定量分析誘導山羊體細胞重編程過程中端粒酶的表達變化

張淑金，孟書燕，雷蕾，程祥，王華巖

西北農林科技大學動物醫學院 陜西省農業分子生物學重點實驗室 陜西省干細胞工程技術研究中心，楊凌 712100

體細胞隨著分裂次數的增加端粒不斷縮短，從而影響基因組的穩定，最終導致細胞的衰老和死亡。端粒酶 (TERT) 能以其自身 RNA為模板反轉錄合成端粒的重復序列，延長端粒 (Telomere) 的長度，提高基因組的穩定性，保證細胞的持續增殖能力[1-3]。除一些特別組織 (如睪丸等) 外，成體細胞中TERT的表達水平較低，而在胚胎干細胞中 TERT能始終保持很高的活性。因此，端粒酶的高表達對于維持干細胞自我更新能力和多分化潛能具有重要意義[4]。

2006年科學家發現用Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc (OSKM) 4個轉錄因子，可以將鼠的成纖維細胞誘導成多能干細胞 (Induced pluripotent stem cells，iPS)[5]，其細胞形態和生物學特點與ES細胞相似。在小鼠iPS細胞建系成功后，又有4個科研小組先后報道了人iPS細胞建系[6-9]。最近，猴[10]、大鼠[11-12]和豬[5]的iPS細胞系也已成功建立。iPS細胞的產生為干細胞研究開辟了一條新途徑，具有廣泛的應用前景。由于 iPS細胞研究剛剛起步，還有許多問題和影響因素有待解決。其中 iPS細胞重編程過程中TERT的活性變化，是值得研究的一個問題。

盡管體細胞重編程在小鼠和人上已經有較深入地研究，但在家畜特別是山羊上的研究還在探索中。另外，山羊體內各種組織細胞中的 TERT表達變化目前也不清楚。本研究利用實時熒光定量PCR技術(Real-time RT-PCR)[15]對關中奶山羊胎兒組織和重編程細胞中端粒酶基因相對表達量進行了檢測，探討iPS細胞形成與端粒酶基因表達之間的對應關系，以及堿性磷酸酶陽性和陰性的重編程細胞端粒酶基因表達水平的差異，以期為山羊 iPS細胞的研究和應用提供參考?！?br>