雙花復春顆粒提取工藝研究

王洛臨， 羅文匯

(廣東省中醫研究所，廣東廣州510095)

雙花復春顆粒由金銀花、黃柏、黃芩、赤芍、大黃等藥材組成，具有清熱解毒，降火排膿，化濕行瘀等功效，臨床用于治療痤瘡、毛囊炎、膿皰瘡、脂溢性皮炎、濕疹等皮膚病。根據處方中各藥材所含的成分以及藥理作用分析，黃柏、黃芩分別單獨提取干浸膏，金銀花等其它藥材采用水提醇沉提取干浸膏。為確定合理的提取工藝條件，保證該制劑的質量，采用正交試驗設計與單因素分析方法，進行了提取工藝的優選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀、二極管陣列檢測器、二元泵、Agilent1100工作站(美國安捷倫公司);Bp211D電子分析天平(德國，sartorius);RE－52AA旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠);MYB型調溫電熱套(2 000 mL，浙江新華醫療器械廠);ZK－82A真空干燥箱(上海市實驗儀器總廠)。

1.2 試藥 小檗堿對照品(批號:110713－200208)、黃芩苷對照品(批號:111595－200604)和芍藥苷對照品(批號:110736－200732)均由中國藥品生物制品檢定所購得;雙花復春顆粒所用藥材均由廣東廣弘藥業有限公司購得;所用化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 黃芩提取工藝優選

2.1.1 加水量的篩選 試驗參照《中國藥典》2005年版一部中雙黃連顆粒項下黃芩部分的制法，即黃芩(黃芩苷含量為10.77%)加水提取3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，試驗只需對未明確的加水量進行單因素比較篩選。并參照雙黃連顆粒中黃芩苷含量測定法，測定各加水量提取所得干浸膏中黃芩苷的含量，計算黃芩苷提取率。結果見表1。

表1 黃芩不同加水量提取結果

結果表明:試驗2和試驗3黃芩苷提取率無差異，因此，黃芩提取加水量確定為第1次加12倍量水，第2、3次分別加10倍量水。

2.1.2 最佳提取工藝條件驗證 按最佳工藝條件提取3批，分別收集提取液，減壓濃縮，真空干燥，測定干浸膏中黃芩苷含量，計算干浸膏得率和黃芩苷提取率，結果見表2。

表2 黃芩提取驗證結果

2.2 黃柏提取工藝優選

2.2.1 因素水平的設定 根據藥材成分性質，影響提取因素有乙醇濃度、加液量、回流時間、回流次數，其因素水平設計見表3。

表3 因素水平表

2.2.2 樣品制備 取黃柏藥材(小檗堿含量8.6%)9份，每份60 g，按L9(34)正交試驗安排提取，減壓回收乙醇濃縮，真空干燥，得干浸膏，并計算干浸膏得率。

2.2.3 小檗堿含量測定 取研細的干浸膏0.1 g，照《中國藥典》2005年版一部黃柏項下含量測定進行，計算小檗堿提取率。結果見表4、5。

表4 正交設計試驗結果

表5 方差分析表

結果表明:因素C(回流次數)對試驗結果影響顯著，因素A(乙醇濃度)對試驗結果有一定影響，而因素B(溶媒用量)和因素D(回流時間)對試驗結果的影響不顯著，各因素的主次順序為C＞A＞D＞B，考慮到節約成本，最優提取工藝確定為黃柏用60%乙醇回流提取3次，每次加6倍乙醇，回流1 h;即 A2B1C3D1。

2.2.4 最佳提取工藝條件驗證 稱取每份120 g黃柏藥材，按最佳工藝條件制備3份樣品，測定干浸膏中小檗堿含量，并計算平均干浸膏得率和小檗堿提取率。結果見表6。

2.3 金銀花、赤芍等其余藥材提取工藝優選

2.3.1 因素水平的設定 影響藥材水提取的主要因素有加水量、煎煮時間和煎煮次數，其因素水平設計見表7。

表6 黃柏最佳提取工藝驗證結果表

表7 因素水平表

2.3.2 樣品的制備 取金銀花、赤芍(芍藥苷含量3.93%)等其余藥材9份，每份162 g，按L9(34)正交試驗安排提取，減壓濃縮，真空干燥，得干浸膏，并計算干浸膏得率。

2.3.3 干浸膏中芍藥苷含量測定

2.3.3.1 芍藥苷含量測定 取研細的干浸膏0.5 g，照《中國藥典》2005版一部赤芍項下的含量測定進行，計算芍藥苷提取率。結果見表8、9。

表8 正交設計試驗結果

表9 方差分析表

結果表明:因素A(加水量)對試驗結果影響顯著，因素C(煎煮次數)對試驗結果有一定影響，而因素B(煎煮時間)對試驗結果的影響不顯著，各因素的主次順序為A＞C＞B，最優提取工藝為金銀花、赤芍等其余藥材分別加12倍水提取2次，每次1.5 h;即A2B2C2。

2.3.3.2 標準曲線的繪制 分別注入0.862 8、2.157、3.451 2、4.314、6.471 μg 芍藥苷標準品的溶液，測得峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，其回歸方程為Y=1 734.990 52X－374.006 48，相關系數r=0.999 49。

2.3.3.3 陰性對照溶液的制備及結果考察 稱取本處方中除赤芍、黃芩、黃柏外的各味藥材，加水煎煮2次，每次1 h，制備干浸膏。按上述測定法制備樣品，并注入色譜儀。結果表明，陰性對照溶液在芍藥苷相應位置無吸收，處方中其它藥味對本測定無干擾。

2.3.4 最佳提取工藝條件驗證 按處方比例稱取每份162 g藥材，按最佳工藝條件制備3份樣品，計算平均干浸膏得率和小檗堿提取率。結果見表10。

表10 最佳提取工藝驗證結果表

3 討論

處方中藥材含有小檗堿等堿性成分和黃芩苷、大黃酸等酸性成分。因此，將處方中黃柏采用單獨提取干浸膏后再混入，可避因共煎而引起上述成分在提取過程中產生沉淀而被作為雜質除去。

黃芩、黃柏和金銀花、赤芍等其余藥材的提取工藝驗證結果表明，提取工藝參數穩定。由于水提取液中含有大量植物碎片、淀粉等雜質以及黃芩苷具有幾乎不溶于冷水，難溶于冷乙醇的特點。因此，黃芩單獨提取干浸膏后混入，可避免黃芩苷因醇沉而被作為雜質除去。為本方的下一步純化奠定了良好的基礎。

［1］蔣國良，吳 珂.黃柏提取工藝的優化［J］.醫藥導報，2007，26(7):792－793.

［2］鄭虎占，董澤宏，余 靖主編.中藥現代研究與應用［M］.北京:學苑出版社，1997.

［3］中國藥典［S］.一部.2005.