烏頭堿含量測定方法的建立

付 宇，高 建，趙 宇，孫艷芳，劉秀梅，丁笑麗

（黑龍江省疾病控制中心，黑龍江 哈爾濱150030）

烏頭堿是一種二萜生物堿。存在于川烏、草烏、附子等植物中的主要有毒成份。民間常用草烏、川烏等植物來泡制藥酒。烏頭堿為二元酯類化合物，分子式為C34H47NO11，水溶液對石蕊呈堿性反應。溶于無水乙醇、乙醚和水，微溶于石油醚。易水解失去一分子乙酸，毒性即降低，進一步水解除去一分子苯甲酸生成烏頭胺，，臨床上用于緩解癌痛，尤其適用于消化系統癌痛；外用時能麻痹周圍神經末梢，產生局部麻醉和鎮痛作用；有消炎作用，還有發汗作用。烏頭堿對各種神經痛和痛風有鎮痛作用。近些年來，以烏頭堿為主要功效成分的保健食品日益增多，但是樣品基質成分相對復雜，本文參考相關文獻報道在大量實驗的基礎上，對不同種類的保健食品處理方法進行摸索，調節酸堿度，經濃氨試液-甲醇（2∶20）混合溶液處理，以乙醚振搖萃取，干擾少，峰形好，減少了對色譜柱的污染。適用于各類保健食品的測定。

1 實驗部分

1.1 儀器及試劑

高效液相色譜儀（紫外檢測器）；恒溫水浴鍋。

甲醇（色譜純）；石油醚（30～60℃）、氨水、冰乙酸，均為分析純。

烏頭堿標準溶液：精密稱取烏頭堿標準品10mg置于10 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解并定容至刻度，混勻，此溶液濃度為1.0mg·mL-1。臨用時用甲醇稀釋為50μg·mL-1的標準使用液。

烏頭堿標準溶液系列：分別吸取標準使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得濃度為0.0、5.0、10.0、15.0、20.0，25.0、50.0μg·mL-1標準系列。

1.3 儀器條件

色譜柱：DiamonsilTMC18柱，150×4.6mm，5μm；

柱溫：室溫；

流動相：甲醇-0.1%三乙胺（70∶30）為流動相；

流速：1.2mL·min-1；

進樣量：10μL；

檢測波長：232nm。

1.4 樣品處理

稱取試樣2g，置于干燥燒杯中，精密加入濃氨試液-甲醇（2∶20）混合溶液50mL，冷浸1h后加熱回流1h，放冷，搖勻，過濾，將濾液蒸干，加水l0mL使殘渣溶解，置于分液漏斗中加乙醚振搖萃取3次，乙醚用量依次為10、10、5mL，收集乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5mL容量瓶中，搖勻，定容，用濾膜過濾備用。

2 結果與討論

2.1 回歸方程與最低檢出限

用濃度為 0.0、5.0、10.0、15.0、20.0，25.0、50.0μg·mL-1的標準溶液進樣分析，測得標準系列線性回歸方程為y=-12419.30x+8469.37，相關系數r=0.9997，烏頭堿在0～50μg·mL-1的線性范圍內最低檢出限為0.5μg·mL-1。

2.2 精密度及回收率

對同一樣品連續測定10次，結果RSD為6.7%。以3種樣品為本底，分別加入一定量的標準溶液，回收率為85.8%～92.7%。見表1。

表1 烏頭堿回收率試驗結果Tab.1 Experimental results of aconitine recovery

從1表中數據可知，此方法回收率好，準確度較高；在實際工作中具有較高的可行性。

2.3 測定方法的選擇

烏頭堿常見的測定方法是化學法和薄層掃描法[2]等，這些方法操作比較繁瑣，且操作時間較長，容易受到干擾。高效液相色譜法分離速度快，檢測靈敏度高，操作簡便，應用范圍廣，分離效率高，峰形正常，線性范圍較寬，選擇性好，重現性好，特別適合復雜樣品的分離測定，已經成為應用最為廣泛和有效的分離分析手段。

2.4 樣品提取條件的選擇

樣品用濃氨試液-甲醇混合溶液處理，可有效去除試樣中其他物質，減少色譜干擾。測定結果見圖1、2。

圖1 標樣譜圖Fig.1 Spectrogram of standard samples

圖2 樣品譜圖Fig.2 Spectrogram of samples

由圖1、2可見，文中所述樣品制備方法可有效的去除保健食品中復雜基質的干擾，純化了樣品溶液，減少了其對色譜柱及檢測器的污染。

3 結論

通過上述實驗結果可以看出，此方法快速簡便，準確率高，適合保健食品中的烏頭堿的分析測定。

［1］中華人民共和國藥典（一部制川烏）［M］.化學工業出版社，2005.

［2］王浴銘.活血壯筋丹中烏頭堿含量的雙波長薄層掃描法測定［J］.中成藥研究.