胸膜肺炎放線桿菌血清 8型自轉運黏附素基因克隆測序及功能區對比

王 瑜,雷連成,韓文瑜,謝 芳,李林溪,周 靚,楊舒心,胡本鋼,邢艷蘋,計 群,路 榮,劉曉賀,何伯萍

(吉林大學畜牧獸醫學院,吉林長春,130062)

胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是豬傳染性胸膜肺炎的病原菌。豬傳染性胸膜肺炎是一種高度傳染性和致死性的呼吸系統疾病,它主要經呼吸道感染并且具有專一性的侵害豬的肺臟。所以,在該菌的定植過程中,黏附成為該菌感染不可缺少的生存定居的過程[1]。2002年,Ingrid Van Overbeke等[2]研究發現,APP黏附于宿主細胞的過程可能是由多因素多因子共同參與完成的。而目前有關 APP黏附作用的研究寥寥無幾,僅有脂多糖(LPS)、菌毛等[3～5]。由此推測,含有一些潛在的黏附因子尚未被發現,有待進一步研究。

吉林大學和平校區畜牧獸醫學院微生物實驗室在前期研究中,首次發現 APP存在三聚體自轉運黏附素[6],并發現其在不同血清型中的三聚體自轉運黏附素存在著顯著的差異,其中血清 5b型具有完整的三聚體自轉運黏附素的結構。但是,目前對于該蛋白的黏附功能尚不明確。筆者在生物信息學分析的基礎上,將首次獲得的 APP血清 8型基因序列與APP血清 3,5b,7型進行對比,以及基因序列進行分析。

1 材料與方法

1.1 菌株

胸膜肺炎放線桿菌(APP)血清 8型 CVCC 405菌株購自中國獸醫微生物菌種保藏管理中心(CVCC);大腸桿菌 DH5α菌株購自寶生物工程(大連)有限公司。

1.2 試劑

腦心浸液(Brain Heart Infusion,BHI)、馬血清、NAD(sigma)等購自北京鼎國生物試劑公司;AxyPrep BacterialGenomic DNA Miniprep kit(Axygen),QIAquick PCR purification Kit(QIAGEN),DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(Roche)等試劑盒分別購自長春維特潔、長春聯星生物公司、長春科隆生物工程用品經銷部;限制性內切酶 SalⅠ,EcorⅠ,La Taq,dNTP(TaKaRa)等購自寶生物工程(大連)有限公司。……