人工誘騙子的入核分布對(duì)核因子-κB活性的調(diào)控作用

劉穎勛，權(quán)富生，王進(jìn)科，白學(xué)堯

1 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，楊凌 712100

2 東南大學(xué) 生物電子學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210096

核因子-κB (Nuclear factor-κB，NF-κB) 是一類重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與正常細(xì)胞的多種生物學(xué)活動(dòng)。NF-κB的異常活化與腫瘤、炎癥、自身免疫以及胚胎畸形發(fā)育等眾多疾病發(fā)生密切相關(guān)[1-3]。NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能成為臨床相關(guān)疾病基因治療的一個(gè)新的作用靶點(diǎn)。寡核苷酸誘騙子 (ODNs decoy) 是一種能從轉(zhuǎn)錄水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行有效調(diào)控的新策略[4-5]。寡核苷酸誘騙子調(diào)控基因表達(dá)的機(jī)理是將含有某個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn) (DNA-binding site) 的寡核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)，與核內(nèi)具有DNA結(jié)合活性的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，削弱轉(zhuǎn)錄因子與基因組DNA中其靶點(diǎn)的結(jié)合，從而抑制了轉(zhuǎn)錄因子對(duì)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性。目前，使用脂質(zhì)體、陽(yáng)離子多聚物、納米粒子攜帶寡核苷酸誘騙子進(jìn)入細(xì)胞的效率已經(jīng)很高[6-8]。Griesenbach等[9]采用脂質(zhì)體作載體轉(zhuǎn)導(dǎo) NF-κB ODNs decoy，認(rèn)為雖然ODNs很容易被細(xì)胞捕獲，但由于聚集在細(xì)胞質(zhì)中，并不能有效抑制核內(nèi)NF-κB的活性及其下游基因的表達(dá)。因此，ODNs decoy導(dǎo)入細(xì)胞后是否進(jìn)入細(xì)胞核，是其發(fā)揮調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子活性的關(guān)鍵[10]。近年來(lái)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，核定位信號(hào)肽 (Nuclear localization signal，NLS) 能引導(dǎo)蛋白質(zhì)、DNA、ODNs和化學(xué)治療藥物等外源性生物大分子進(jìn)入細(xì)胞核[11-12]。Ludtke等[13]分別構(gòu)建生物素(Biotin) 修飾的ODNs和親合素 (Streptavidin) 修飾的NLS多肽，利用biotin-streptavidin特異性結(jié)合反應(yīng)將NLS與不同大小的DNA片段連接起來(lái)，通過(guò)顯微注射將NLS-DNA連接物導(dǎo)入HeLa細(xì)胞中，增加了DNA片段的入核效率。Sakaguchi等[14]構(gòu)建了“谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶 (GST)-7個(gè)精氨酸殘基-GAL4 DNA結(jié)合域-NLS”組成的轉(zhuǎn)導(dǎo)體系，在功能性蛋白質(zhì)GST和多肽NLS介導(dǎo)下，攜帶ODNs穿越細(xì)胞質(zhì)膜，進(jìn)入細(xì)胞核。……