抗山羊ΔfosB基因表達產(chǎn)物抗體的制備及應(yīng)用

鄭惠玲，祝珍珍，安俊輝，楊振宇，邢瑞芳，閆林慧

西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，楊凌 712100

抗山羊ΔfosB基因表達產(chǎn)物抗體的制備及應(yīng)用

鄭惠玲，祝珍珍，安俊輝，楊振宇，邢瑞芳，閆林慧

西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，楊凌 712100

ΔfosB是fosB基因的自然截短型，穩(wěn)定存在于許多組織中，在脂肪細胞和成骨細胞的形成和分化中起到重要作用。ΔFosB蛋白可能與鈣在骨和乳腺中的代謝有關(guān)，并且調(diào)控鈣從骨向乳腺轉(zhuǎn)移的信號通路。將奶山羊的 ΔfosB基因亞克隆到pET32a載體得到pET32a-ΔfosB原核表達載體，IPTG誘導(dǎo)其在大腸桿菌中表達，純化融合蛋白免疫兔子制備多克隆抗體。ELISA檢測顯示抗體效價達1∶51 200，Western blotting 結(jié)果顯示制備的抗體能特異性檢測原核表達的ΔFosB蛋白以及在HEK-293細胞中表達的ΔFosB蛋白。進一步的組織差異表達檢測表明ΔFosB在山羊的乳腺、骨髓、腦髓、肌肉、心臟、肝和肺組織中均有表達。

山羊，ΔFosB，原核表達，多克隆抗體，組織差異表達

本課題組采用 RT-PCR方法從山羊的乳腺組織克隆得到了ΔfosB基因[11]，證明了ΔFosB在乳腺中有表達。本實驗進一步構(gòu)建了山羊 ΔfosB的原核表達載體，并在大腸桿菌中表達純化了ΔFosB蛋白，制備了兔抗羊ΔFosB多克隆抗體，為從蛋白質(zhì)水平研究山羊ΔFosB的功能提供了特異性工具。

1 材料與方法

1.1 材料

攜帶His標簽的pET32a(+)載體、E. coli BL21 (DE3)菌株、pMD-ΔfosB質(zhì)粒、pAdTrack-CMV-ΔfosB質(zhì)粒、DH5α菌株、HEK-293細胞由本實驗室保存。瓊脂糖購自Biowest公司。T4 DNA連接酶、LA Taq DNA聚合酶、pMD18-T Vector、限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和SalⅠ以及低蛋白質(zhì)分子量標準為TaKaRa公司產(chǎn)品。IPTG購自Inalc公司。DNA marker、預(yù)染蛋白質(zhì)marker Ⅲ、瓊脂糖凝膠DNA片段回收試劑盒及Pro-light HRP化學發(fā)光檢測試劑購自天根生化科技 (北京) 有限公司。……