SP染色法檢測宮頸癌細胞Caspase-3活性

林小博

(漯河醫學高等專科學校 河南 漯河 462002)

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一。早婚、早育、多產及性生活紊亂的婦女有較高的患病率,宮頸癌早期沒有任何癥狀,隨著病情進展,患者可出現異常陰道流血。此外,白帶增多也為宮頸癌常見癥狀,約80%的宮頸癌患者有此癥狀,本實驗旨在通過免疫組織化學技術研究化療前后宮頸癌細胞Caspase-3活性,為宮頸癌的治療提供相關依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

31例病例來自于本實驗室在周邊醫院收集新鮮標本,有性生活史,平均(31.19±5.17)歲,其中鱗癌21例,宮頸腺癌10例。宮頸癌組織分期為Ⅰ期13例、Ⅱ期8例,低分化3例、中高分中低分化者7例。標本經過5%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋。

1.2 方法

采用SP法檢測Caspase-3,抗Caspase-3小鼠單克隆抗體(碧云天生物技術研究所提供),工作濃度 l:1000,DAB顯色,蘇木素復染。以PBS緩沖液代替-抗做空白,染色步驟嚴格按說明書進行。

1.3 判斷標準

顯微鏡觀察并收集圖像,Caspase-3陽性以細胞核或細胞質呈淺黃色或棕黃色顆粒樣物質。每個標本在400倍的觀察隨機5個視野計數,按陽性細胞所占百分比及著色程度進行結果判定。按陽性細胞比例判定:陽性細胞≤10%1分,10%～50%2分,>50%3分;按染色程度判定:陰性為0分;淡黃色為1分;中度黃色為2分,棕黃色為3分。按陽性細胞得分×染色程度得分計總分,總分<3為陰性,≥3為陽性[1]。

1.4 統計學方法

2 結果

Caspase-3在宮頸癌細胞中31例(27%)表達,陽性信號定位于細胞質,呈彌漫發布;化療前顯陽性的慢性宮頸癌和宮頸癌分別為57%和27%,化療后分別為59%和31%;在臨床分期中,I II期11例化療前分別為26%和18%,化療后分別為31%和21%;在病例分級中,化療前G1期表達為9例(31%);組織類型中鱗癌10例(23%),而在淋巴結轉移中,無淋巴結轉移的表達有17例(37%);化療后分別為33%、30%、23%,以上數據SPSS 12.0軟件處理,P<0.05,組間有一定的差異性,具有可比性。

3 討論

細胞凋亡是生物體內一種主動的自我調控過程。一些特定的基因在這一過程中起決定性的作用,細胞凋亡過程受抑與惡性腫瘤的發生、發展密切相關。Csapases是一組與秀麗隱桿線蟲同源的執行哺乳動物細胞凋亡的主要蛋白酶家族[2],絕大部分細胞凋亡依賴于Caspases的存在。大多數觸發細胞凋亡的因素,最終均需要通過Caspase-3介導的信號傳導途徑導致細胞凋亡。

caspase-3是caspase家族中最重要的成員[3]。Caspases酶原包括 3個部分:原域、大亞單位和小位。酶原本身的活性很低,但可以通過不同的方式被激活。活化的 Caspases通過特異性裂解底物而發揮其執行細胞細胞凋亡,因此又稱死亡蛋白酶,他們通過與眾多蛋白質因子的相互作用調控細胞凋亡[4]。

Caspase3為調節效應型,分解細胞蛋白,執行凋亡。相關研究顯示,瘤細胞Caspase3下調可阻斷凋亡信號傳導,從而抵制細胞誘導凋亡。Caspase3基因甲基化、基因突變及表達異常可使Caspase3蛋白表達下調,使一些腫瘤細胞得以逃避機體誘發凋亡的監控。

本研究顯示,化療前與化療后相比,宮頸癌中Caspase3的表達上升,高于化療前水平,可以說明Caspase-8表達變化可能與宮頸癌癌的發生、發展有關。它們都直接參與介導細胞凋亡的過程,在不同的細胞凋亡因素刺激下,caspase在細胞內可以通過多種不同途徑被活化,活化后的caspase通過切斷與周圍細胞的聯絡,重組細胞骨架,阻止DNA復制和修復,破壞DNA和核結構,誘導凋亡小體的形成等,在細胞凋亡過程中起著重要作用。因此,Caspase3表達對宮頸癌病情進展的監測、轉移潛能及預后估計等具有潛在研究價值。

[1]李晟磊,劉宗文,趙秋民.食管鱗癌組織中RECKmRNA和蛋白的表達及意義[J].中國腫瘤臨床,2007,34(22):1280～1286.

[2]馬惠芳,林彩霞,任秀君.針刺對腦缺血大鼠海馬區凋亡細胞及Caspase-9蛋白表達的影響[J].中國中醫藥信息雜志,2009,16(11):25～26.

[3]Worf BB,Green DR.Suicidal Tendencies:Apoptotic cell Death by Caspase-Family Proteinase[J].J Biol Chem,1999,27(29):20049～20052.

[4]張保華,王澤華.不同宮頸組織中caspase-3基因的表達及其臨床意義[J].臨床醫學,2003,23(6):523～524.