大皰性類天皰瘡皮損中Th1/Th2趨化因子及其受體的表達①

耿士玲 單士軍 吳 劍 王志華 肖 汀 高興華 陳洪鐸

（中國醫科大學附屬第一醫院皮膚科,沈陽 110001）

大皰性類天皰瘡皮損中Th1/Th2趨化因子及其受體的表達①

耿士玲 單士軍 吳 劍 王志華 肖 汀 高興華 陳洪鐸

（中國醫科大學附屬第一醫院皮膚科,沈陽 110001）

目的:研究Th1趨化因子CXCL9/MIG、CXCL10/IP-10、CXCL11/I-TAC和Th2型趨化因子CCL22/MDC及其受體CXCR3、CCR4在大皰性類天皰瘡（BP）皮損中的表達。方法:應用免疫組化方法檢測30例 BP患者皮損及20例正常皮膚中CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCL22、CXCR3和CCR4的表達。結果:BP皮損中4種趨化因子及其受體的表達均高于正常皮膚。其中,Th1趨化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11及其受體CXCR3的陽性率分別為50%（15/30）、46.7%（14/30）、46.7%（14/30）和53.3%（16/30）,Th2趨化因子CCL22及其受體 CCR4的陽性率分別為66.7%（20/30）、56.7%（17/30）。正常對照中 CXCL9、CXCL10、CXCL11及其受體CXCR3的陽性率分別為10.0%（2/20）、10.0%（2/20）、15.0%（3/20）和15.0%（3/20）,CCL22及其受體CCR4的陽性率分別為20.0%（4/20）和25.0%（5/20）。結論:Th1趨化因子 CXCL9、CXCL10、CXCL11和Th2趨化因子CCL22及其受體CXCR3和CCR4在BP皮損中表達升高,提示它們可能在BP的發病機制中起一定作用。

大皰性類天皰瘡;CXCL9;CXCL10;CXCL11;CCL22;CXCR3;CCR4

大皰性類天皰瘡（bullous pemphigoid,BP）是一種好發于老年人的自身免疫性大皰性皮膚病,其皮損中有大量的Th2淋巴細胞浸潤。多種趨化因子參與了BP皮損部位Th2細胞的聚集。有研究表明[1,2],在BP皮損中,不僅有Th2趨化因子TARC及其受體CCR4的表達,也有Th1趨化因子受體CXCR3的表達。我們檢測了30例BP患者皮損中的Th1趨化因子 CXCL9、CXCL10、CXCL11及其受體CXCR3和Th2趨化因子CCL22及其受體CCR4的表達,探討這些趨化因子及其受體在BP發病機制中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例與標本 30例BP患者均來自中國醫科大學附屬第一醫院皮膚科,經臨床、組織病理、直接和間接免疫熒光檢查確診為大皰性類天皰瘡。其中女11例,男 19例。年齡28～87歲,平均63.3±16.9歲。取材部位軀干8例,四肢22例。于常規局麻下取皮損活檢,深達皮下,用OCT復合物（Sakura,USA）包埋,凍存于-80℃的冰箱中待檢。正常對照皮膚20例,系我院整形外科非皮膚疾病的患者。女9例,男11例。年齡50～76歲,平均62.6±8.9歲。

1.1.2 試劑 兔抗人CXCL11/I-TAC多抗、山羊抗人CXCR3多抗、山羊抗人CXCL9/MIG多抗、山羊抗人CXCL10/IP-10多抗、山羊抗人CCL22/MDC多抗、山羊抗人CCR4多抗,購自Santa Cruz Biotechnology,USA。山羊抗兔IgG的SP試劑盒、兔抗山羊IgG的SP試劑盒,購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 方法 S-P法免疫組化染色:按SP試劑盒操作說明。角質形成細胞及真表皮浸潤細胞和/或細胞間質呈桔紅色染色為陽性。染色結果分析以染色強度為準,無色為（-）,細胞和/或細胞間質染成淺桔紅色為（+）、桔紅色為（++）、深桔紅色為（+++）,所有強度分級均由同一實驗者操作。統計學分析采用非參數檢驗,P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

BP皮損中CXCL9、CXCL10主要在真皮乳頭層表達,乳頭層血管內皮細胞也有表達（圖A1和B1）。CXCL11和CCL22主要表達于基底層細胞胞漿、細胞間質和真皮乳頭層,尤其是淋巴細胞浸潤部位,乳頭層血管內皮細胞也有表達（圖C1和D1）。CXCR3和CXCR4主要表達于表皮下大皰下方、真皮乳頭層浸潤淋巴細胞胞膜（圖E1和F1）。具體的表達部位見表1。正常對照皮膚不表達上述趨化因子及受體（圖A2-F2）。

表1 4種趨化因子及其受體在BP皮損中的表達部位（n=30）Tab.1 The expression sites of four kinds of chemokines and their recep tors in BP lesions（n=30）

在所有30例BP皮損中,14例表達CXCL11;其中3例主要表達于表皮的基底細胞層;6例主要表達于真皮乳頭層;5例在表皮基底細胞層和真皮乳頭層均有明顯表達。20例表達CCL22;其中7例主要表達于表皮的基底細胞層;10例主要表達于真皮乳頭層;3例表皮基底細胞層和真皮乳頭層均有明顯表達。CXCL9、CXCL10、CXCR3和CCL22陽性的BP皮損共分別為15、14、16和17例,均表達于真皮乳頭層（表1）。BP皮損中,Th1趨化因子CXCL9-11及其受體CXCR3的表達、Th2趨化因子CCL22及其受體CCR4的表達均明顯升高。與正常對照皮膚相比較,CXCL11組和CCR4組 χ2值分別為5.36和4.89,兩組P均小于 0.05;CXCL9組、CXCL10組、CXCR3及CCL22組 χ2值分別為 8.56、7.41、7.48和10.47,四組P均小于0.01（表2）。

圖1 BP皮損及正常對照皮膚中4種趨化因子及其受體免疫組化結果Fig.1 Immunohistochem istry of four kinds of chemokines and their recep tors in BP lesions and normal control skins

表2 4種趨化因子及其受體在BP皮損和正常對照皮膚中的表達Tab.2 Expressions of four kinds of chemokines and their receptors in BP lesions and normal controls

3 討論

趨化因子是能吸引白細胞發生定向運動的小分子蛋白質,包括CXC、CC、C和CX3C四個亞族。CXCL9、CXCL10和CXCL11均為Th1趨化因子,主要由活化的成纖維細胞、單核/巨噬細胞、角質形成細胞、內皮細胞和激活的T細胞合成和分泌,可以誘導CXCR3+T細胞向炎癥部位遷移,引起炎癥反應[2-4]。它們共同的受體是CXCR3,主要表達于活化的T細胞及NK細胞[5]。本研究中,CXCL9和CXCL10主要表達于真皮乳頭層和小血管,而表皮基底層細胞未見表達,我們推測CXCL9和CXCL10主要由活化的T細胞、單核細胞和內皮細胞合成和分泌。有研究表明[3,6],CXCL9和CXCL10對嗜酸性粒細胞也有趨化作用,我們推測這可能是BP皮損中有大量嗜酸性粒細胞浸潤的原因之一。

CXCL11主要表達于表皮基底細胞和真皮乳頭層,我們推測CXCL11由基底層細胞合成和分泌,呈濃度梯度向真皮淺層彌散,趨化表達CXCR3的Th1細胞。

CCL22是Th2趨化因子,主要由巨噬細胞和樹突細胞分泌,能誘導Th2細胞和樹突細胞的趨化移動。CCL22在Th2細胞向炎癥部位的補充以及Th2相關免疫反應的調節中起著重要的作用[7]。CCL22及其受體CCR4在Th2占主導的皮膚病如特應性皮炎皮損中表達升高[8]。本研究顯示,CCL22在表皮基底細胞、真皮乳頭層高表達。推測CCL22的來源主要有:（1）由角質形成細胞分泌后向真皮淺層尤其是炎細胞浸潤部位呈梯度彌散,趨化Th2細胞向真皮淺層移動。（2）在大量Th2型細胞因子的作用下,朗格漢斯細胞可分泌CCL22或CCL17,趨化Th2細胞向炎癥部位浸潤[9,10]。（3）真皮血管內皮細胞和附屬器上皮細胞分泌CCL22,引起血管和附屬器周圍炎細胞浸潤。

本研究顯示,Th1趨化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11和Th2趨化因子CCL22及其受體在BP皮損中表達升高,提示它們可能在BP的發病機制中起一定作用。

1 Kakinuma T,Wakugawa M,Nakamura Ketal.High level of thymus and activation-regulatedchemokine in blister fluid and sera ofpatientswith bullous pemphigoid[J].Br JDermatol,2003;148（2）:203-210.

2 Flier J,Boorsma D M,Bruyrmeel D Petal.The CXCR3 activating chemokines lP-10,M ig and IP-9 areexpressed in allergic butnot in irritant patch test reactions[J].JInvest Dermatol,1999;113（4）:574-578.

3 劉倫飛,鄭 敏.CXCR3及其配體與皮膚病[J].國外醫學·皮膚性病學分冊,2002;28（3）:166-169.

4 Ono S J,Nakamura T,Miyazaki Detal.Chemokines:roles in leukocyte development,trafficking,and effector function[J].JAllergy Clin Immunol,2003;111（6）:1185-1199.

5 Ruehlmann JM,Xiang R,Niethammer A Getal.Mig/CXCL9 chemokine gene therapy combines with antibody cytokine fusion protein to suppress growth and dissem ination ofmurine colon carcinoma[J].Cancer Research,2001;61（23）:8498-8503.

6 李 群,譚錦泉,黃保軍etal.IP-10和Mig通過趨化因子CXC受體3激活嗜酸性粒細胞NFAT[J].中華微生物學和免疫學雜志,2001;21（5）:510-515.

7 劉海娜,吳春玲,蔣 莉etal.系統性紅斑狼瘡患者血漿巨噬細胞衍生趨化因子水平及臨床意義[J].中華風濕病學雜志,2005;3（9）:142-144.

8 Horikawa T,Nakayama T,Hikita Ietal.IFN-gamma-inducible expression of thymus and activation-regulated chemokine/CCL17 andmacrophage-derived chemokine/CCL22 in epidermal keratinocytes and their roles in atopic dermatitis[J].Int Immunol,2002;14（7）:767-773.

9 Hashimoto S,Nakamura K,OyamaNetal.Macrophage-derived chemokine（MDC）/CCL22 produced by monocyte derived dendritic cells reflects the disease activity in patientswith atopic dermatitis[J].JDermatolSci,2006;44（2）:93-99.

10 Xiao T,Fujita H,Saeki Hetal.Thymus and activation-regulated chemokine（TARC/CCL17）produced by mouse epidermal Langerhans cells is upregulated by TNF-alpha and IL-4 and downregulated by IFN-gamma[J].Cytokine,2003;23（4-5）:126-132.

[收稿2009-08-29 修回2009-12-28]

（編輯 許四平）

Expression of Th1/Th2 chemokines and their receptors in the lesions of bullous pemphigoid

GENGShi-Ling,SHANShi-Jun,WUJian,WANGZhi-Hua,XIAOTing,GAOXing-HuaCHENHong-Duo.Department ofDermatology,theFirstAffiliatedHospital,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110001,China

Objective:To investigate the expression of Th1 chemokine CXCL9,CXCL10,CXCL11,Th2 chemokine CCL22 and their recep tors in the lesionsof bullouspemphigoid（BP）.Methods:Immunohistochemicalassaywas performed to detect theexpression ofCXCL9,CXCL10,CXCL11,CCL22 and their receptors CXCR3 and CCR4 in BP lesions and normal control skin.Results:CXCL9,CXCL10,CXCL11,CCL22,CXCR3 and CCR4were overexp ressed in BP lesions than those in normal control skin（P＜0.01）.The positive rates of CXCL9,CXCL10,CXCL11 and CXCR3 in BP lesionswere 50%（15/30）,46.7%（14/30）,46.7%（14/30）and 53.3%（16/30）,respectively.The positive rates of CCL22 and CCR4 were 66.7%（20/30）and 56.7%（17/30）.Conclusion:The overexpression of Th1 chemokine CXCL9,CXCL10,CXCL11,Th2 chemokine CCL22 and their receptorsmay play important roles in the pathogenesis of BP.

Bu llous Pemphigoid;CXCL9;CXCL10;CXCL11;CCL22;CXCR3;CCR4

R758.66

A

1000-484X（2010）03-0270-03

①本文受國家自然科學基金（30400389）、教育部高等學校博士學科點專項科研基金（20060159014）、教育部創新團隊（IRT0760）、遼寧省創新團隊（2008T192）資助

耿士玲（1979年-）,女,在讀碩士,主要從事皮膚免疫細胞與趨化因子的研究;

及指導教師:肖 汀（1971年-）,男,博士,副主任,主任醫師,教授,碩士生導師,主要從事皮膚免疫細胞與趨化因子的研究,E-mail:cmuxt@126.com。

·實用臨床免疫學·