,SP)以蔗糖水溶液的消耗量(m L)/總液體的消耗量(m L)×100%表示。

2.3 各組大鼠海馬比值的測定 實驗最后1 d各組大鼠稱質量,股動脈取血處死,取雙側的海馬,稱質量。取海馬與大腦質量的比值,以消除各組體質量差異的影響。

2.4 各組大鼠腎上腺指數的測定 實驗最后1 d各組大鼠稱質量,股動脈取血處死,剖開腹腔,把腎上腺連同周圍少量脂肪組織一起摘出,浸入生理鹽水中洗凈附著的血液,并將殘余的脂肪組織剔除干凈,用濾紙吸干表面水份,迅速稱質量。

3 結果

3.1 對動物行為學指標的影響

3.1.1 對開野實驗的影響:見表1。經過21 d不可預見性慢性應激,模型組與空白組相比較,大鼠的水平運動、垂直運動均明顯減少;與模型組相比,氟西汀、柴胡加龍骨牡蠣湯(全方組)高、低劑量組及龍牡桂苓軍高劑量組均能明顯增加大鼠的水平得分、垂直得分,高劑量小柴胡湯組的水平得分明顯增加。

3.1.2 對糖水消耗試驗的影響:見表1。模型組與空白組相比,24 h糖水消耗量明顯減少;柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組、小柴胡湯高劑量組以及氟西汀組可顯著增加24 h糖水消耗量。

3.2 對海馬比值的影響 見表1。與空白組相比,模型組的海馬體積明顯減小(P＜0.01),提示慢性應激可造成大鼠海馬的縮小。氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組以及龍牡桂苓軍高低劑量組能明顯對抗慢性應激大鼠的海馬萎縮。

3.3 對腎上腺指數的影響 見表1。模型組與空白組相比,腎上腺指數明顯升高,氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組可明顯降低慢性應激大鼠的腎上腺指數,龍牡桂苓軍低劑量組的效果尤為明顯。

4 討論

傳統中醫認為,抑郁癥屬郁證范疇。由情志不舒,肝氣郁結,漸致五臟不和,化火、生痰、瘀阻、耗氣、傷陰等而致,臨床多從肝臟論治,常用柴胡劑。其中柴胡加龍骨牡蠣湯被認為是最適合于治療抑郁癥的古方之一,甚至有“抑郁狀態為柴胡加龍骨牡蠣湯之證”之說[5]。雖然柴胡加龍骨牡蠣湯是由小柴胡湯演變而來的,但是臨床上鮮有用小柴胡湯原方治療抑郁癥的報道。抑郁癥的病因尚未徹底闡明,目前認為慢性、低水平、長期的應激源是促進抑郁發生、加重病情的主要原因。慢性輕度不可預見性應激抑郁模型就是根據此理論依據建立,其特點是應激因子的多變性和不可預見性,已成為國內外學者探討抑郁癥的發病機制及抗抑郁劑作用機制而廣泛應用的動物模型[6]。慢性應激模型中大鼠活動減少、快感缺失與抑郁證患者表現出的情緒低落、興趣喪失有一定程度的相似性。海馬是在眾多腦區中被認為與抑郁癥的關系最為密切的腦區之一。重癥抑郁病人左右側海馬較正常人顯著縮小,且縮小程度與抑郁持續時間呈正相關。Rubin等[7]研究發現,與健康者相比,抑郁患者的腎上腺皮質增生約38%,增生的程度與皮質醇的濃度有關,且隨著抑郁的恢復,這種增生似乎也隨著皮質醇的正常化而逐步消失。

本實驗采用慢性應激模型,通過大鼠活動能力、糖水消耗、腎上腺指數以及海馬體積的變化,考察了小柴胡湯、柴胡加龍骨牡蠣湯及龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃的抗抑郁作用。發現龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃與柴胡加龍骨牡蠣湯具有相似的抗抑郁作用,均能提高慢性應激大鼠的水平運動及垂直運動、抵抗慢性應激造成的快感缺失、抑制海馬體積的減小以及降低慢性應激大鼠的腎上腺指數,而小柴胡湯則沒有表現出明顯的抗抑郁作用。實驗提示龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃部分可能是柴胡加龍骨牡蠣湯抗抑郁的主要有效部分,柴胡加龍骨牡蠣湯中抗抑郁作用的最佳配伍藥物組合還有待于進一步的研究。

表1 柴胡加龍骨牡蠣湯及其相關組方對小鼠開野實驗、糖水消耗、海馬比值以及腎上腺指數的影響

[1] 庫寶善.開野實驗[M]//徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學.第3版.北京:人民衛生出版社,2001:802.

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