新輔助化療對乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表達的影響

郭阿垚，于鵬飛，姚凡，金鋒

（中國醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院乳腺外科，沈陽 110001）

新輔助化療對乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表達的影響

郭阿垚，于鵬飛，姚凡，金鋒

（中國醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院乳腺外科，沈陽 110001）

目的 探討新輔助化療對乳腺癌生物學(xué)標志物ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表達的影響。方法 選取64例接受新輔助化療的乳腺癌患者，用免疫組化SP法檢測新輔助化療前后ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67的表達。用熒光原位雜交（FISH）檢測C-erbB2表達為陽性者的Her-2基因擴增水平。結(jié)果 新輔助化療后ER、C-erbB2和p53表達發(fā)生改變的分別為13例、7例和9例，這種表達的改變無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。新輔助化療后PR和Ki67表達發(fā)生改變的分別為15例、18例，前后表達改變有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 新輔助化療對ER、C-erbB2、p53的表達沒有影響，可以提高乳腺癌PR表達的陽性率，降低Ki67的表達水平。若C-erbB2表達陽性，需用FISH進一步檢測。

新輔助化療；乳腺癌；ER；PR；C-erbB2；p53；Ki67

新輔助化療（neoadjuvant chemotherapy，NAC）是乳腺癌多學(xué)科綜合治療的重要組成部分，已成為局部晚期乳腺癌治療的新趨勢，同時逐漸應(yīng)用于早期乳腺癌［1］。因此，NAC對乳腺癌雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、C-erbB2、p53和 Ki67這些生物學(xué)標志物表達的影響就尤為重要，但是目前并沒有明確的結(jié)論。本文通過對本組病例進行分析，探討NAC對這些標志物表達的影響。

1 資料與方法

1.1 資料

選擇中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院乳腺外科2006年1月至2009年8月的初治乳腺癌患者64例，均為女性，年齡25～70歲，中位年齡48歲。絕經(jīng)前41例，絕經(jīng)后23例；依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）標準術(shù)前臨床分期，Ⅱ期28例，Ⅲ期36例；浸潤性導(dǎo)管癌63例，浸潤性小葉癌1例。NAC后行乳腺癌改良根治術(shù)55例，行保乳根治術(shù)9例。

1.2 病例入選標準

（1）女性，可手術(shù)乳腺癌患者。（2）NAC前未接受任何相關(guān)治療。（3）NAC前無遠處轉(zhuǎn)移病灶。（4）NAC前行乳腺腫物18G空心針穿刺活檢，病理確診為乳腺癌。（5）心肺肝腎功能正常，且無其它化療禁忌癥。（6）NAC后病理完全緩解，不能做標志物檢測者排除在外。

1.3 新輔助化療方案

采用CEF方案、T方案和TP方案。其中CEF方案32例，T方案11例，TP方案21例。CEF方案：環(huán)磷酰胺600mg/m2、表柔比星60～80mg/m2、替加氟650mg/m2或 5-氟尿嘧啶 500mg/m2；T方案：多西他賽75mg/m2；TP方案：多西他賽75mg/m2、順鉑40 mg/m2。21d為一個化療周期。完成2個周期者26例，3個周期者7例，4個周期者30例，6個周期者1例。

1.4 檢測方法及結(jié)果判定

1.4.1 免疫組化SP法檢測ER、PR、p53和Ki67均為核染色，陽性細胞核≥10%為（+），<10%為（-）；C-erbB2定位于細胞膜，沒有染色或少于30%腫瘤細胞染色為陰性（-），>30%的腫瘤細胞有不完整細胞膜染色為弱陽性（+），>30%的腫瘤細胞有較弱但完整的細胞膜染色為陽性（++），>30%的腫瘤細胞有較強完整的細胞膜染色為強陽性（+++）。本研究把免疫組化法結(jié)果為（-）和（+）者看作C-erbB2表達陰性，即HER-2基因無擴增，（++）及（+++）者看作 C-erbB2表達陽性，即HER-2基因擴增，需進一步行FISH檢測。

1.4.2 FISH檢測：檢測HER-2基因的擴增水平。統(tǒng)計Ratio值（Ratio值=30個細胞核中紅信號總數(shù)/綠信號總數(shù)）。Ratio<1.8為陰性，提示HER-2基因無擴增；Ratio>2.2為陽性，提示HER-2基因擴增；Ratio在1.8～2.2時，選擇增加計數(shù)細胞至100個，或重做FISH檢測來判斷最終結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。采用四格表資料的χ2檢驗，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Biomarker Pre-NAC Post-NACPPR

（+） 26 37 0.044（-） 34 23

Ki67

（+） 33 15 0.001（-） 27 45

2.1 新輔助化療后病例情況

NAC后，有4例（6.25%）達到病理完全緩解，需排除在實驗之外，其余60例進入實驗組。

2.2 新輔助化療前后ER的表達及變化

NAC前后ER表達陽性的分別有17例（28.3%）、22例（36.7%），陰性的分別有 43例（71.7%）、38例（63.3%）。共有13例（21.7%）ER表達改變，其中有4例（6.7%）陽性變?yōu)殛幮裕?例（15%）陰性變?yōu)殛栃浴＝y(tǒng)計分析結(jié)果示NAC前后ER表達無顯著性差異（P=0.436）。

2.3 新輔助化療前后PR的表達及變化

NAC前后PR表達陽性的分別有26例（43.3%）、37例（61.7%），陰性的分別有 34例（56.7%）、23例（38.3%）。共有15例（25%）PR表達狀態(tài)改變，其中有2例（3.3%）陽性變?yōu)殛幮裕?3例（21.7%）陰性變?yōu)殛栃浴＝y(tǒng)計分析結(jié)果示，NAC前后PR表達改變有統(tǒng)計學(xué)意義，NAC后PR陽性率升高（P=0.044）。見表1。

2.4 新輔助化療前后C-erbB2的表達及變化

NAC前后C-erbB2表達陽性的分別有18例（30%）、21例（35%），陰性的分別有42例（70%）、39例（65%）。表達陽性的都已行進一步的FISH檢測，其中NAC前免疫組化檢測C-erbB2表達陽性的有37例，F(xiàn)ISH確認后有18例。NAC后免疫組化檢測C-erbB2表達陽性的有39例，F(xiàn)ISH確認后有21例。免疫組化檢測的準確率為51.3%。統(tǒng)計分析結(jié)果示NAC前后C-erbB2表達無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.697）。

2.5 新輔助化療前后p53的表達及變化

NAC前后p53表達陽性的分別有18例（30%）、11例（18.3%），陰性的分別有42例（70%）、49例（81.7%）。共有9例（15%）p53表達狀態(tài)改變，其中有8例（13.3%）陽性變?yōu)殛幮裕?例（1.7%）陰性變?yōu)殛栃浴＝y(tǒng)計分析結(jié)果示NAC前后p53表達無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.2）。

2.6 新輔助化療前后Ki67的表達及變化

NAC前后Ki67表達陽性的分別有33例（55%）、15例（25%），陰性的分別有27例（45%）、45例（75%）。共有18例（30%）Ki67表達狀態(tài)改變，其中有15例（25%）陽性變?yōu)殛幮裕?例（5%）陰性變?yōu)殛栃浴＝y(tǒng)計分析結(jié)果示NAC前后Ki67表達改變有統(tǒng)計學(xué)意義，NAC后Ki67表達下降（P=0.001）。見表 1。

3 討論

乳腺癌NAC具有降低乳腺癌分期、減少手術(shù)范圍、評價腫瘤對藥物敏感性等特點［2］。而乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67的表達對于內(nèi)分泌治療、化療、生物治療等的選擇及療效的預(yù)測有重要意義。因此，有必要了解NAC對乳腺癌ER、PR、C-erbB2、p53和Ki67表達的影響。

乳腺癌是激素依賴性腫瘤，它的生長受雌激素和孕激素調(diào)控，多數(shù)乳腺癌組織均有其受體表達，陽性說明腫瘤分化程度高，惡性程度低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移慢，對內(nèi)分泌治療敏感性高，預(yù)后好。

本研究顯示，NAC后ER的表達改變沒有統(tǒng)計學(xué)意義，而PR陽性率升高，改變有統(tǒng)計學(xué)意義。雖然NAC后ER和PR表達的改變情況仍存在爭議，但個體病例的改變是存在的。本研究中ER和PR各有21.7%、25%的表達有所改變。這可能是由于所有腫瘤細胞都來自分化的乳腺細胞，均表達激素受體，所以激素受體狀態(tài)的改變可能是治療過程中藥物誘導(dǎo)了增殖的腫瘤細胞重新表達激素受體［3］。

在以前發(fā)表的研究中，NAC后ER、PR的表達改變率范圍分別為2%～17%和18%～58%［4］。與我們得出的結(jié)論相比，PR是符合的，ER高于該范圍。有研究顯示ER的改變?yōu)?%，其研究中病例的中位年齡為58歲，高于本研究10歲，患者的雌激素水平與絕經(jīng)情況可能與我們較高的ER改變率有關(guān)。

Kasami等［5］的研究結(jié)果NAC后PR的改變有統(tǒng)計學(xué)意義，與本研究一致。但其PR的改變趨勢是陽性率下降，而本研究是陽性率升高。對于這種差異，我們認為本研究的結(jié)論是有根據(jù)的。對于激素受體狀態(tài)的改變，除了藥物誘導(dǎo)，治療期間腫瘤細胞的選擇性克隆也是一個原因，即激素受體陽性或者陰性的細胞選擇性存活。一般來說，激素受體陰性的細胞可能對化療更加敏感，所以化療期間，陽性的細胞得以存活，造成了化療后的陽性率升高。同時，與本研究相比，Kasami等研究中的病例伴有局部浸潤或遠處轉(zhuǎn)移，這也可能是造成PR陽性率改變不同的原因。

NAC后ER仍然可以預(yù)測內(nèi)分泌治療的反應(yīng)，同時ER狀態(tài)的改變也沒有統(tǒng)計學(xué)意義，所以NAC并不會引起后續(xù)的化療抵抗和激素治療抵抗［5］。而對于NAC前后激素受體狀態(tài)改變的患者，無論前后，只要激素受體有陽性，術(shù)后就應(yīng)輔以內(nèi)分泌治療，這可以提高患者的無病生存率和總生存率［6］。

Her-2是一種原癌基因，對細胞的分化、增殖發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，在20%～30%的乳腺癌中明顯擴增。其蛋白產(chǎn)物C-erbB2的過量表達常預(yù)示著腫瘤的惡性程度高，對內(nèi)分泌治療反應(yīng)差，易復(fù)發(fā)和短存活期。Her-2可作為判斷乳腺癌預(yù)后的一個獨立指標，其過度表達可預(yù)測乳腺癌對以Her-2為治療靶向的敏感性。現(xiàn)在，有兩個常用的方法來確定它的狀態(tài)，就是免疫組化和FISH。當(dāng)免疫組化顯示C-erbB2表達陽性時，會存在假陽性的可能，所以應(yīng)進一步行FISH檢測確認。本研究顯示免疫組化檢測C-erbB2表達陽性時的準確率為51.3%，如果僅僅應(yīng)用免疫組化，一些病例的結(jié)果可能將出現(xiàn)改變，會影響進一步治療的選擇和對預(yù)后的評價。所以在臨床應(yīng)用中，當(dāng)C-erbB2表達陽性時，應(yīng)用FISH是很必要的。本研究結(jié)果顯示，NAC后C-erbB2的表達狀態(tài)是沒有改變的，這與Kasami等［5］的研究結(jié)果是一致的。一些研究對此進行了解釋，在腫瘤的起源中，Her-2過表達和基因擴增的改變比較晚，所以在腫瘤的轉(zhuǎn)移和化療過程中Her-2仍然保持不變［7］。

p53是一種抑癌基因，其p53陽性的腫瘤更具侵襲性，對蒽環(huán)類化療藥物的敏感性減低，同時影響無病生存率和總生存率，提示預(yù)后不良［8］，被認為是判斷乳腺癌預(yù)后的重要指標。本研究結(jié)果表明，NAC前后P53的表達狀態(tài)的改變沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但是陽性率有所降低。這與Arens等［9］的研究結(jié)果是一致的。

Ki67是一種與細胞有絲分裂密切相關(guān)，能反映細胞增殖狀態(tài)的核抗原，與腫瘤的發(fā)生、浸潤、種植與轉(zhuǎn)移過程相關(guān)。Ki67的表達率越高，反映腫瘤增殖越活躍，同時腫瘤對蒽環(huán)類聯(lián)合泰素的NAC反應(yīng)越好［10］。如果NAC前Ki67≥20%，同時激素受體陰性，這是預(yù)測NAC后達到cCR的有力指標［11］。本研究結(jié)果顯示，NAC后Ki67的表達下降，陽性率降低，有統(tǒng)計學(xué)意義。這與Faneyte等［7］的報道是一致的。NAC后Ki67的表達下降與瘤體縮小及周期中癌細胞的數(shù)量減少有關(guān)，下降的越明顯，預(yù)示著NAC的療效越好，尤其對于沒有達到PCR的患者，NAC后Ki67的水平是預(yù)測無病生存率和總生存率的有力指標［12］。

當(dāng)然，影響NAC前后這些生物學(xué)標志物改變的因素有很多，比如樣本的選擇，穿刺病理的取材，腫瘤組織不同部位的生物學(xué)差異，免疫組化的技術(shù)，實驗者的主觀因素，化療方案的應(yīng)用等等。雖然在本研究中，已經(jīng)采取隨機選擇病例，同一病理師進行評定，應(yīng)用標準的化療方案等措施，并在實驗中仔細操作，但由于樣本的地域差異，樣本量相對較小，腫瘤的異源性，客觀條件局限等因素，本研究的結(jié)論可能還存在一定的片面性，有待進一步的研究。

［1］von Minckwitz G，Blohmer JU，Raab G，et al.In vivo chemosensitivity-adapted preoperative chemotherapy in patients with early-stage breast cancer：the GEPARTRIOpilot study［J］.Ann Oncol，2005，16（1）：56-63.

［2］Kaufmann M，Hortobagyi GN，Goldhirsch A，et al.Recommendations from an international expert panel on the use of neoadjuvant（prima－ry）systemic treatment of operable breast cancer：an update ［J］.JClin Oncol，2006，24（12）：1940-1949.

［3］Tacca O，Penault-Llorca F，Abrial C，et al.Changes in and prognostic value of hormone receptor status in a series of operable breast cancer patients treated with neoadjuvant chemotherapy［J］.The Oncologist，2007，12（6）：636-643.

［4］Connor C，Tawfik O，Joyce A，et al.Acomparison of prognostic tumor markers obtained on image-guided breast biopsies and final surgical specimens［J］.Am JSurg，2002，184（4）：322-324.

［5］Kasami M，Uematsu T，Honda M，et al.Comparison of estrogen receptor，progesterone receptor and Her-2status in breast cancer pre-and postneoadjuvant chemotherapy［J］.The Breast，2008，17（5）：523-527.

［6］Hirata T，Shimizu C，Yonemori K，et al.Change in the hormone receptor status following administration of neoadjuvant chemotherapy and its impact on the long-term outcome in patients with primary breast cancer［J］.Br JCancer，2009，101（9）：1529-1536.

［7］Faneyte I，Schrama J，Peterse J，et a1.Breast cancer response to neoadjuvant chemotherapy predictive markers and relation with outcome［J］.Br JCancer，2003，88（3）：406-412.

［8］Hensel M，Schneeweiss A，Sinn H，et al.P53is the strongest predictor of survival in high-risk primary breast cancer patients undergoing high-dose chemotherapy with autologous blood stem cell support［J］.Int JCancer，2002，100（3）：290-296.

［9］Arens N，Bley U，Hildenbrand R.HER2/neu，p53，Ki67，and hoemone receptors do not change during neoadjuvant chemotherapy in breast cancer［J］.Virchows Arch，2005，446（5）：489-496.

［10］Xu L，Liu Y，Ye J，et al.Relationship between Ki67expression and tumor response to neoadjuvant chemotherapy with anthracyclines plus taxanes in breast cancer［J］.Zhonghua Wai Ke Za Zhi，2010，48（6）：450-453.

［11］Petit T，Wilt M，Velten M，et al.Comparative value of tumour grade，hormonal receptors，Ki-67，HER-2and topoisomerase IIalpha status as predictive markers in breast cancer patients treated with neoadjuvant anthracycline-based chemotherapy ［J］.Eur JCancer，2004，40（2）：205-211.

［12］Jones R，Salter J，A′Hern R，et al.The prognostic significance of Ki67before and after neoadjuvant chemotherapy in breast cancer［J］.Breast Cancer Res Treat，2009，116（1）：53-68.

（編輯 孫憲民，英文編輯 趙傳勝）

The Effect of Neoadjuvant Chemotherapy on Expressions of ER，PR，C-erbB2，p53and Ki67in Breast Cancer

GUOA-yao1，YUPeng-fei1，YAOFan1，JINFeng1
（1.Department of Breast Surgery，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo study the effect of neoadjuvant chemotherapy（NAC）on expressions of ER、PR、C-erbB2、p53and Ki67in breast cancer.MethodsSixty-four patients

neoadjuvant chemotherapy.Expressions of ER、PR、C-erbB2、p53and Ki67in breast cancer were measured by immunohistochemistry（IHC）.When the expression of C-erbB2was positive，F(xiàn)ISHwas recommended to verify the level of Her-2gene amplification.ResultsThe expressions of ER，C-erbB2，p53had changed in 13，7，9cases after NAC，and there was no statistical significance （P>0.05）.The expressions of PR，Ki67had changed in 15，18cases after NAC，and there was statistical significance（P<0.05）.ConclusionNACcan improve the expression of PRand reduce the expression of Ki67.There is no effect in ER，C-erbB2and p53.When IHCindicates the expression of C-erbB2was positive，F(xiàn)ISHis recommended.

neoadjuvant chemotherapy；breast cancer；ER；PR；C-erbB2；p53；Ki67

R737.9

A

0258-4646（2010）12-1051-04

郭阿垚（1983-），男，碩士研究生.

金鋒，E-mail：jinfeng66cn@hotmail.com

2010-06-21