乳腺癌Ki-67和p53表達分析及其意義

賈實，張文海，李建一，張揚

（中國醫(yī)科大學 附屬盛京醫(yī)院乳腺外科，沈陽 110004）

乳腺癌Ki-67和p53表達分析及其意義

賈實，張文海，李建一，張揚

（中國醫(yī)科大學 附屬盛京醫(yī)院乳腺外科，沈陽 110004）

目的 分析研究Ki-67和p53在雌激素受體（ER），孕激素受體（PR）及人表皮生長因子受體2（c-erbB-2）受體均為陰性的乳腺癌中的表達、與臨床分期的關(guān)系及其臨床意義。方法 選取原發(fā)性乳腺癌184例，采用免疫組化法分析Ki-67和p53的表達。χ2檢驗進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌中Ki-67表達率為29.1%，p53表達率為25.9%；而Ⅲ期和Ⅳ期中Ki-67的表達為61.5%，p53的表達率為46.1%；2組比較，Ki-67、p53蛋白表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。ER、PR以及c-erbB-2受體均為陰性的乳腺癌中Ki-67的表達率為48.3%，p53陽性表達率為58.1%，而非此類型的乳腺癌組中Ki-67的表達率為30.1%，p53的陽性表達率為22.9%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 Ki-67和p53蛋白表達與乳腺癌的臨床分期密切相關(guān)，提示Ki-67及p53的蛋白過度表達的乳腺癌預后不良；Ki-67和p53在ER、PR以及c-erbB-2受體均為陰性的乳腺癌中過表達，解釋了此類乳腺癌的臨床高侵襲性的生物學特性。

p53；Ki-67；乳腺癌；免疫組織化學

三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是指雌激素受體（estrogen receptor，ER），孕激素受體（progestogerone receptor，PR），和人表皮生長因子受體2（c-erbB-2）表達均呈陰性的乳腺癌，約占全部乳腺癌的15%［1］，臨床表現(xiàn)呈高度侵襲性，目前缺乏有效的靶向治療藥物。因此研究三陰性乳腺癌的分子生物學特征對于判斷腫瘤預后、制定臨床化療方案，以及尋找靶向治療的方法有著重要的意義。本研究通過檢測乳腺癌Ki-67及p53表達，分析其在不同時期及類型的乳腺癌中表達差異，探討其潛在的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2004年7月至2008年9月中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院乳腺外科手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的乳腺浸潤性導管癌184例，患者均為女性，年齡29～68歲，平均46.1歲，其中三陰性乳腺癌31例（均經(jīng)外院病理會診再次證實），非三陰性乳腺癌153例，術(shù)前均未進行新輔助治療。184例乳腺癌中早期乳腺癌組158例（Ⅰ期乳腺癌63例，Ⅱ期乳腺癌95例），晚期乳腺癌組26例（Ⅲ期乳腺癌24例，Ⅳ期乳腺癌2例）。

1.2 方法

腫瘤標本均用10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm厚切片，采用HE染色及SP染色，經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇脫水，組織抗原微波修復。滴加一抗后4℃冰箱孵育過夜；滴加二抗，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素，室溫孵育20min。各步驟間以PBS沖洗5min，連續(xù)3次。DAB顯色，蘇木精復染。已知p53、Ki-67陽性切片為陽性對照，以PBS液代替一抗為陰性對照。鼠抗人Ki-67核抗原單克隆抗體，兔抗人p53抗體、免疫組織化學試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

（1）ER、PR癌細胞核棕黃色著色<10%為陰性表達，c-erbB-2細胞膜棕黃色著色<10%為陰性表達；（2）Ki-67陽性表達，以細胞核內(nèi)棕色顆粒為陽性，每例觀察10個高倍視野，每個視野記數(shù)100個細胞，計算Ki-67陽性細胞數(shù)占細胞總數(shù)的比例，+：5%～25%，2+：25%～50%，3+：50%～75%，4+：75%～100%；（3）p53蛋白：細胞核內(nèi)棕色顆粒為陽性，每張切片檢測10個視野（×400），陽性細胞<10%為陰性，陽性細胞≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學處理，比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學特征

Ki-67表達于乳腺癌細胞中的細胞核，呈棕黃色到深棕黃色（圖1A）；p53表達于乳腺癌組織中的細胞核，可見散在分布于細胞核內(nèi)棕黃色染色（圖1B）；陰性對照，可見腫瘤細胞核較大但其中無棕黃色染色。

圖1 Ki-67和p53陽性表達 ×400Fig.1 Positive expressions of Ki-67and p53×400

2.2 Ki-67與p53表達分析

Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌中Ki-67表達率為29.1%，p53表達率為25.9%；而Ⅲ期和Ⅳ期中的Ki-67的表達為61.5%，p53的表達率為46.1%；兩組Ki-67、p53蛋白表達率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。ER、PR以及c-erbB-2受體均為陰性的乳腺癌中Ki-67的表達率為48.3%，p53的陽性表達率為58.1%，而非此類型的乳腺癌組中Ki-67的表達率為30.1%，p53的陽性表達率為22.9%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表1 Ki-67及p53在不同臨床分期中的表達情況Tab.1 Expressions of Ki-67and p53in different clinical stages of breast cancer

Ki-67及p53的表達與乳腺癌的臨床分期成正相關(guān)，且有統(tǒng)計學差異；比較早期乳腺癌（Ⅰ期，Ⅱ期）與晚期乳腺癌（Ⅲ期，Ⅳ期）中的Ki-67表達情況（χ2=10.56P=0.001），差異有統(tǒng)計學意義；比較早期乳腺癌（Ⅰ期，Ⅱ期）與晚期乳腺癌（Ⅲ期，Ⅳ期）中p53的表達情況（χ2=4.44，P=0.035），差異有統(tǒng)計學意義。

表2 Ki-67及p53在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌中的表達Tab.2 Expressions of Ki-67and p53in TNBCand non-TNBC

在三陰性乳腺癌組中的Ki-67及p53的陽性表達率明顯高于非三陰性乳腺癌組，其中Ki-67表達（χ2=5.357，P=0.021）和 p53表達（χ2=15.564，P<0.01），差異均有統(tǒng)計學意義。

3 討論

通過基因微陣列分析，目前可以把乳腺癌分成5種亞型：激素受體陽性類luminal A型和luminal B型、c-erbB-2過度表達型、正常乳腺基因表達型以及基底細胞型?；准毎腿橄侔┡c正常乳腺基底上皮細胞表達相似，腫瘤細胞和基底細胞類似，同樣表達細胞角蛋白分子CK5/6和CK17，并且缺乏ER、PR和c-erbB-2受體蛋白的表達。通常認為三陰性乳腺癌是基底細胞型乳腺癌的一個亞型［2］。Dent R等［3］通過1601例患者長達8.1年的隨訪發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌患者與非三陰性乳腺癌患者相比其遠隔轉(zhuǎn)移率高，且危險比為2.6，死亡概率增加3.2倍。

Ki-67蛋白是一種具有蛋白酶性質(zhì)的堿性蛋白質(zhì)，是維持細胞周期的絕對必需物質(zhì)，可作為反映細胞增殖程度的標記物。Elkhuizen等［4］通過7502例患者的病例對照研究，得到三陰性乳腺癌的患者腫瘤易局部復發(fā)，并與Ki-67表達呈正相關(guān)的結(jié)論。Rosa等［5］通過RT-PCR及免疫組化的方法研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67與ER及PR的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達呈負相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性密切相關(guān)，并由此提出檢測Ki-67可能對判斷腫瘤的預后有較大意義。本研究顯示：Ki-67陽性表達率與臨床分期具有相關(guān)性，隨臨床分期升高而升高，提示Ki-67可能與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及腫瘤的生長活躍程度密切相關(guān)，Ki-67在三陰性乳腺癌中過表達，與非三陰性乳腺癌比較差異有顯著性統(tǒng)計學意義。

p53被認為是抑癌基因，突變后可導致p53所編碼蛋白的功能喪失，失去抑制細胞周期運行和觸發(fā)細胞凋亡的功能［6］。Herr等［7］在研究三陰性乳腺癌的病理特征時發(fā)現(xiàn)其多為組織學分級3級且p53蛋白表達多為陽性，并提示三陰性乳腺癌具有較強的增殖能力，易發(fā)生復發(fā)和轉(zhuǎn)移，預后相對較差。本研究提示p53不僅在早期及晚期乳腺癌組存在差異（P=0.035），而且在三陰性乳腺癌組與非三陰性乳腺癌組中的差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），這提示p53不僅可作為判斷腫瘤侵襲性及預后的標志，也是三陰性乳腺癌的一個潛在的特征性基因位點。

Rhee等［8］通過對683例乳腺癌患者的研究發(fā)現(xiàn)Ki-67及p53在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的三陰性乳腺癌患者中過表達，且無病生存率低于非三陰性乳腺癌的患者。本研究聯(lián)合檢測Ki-67及p53，發(fā)現(xiàn)在三陰性乳腺癌中均呈高表達，從一定程度上解釋了三陰性乳腺癌易復發(fā)轉(zhuǎn)移預后較差的分子生物學原因，為判斷三陰性乳腺癌預后提供了理論依據(jù)。

由于目前三陰性乳腺癌還缺乏有效地靶向治療藥物，是近年來的乳腺癌研究的熱點，已經(jīng)有表皮生長因子受體抑制劑吉非替尼，原癌基因c-kit抑制劑伊馬替尼投入到臨床研究中［9］；而有文獻提出針對雄激素受體的治療也有可能成為三陰性乳腺癌新的治療靶點［10］；近有報道認為雌激素受體亞型ER-β則有可能成為其內(nèi)分泌治療新方向［12］。因此通過研究Ki-67及p53蛋白在三陰性乳腺癌中的表達有助于三陰性乳腺癌的基因譜研究，并希望能夠通過其表達通路找到更多的潛在治療靶點。

（致謝：感謝中國醫(yī)科大學盛京醫(yī)院乳腺外科張文海教授、李建一主治醫(yī)師給予的指導和幫助。）

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［3］Dent R，Trudeau M，Pritchard KI，et al.Triple-negative breast cancer：Clinical features and patterns of recurrence ［J］.Clin Cancer Res，2007，13（15）：4429-4434.

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［5］Rosa FE，Caldeira JR，F(xiàn)elipes J，et al.Evaluation of estrogen receptor alpha and beta and progesterone receptor expression and correlation with clinicopathologic factors and proliferative marker Ki-67in breast cancers［J］.Hum Pathol，2008，39（5）：720-730.

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（編輯 裘孝琦，英文編輯 陳 姜）

Expressions of Ki-67and p53and Their Significance in Breast Cancer

JIAShi，ZHANGWen-hai，LIJian-yi，ZHANGYang
（Department of Breast Surgery，Shenjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the expressions of Ki-67and p53in ER-，PR-and c-erbB-2-negative（triple negative）breast cancer and their relationship with clinical stages.MethodsThe surgical specimens were sampled from 184cases of primary breast cancer，and the expressions of Ki-67and p53were determined with immunohistochemistry.ResultsThere were significant differences in the expression rates of Ki-67and p53between stagesⅠ and Ⅱ and stagesⅢ and Ⅳ of breast cancer（Ki-67，29.1%vs 61.5%，P<0.05；p53，25.9%vs 46.1%，P<0.05）and between triple negative breast cancer and non-triple negative breast cancer （Ki-67，48.3%vs 30.1%，P<0.05；p53，58.1%vs 22.9%，P<0.05）.ConclusionThe expressions of Ki-67and p53are closely correlated with the clinical stages of breast cancer.The overexpressions of Ki-67and p53in triple negative breast cancer may be contribute to the high invasiveness.

p53；Ki-67；breast cancer；immunohistochemistry

R655.8

A

0258-4646（2010）12-1061-03

賈實（1980-），男，醫(yī)師，碩士.

張文海，E-mail：zhangwh@sj-hospital.org

2010-09-04