藏藥十六味杜鵑花丸中烈香杜鵑的定性、定量分析方法研究

劉志勤

(青海省人民醫(yī)院藥劑科，青海西寧810007)

十六味杜鵑花丸是由烈香杜鵑、石榴子、豆蔻、紅花、力嘎都等十六味藏藥制成的一種復(fù)方藏藥制劑。具有益氣消食，利尿止咳的功效。藏醫(yī)院常用于治療氣管炎，浮腫，消化不良，腹脹疼痛等癥狀。方中君藥烈香杜鵑為常用藏藥［1］，音譯“塔勒”，來源于杜鵑花科植物烈香杜鵑Pleurospermum hookeri.C.B.Clarke var.thomsonii C.B.Clarke的花和葉，藥理作用顯示烈香杜鵑揮發(fā)油有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘和抑菌作用，對于治療氣管炎和肺氣腫有特效。《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》1992年版 藏藥 第一冊［2］和《青海藏藥標(biāo)準(zhǔn)》［3］中均有收載，十六味杜鵑花丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有常規(guī)檢驗(yàn)，不能很好地控制該制劑的質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)采用TLC對十六味杜鵑花丸中君藥烈香杜鵑進(jìn)行了薄層鑒別，用GC法測定了該制劑中烈香杜鵑揮發(fā)油的有效成分芐基丙酮的含量，文獻(xiàn)報(bào)道芐基丙酮占烈香杜鵑揮發(fā)油的40% ～50%，以此作為該制劑的質(zhì)量控制的指標(biāo)，為提高藏藥制劑的質(zhì)量控制方法提供了一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

CP-3800型氣相色譜儀(CP-8410自動(dòng)進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測器，Varian色譜工作站);SB2200型超聲波清洗儀(上海必勝信儀器廠)。芐基丙酮對照品(由青海省藥品檢驗(yàn)所提供，F(xiàn)luka A G CH-9470 Butehs)，烈香杜鵑藥材(由青海省金訶藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)青海省藥品檢驗(yàn)所副主任藥師楊鳳梅鑒定為杜鵑花科植物烈香杜鵑Pleurospermum hookeri.C.B.Clarke var.thomsonii C.B.Clarke，的花、葉和嫩枝)，十六味杜鵑花丸樣品3批(分別由青海省黃南州藏醫(yī)院提供，批號20070801、青海省藏醫(yī)院提供，批號20080312、青海省果洛州藏醫(yī)院提供，批號20080614)，硅膠G薄層板(青島海洋化工有限公司)。試劑均為分析純，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 烈香杜鵑的薄層定性鑒別

取本品5 g，研細(xì)，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取烈香杜鵑對照藥材1 g，同法制成對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛溶液，于105℃烘烤至出現(xiàn)斑點(diǎn)。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 十六味杜鵑花丸中烈香杜鵑的TLC圖譜

3 芐基丙酮的含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱CP-Wax 52 CB毛細(xì)管柱(長度30 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm);柱溫:130℃，進(jìn)樣口:170℃，檢測器:170℃，載氣氮?dú)?30 mL/min;檢測器:FID;線速度:28.2 cm/s，柱流量:0.8 mL/min，按此色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分離良好。見圖2～5。

3.2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

3.2.1 分析溶液的制備

3.2.1.1 對照品溶液制備:精密稱取芐基丙酮對照品0.057 42 g，置50 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液(每1 mL含芐基丙酮為1.148 4 mg)。

圖2 十六味杜鵑花丸供試品HPLC色譜圖

圖3 芐基丙酮對照品HPLC色譜圖

圖4 烈香杜鵑藥材HPLC色譜圖

圖5 十六味杜鵑花丸陰性對照HPLC圖

3.2.1.2 供試品溶液制備:取本品研細(xì)，精密稱取2 g，精密加乙酸乙酯25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

3.2.1.3 陰性對照溶液的制備:按處方比例稱取除去烈香杜鵑的其它藥材適量，依照十六味杜鵑花丸的制備工藝和供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

3.2.2 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品貯備液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度。分別吸取上述對照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，在上述色譜條件下，測定，計(jì)算，以對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，對照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程:Y=4.642 1×107X－6.358 6×104，r=0.999 6。表明芐基丙酮在0.011 484～0.057 42 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.2.3 精密度試驗(yàn)

精密量取對照品貯備液5 mL置100 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻(每1 mL含芐基丙酮為57.42 μg)。精密吸取1 μL，注入氣相色譜儀，結(jié)果平均峰面積1 264 223，RSD 為0.23%。

3.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(20070801)的樣品6份，按3.2.1.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下測定，計(jì)算芐基丙酮的含量，結(jié)果平均含量0.301 9 mg/g，RSD為0.3%。

3.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液(每1 mL含芐基丙酮57.42 μg)1 μL，注入氣相色譜儀，每隔1 h測定峰面積值，以對照品峰面積計(jì)算RSD為1.67%，表明芐基丙酮在4 h內(nèi)積分值基本穩(wěn)定，但隨時(shí)間延長峰面積也隨之增加，應(yīng)在2 h內(nèi)測定完。

3.2.6 加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的樣品6份(批號20070801，芐基丙酮含量0.301 9 mg/g)1 g，分別精密加入芐基丙酮對照品溶液(精密量取對照品貯備液0.6、1.2、2 mL分別置100 mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻)25 mL，按3.2.

1.2 項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3.2.7 樣品測定

取不同藏醫(yī)院生產(chǎn)的樣品，按3.2.1.2項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，精密吸取該溶液1 μL，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定，計(jì)算芐基丙酮的含量，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

4 討論

4.1 現(xiàn)藏醫(yī)所用的“塔勒”均為杜鵑花科的常綠、小葉型具鱗片杜鵑，已知有17種以上［4］，常用的有烈香杜鵑、大阪山杜鵑、頭花杜鵑和千里香杜鵑，由于地區(qū)不同藏醫(yī)在使用上也有所不同，因此廠家投料時(shí)應(yīng)定好種，把好質(zhì)量關(guān)。

4.2 曾用聚乙二醇填充柱進(jìn)行分離，樣品中芐基丙酮峰不能與其它峰很好的分離后改用CP-Wax 52 CB毛細(xì)管柱，進(jìn)行分離，取得了比較好的分離效果。

4.3 由于方中藥味較多，曾試用乙醚、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(30～60℃)等多種溶劑進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明乙酸乙酯、丙酮超聲提取30 min的提取率較高。

［1］青海省藥品檢驗(yàn)所、青海省藏醫(yī)藥研究所編.中國藏藥［M］.第1卷.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1996:202.

［2］中國衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):藏藥［S］.第1冊.1995:78，205.

［3］青海省藏藥標(biāo)準(zhǔn)［S］.1992:45.

［4］中國科學(xué)院西北高原生物研究所編.藏藥志［M］.西寧:青海人民出版社，1991:148.