膀胱癌組織中Livin的表達變化及意義

高偉興,王志祥,張立國,康紹叁,劉 健,王 磊,曹鳳宏,李曉強

(1華北煤炭醫學院附屬醫院,河北唐山 063000;2唐山工人醫院)

Livin是新近發現的凋亡抑制蛋白(IAP)家族成員之一,研究表明[1～3],Livin在多種腫瘤細胞中呈高度表達,與腫瘤的發生發展有著密切關系。2007年 8月 ～2009年 12月,我們采用免疫組化法檢測膀胱癌組織中Livin的表達情況,探討Livin與膀胱癌的病理分級、臨床分期、腫瘤數目以及復發的相關性,為膀胱癌診斷、判定預后提供理論依據。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院經開放手術證實且成功隨訪的膀胱尿路上皮癌(膀胱癌)69例,均為初次經病理檢查確診者,術前均未行放化療,保留膀胱手術后使用化療藥物膀胱內灌注。其中男 66例,女 3例,年齡23～82歲,平均 59歲。病理分級按 WHO (1973年)標準：G1級 18例,G2級 28例,G3級 23例;臨床分期按UICC-TNM(2002年)分期標準：Ta～T142例,T2～T427例;腫瘤單發者 47例,多發者22例。隨訪從手術后開始,如腫瘤復發,隨訪結束,計為復發時間,否則隨訪至 5 a結束,在保留膀胱手術的 60例患者中,復發 33例,無復發 27例。設為對照的 10例正常膀胱組織標本取自前列腺切除術患者。

1.2 Livin檢測方法 一抗為兔抗人Livin多克隆抗體,山羊抗兔 SP免疫組織化學染色試劑盒及DAB顯色試劑盒。標本用石蠟包埋,4μm厚切片,采用免疫組化SP法染色,按試劑盒說明書操作,以PBS替代一抗作為陰性對照。

胞質呈現黃色及棕黃色者為陽性細胞。將陽性細胞按照其數量及顯色程度分為 3級：弱陽性(+)：陽性細胞＜10%、顯色強度為淡黃色;強陽性(+++)：陽性細胞＞60%,顯色強度為黃色或綜黃色;中陽性(++)：陽性細胞及顯色強度介于+與+++之間;細胞無染色為陰性(-)。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。數據比較用χ2檢驗、Fisher確切概率檢驗和t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

膀胱癌組織中 Livin陽性表達率為 65% (45/69),其中+++者12例,++者8例,+者25例;正常膀胱黏膜組織中Livin呈陰性表達(P＜0.05)。Livin陽性表達與膀胱癌病理分級、臨床分期、腫瘤數量無關(P＞0.05),與腫瘤復發有關(P＜0.05)。詳見表1。本組中Livin陽性表達者術后復發率為 67%(26/39),平均復發時間為 20個月, Livin陰性表達者術后復發率為33%(7/21),平均復發時間為42個月(P均＜0.05)。

表1 Livin表達與膀胱癌臨床病理指標的關系

3 討論

細胞凋亡在腫瘤的發生發展中起著重要作用,也與腫瘤的放療和化療效果密切相關。影響細胞凋亡的基因分為促凋亡基因和抗凋亡基因,IAP家族為后者。Livin是2000年發現的IAP家族中新成員,人類的Livin基因位于染色體20q13,全長46 kb,包含7個外顯子及6個內含子,Livin蛋白N端僅包含一個桿狀病毒IAP重復序列(BIR)結構,它與Caspase蛋白結合,抑制其介導級聯激活反應及多種途徑引起的細胞凋亡[2]。另外,C端含一個環狀鋅指樣結構,其轉錄產物因剪接方式不同有兩種mRNA亞型即Livinα和Livinβ,分別編碼298和280個氨基酸的蛋白質,兩種蛋白在功能上沒有本質差別。

在胎兒時期,Livin在多種組織呈高表達,可能與生長發育有關;在正常成人的組織中(除胎盤外),Livin呈低表達或不表達,而在多種惡性腫瘤中有特異性表達,如黑色素瘤、乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤以及肺癌等[3,4]。本研究結果顯示 Livin在膀胱癌組織中的陽性表達率為65%,而在正常膀胱黏膜組織中不表達,提示Livin與膀胱癌的發生密切相關,可作為膀胱癌的分子標志物。本研究結果還顯示Livin的陽性表達與膀胱癌病理分級、臨床分期及病灶數量無關,這與文獻[5,6]的報告相同。G1級和 Ta～T1期的膀胱癌組織中Livin的陽性表達率分別為56%、62%,說明膀胱癌發生的早期即有Livin的陽性高表達,Livin可作為膀胱癌早期診斷的指標之一。至于Livin的陽性表達與膀胱癌的復發是否有關國內外研究結果并不一致,可能與資料的選擇和隨訪時間不同有關。本組 69例均為初發膀胱癌患者,其中60例行保留膀胱手術,采用回顧性隨訪,即術后開始隨訪,腫瘤復發,隨訪即結束,計為復發時間。本組膀胱癌5 a復發率為55%,其中Livin陽性表達者的復發率為67%,平均復發時間為20個月;Livin陰性表達者的復發率為 33%,平均復發時間 42個月(P均＜0.05),說明Livin與膀胱癌復發有關。

膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤,術后復發率高達50%～70%,其中10%～20%的復發腫瘤惡性度增加,臨床上采用膀胱鏡和尿脫落細胞學檢查診斷膀胱癌均有其不足之處,另外根據病理分級和臨床分期來判斷膀胱癌的預后和5 a生存率也有些滯后。而采用分子生物學方法來探討腫瘤的發生發展及預后是醫學前進的方向。我們認為,通過對凋亡抑制基因Livin的結構和功能進一步研究,其有望成為膀胱癌早期診斷、監測復發及預后判斷的重要指標之一。

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