原發干燥綜合征伴發間質性肺疾病患者淋巴細胞CCR7的表達及臨床意義

吳春玲，劉海娜，郭韻，楊娉婷，趙麗娟

（1.中國醫科大學 附屬第一醫院風濕免疫科，沈陽 110001；2.中國醫科大學 附屬盛京醫院風濕免疫科，沈陽 110004）

原發干燥綜合征伴發間質性肺疾病患者淋巴細胞CCR7的表達及臨床意義

吳春玲1，劉海娜1，郭韻2，楊娉婷1，趙麗娟1

（1.中國醫科大學 附屬第一醫院風濕免疫科，沈陽 110001；2.中國醫科大學 附屬盛京醫院風濕免疫科，沈陽 110004）

目的 探討CC族趨化因子受體7（CCR7）在原發干燥綜合征（pSS）伴發間質性肺疾病（ILD）發病機制中的作用及其臨床意義。方法 選擇31例原發干燥綜合征患者，其中無臟器受累者18名，伴有ILD者13名。正常對照組20名，為健康體檢者。應用流式細胞檢測術檢測外周血淋巴細胞表面CCR7的表達。結果 原發干燥綜合征組CD4＋T細胞和CD8＋T細胞上CCR7的表達均高于正常對照組（P<0.01），且原發干燥綜合征組CD4＋T細胞上CCR7的表達高于CD8＋T細胞（P<0.05）；其中pSS伴間質性肺疾病組CCR7在CD4＋T細胞上的表達高于pSS無臟器受累組（P<0.05），也高于同組的CD8＋T細胞（P<0.01）；而CCR7在兩組CD8＋T細胞上的表達無統計學差異 （P>0.05）。結論 原發干燥綜合征患者外周血淋巴細胞上CCR7的表達明顯增加，且此種增加在肺部受累的pSS患者表現更為明顯。

干燥綜合征；間質性肺疾病；趨化因子受體；CCR7

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇31例2007年6月至2008年6月在我院風濕免疫科就診的pSS患者，診斷均符合2002年國際干燥綜合征（Sjgren′ssyndrome，SS）的分類標準［3］。其中無臟器受累者18名，包括男性1例，女性17例，年齡 23～71歲，平均（38.35±12.87）歲；伴有 ILD者13名，包括男性2例，女性11例，年齡25～75歲，平均（35.15±10.46）歲。采血前均未使用糖皮質激素和/或免疫抑制劑治療。正常對照組20名，為健康體檢者，男性2名，女性18名，年齡20～68歲，平均（31.58±8.71）歲。與病例組在年齡、性別構成等方面無統計學差異。

1.2 主要試劑及儀器

FITC標記的鼠抗人CD4抗體、PE-cy5標記的鼠抗人CD8抗體及 FITC、PE、PE－cy5分別標記的小鼠IgG1均購自深圳晶美生物科技公司；PE標記的鼠抗人CCR7抗體購自R&DSystems，Inc；流式細胞儀為美國BD公司產品，由我院中心實驗室提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 流式細胞儀檢測外周血淋巴細胞CCR7的表達

分別抽取pSS患者、正常對照者晨起空腹外周血，取100μl抗凝血加入流式管底部，再向其中加入上述3種已標記的鼠抗人抗體各5μl，4℃避光孵育40min。再加入2ml紅細胞裂解液，混勻，避光放置10min。離心棄上清，用流式細胞儀檢測CCR7的表達。

1.3.2 統計學分析

2 結果

2.1 pSS與正常對照組CCR7表達的差異（見表1）

pSS組CD4＋T細胞和CD8＋T細胞上CCR7的表達均高于正常對照組（t=14.23，P<0.01；t=16.44，P<0.01），且pSS組CD4＋T細胞上CCR7的表達高于CD8＋T細胞（t=2.07，P<0.05）。

2.2 pSS伴ILD組與pSS無臟器受累組CCR7表達的差異（見表1）

pSS伴ILD組CCR7在CD4＋T細胞上的表達高于 pSS無臟器受累組（t=3.13，P<0.05），但在 CD8＋T細胞上的表達與pSS無臟器受累組無統計學差異（t=0.71，P>0.05）。此外，pSS伴 ILD組 CD4＋T細胞表面CCR7的表達高于同組的CD8＋T細胞 （t=5.28，P<0.01），而 pSS無臟器受累組 CD4＋T細胞表面CCR7的表達與同組的CD8+T細胞無統計學差異（t=0.58，P>0.05）。

表1 T淋巴細胞亞群上CCR7的表達（%）Tab.1 Expressions of CCR7on different Tlymphocyte subgroups（%）

3 討論

SS的發病依賴很多不同的機制，其中淋巴細胞的功能紊亂及對淋巴細胞的誘導募集是其病變的基礎。而CCR7是CC類趨化因子受體，高度表達于不同的淋巴組織、T細胞、B細胞、活化的NK細胞及樹突細胞表面，在配體作用下誘導淋巴細胞向特定組織移行，參與免疫反應［3］。

SS的細胞免疫異常多出現在受累的腺體局部組織。北京協和醫院對15例pSS和4例正常人的唇腺病理進行分析，發現SS患者淋巴細胞浸潤以CD4＋T細胞占多數，CD4＋/CD8＋的比例明顯高于正常對照組，并與疾病的嚴重程度有關。由于CD4＋T細胞增多，導致B細胞功能亢進，產生大量自身抗體。大量淋巴細胞浸潤使組織結構破壞，腺體功能喪失［4］。我們通過研究發現，在pSS患者外周血淋巴細胞中，CD4＋T細胞和 CD8＋T細胞表面均可檢測到CCR7的表達，與正常對照組相比較明顯增多，表明CCR7可能參與了SS的發病過程。而且本實驗還發現在 pSS患者，CCR7＋CD4＋T細胞數明顯高于 CCR7＋CD8＋T細胞，提示pSS患者CCR7介導CD4＋T細胞的趨化作用要強于CD8＋T細胞。這也表明，pSS外分泌腺大量CD4＋T細胞浸潤的病理改變可能與pSS患者T細胞上CCR7的異常表達有關，間接證明CCR7在T細胞向病變組織異常聚集的過程中發揮了重要作用。

SS尤其是pSS患者發生ILD很常見，發生率可達8%～38%，SS伴發ILD常見的組織病理學表現主要以淋巴細胞增殖性病變為主，包括淋巴細胞性間質性肺炎（LIP）、淋巴細胞支氣管炎或支氣管擴張、假性淋巴瘤或淋巴瘤，以聚集的淋巴細胞間質浸潤為特征。其支氣管肺泡灌洗液（BALF）中，淋巴細胞增高明顯，在pSS伴ILD患者的BALF中，以CD4＋T細胞增加更為顯著［6］。而我們在實驗中發現在伴有間質性肺疾病的pSS患者，CD4＋T細胞上CCR7的表達高于無臟器受累的pSS患者，也高于同組的CD8＋T細胞，而CD8＋T細胞CCR7的表達在2組患者之間無統計學差異。這可能部分解釋了pSS伴ILD患者BALF中CD4＋T細胞顯著增加的原因。

綜上，CCR7在pSS外周血淋巴細胞上表達異常增加，尤其在CD4＋T細胞表達CCR7更多，且此種增加在肺部受累的pSS患者表現更為明顯。因此無論是通過基因治療的方法或是直接應用CCR7的拮抗劑來阻斷其與配體的相互作用，抑制淋巴細胞的游走，均有可能為pSS的免疫治療，特別是預防和減緩肺受累的進程提供新的思路。

［1］張奉春.風濕免疫病學［M］.北京：人民衛生出版社，2009：34-43.

［2］Szekanecz Z，Szücs G，Szántó S，et al.Chemokines in rheumatic diseases［J］.Curr drug targets，2006，7（1）：91-102.

［4］陳順樂，鄒和建.風濕內科學［M］.北京：人民衛生出版社，2009：83-89.

［5］侯顯明，于潤江.間質性肺病學［M］.北京：人民衛生出版社，2003：274-275.

（編輯 孫憲民，英文編輯 趙傳勝）

The Clinical Significance of CCR7Expression on Lymphocyte in the Patients with Interstitial Lung Diseaseassociated with Primary Sjgren′s Syndrome

WUChun-ling1，LIUHai-na1，GUOYun2，YANGPing-ting1，ZHAOLi-juan1
（1.Department of Rheumatology and Immunology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China；2.Department of Rheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo explore the role and the clinical significance of CCR7in the pathogenesis of interstitial lung disease-associated with primary Sjgren′s syndrome（pSS）.Methods31patients with primary Sjgren′s syndrome（pSS）were selected.They consisted of 18patients without any viscera damage and 13patients with interstitial lung disease（ILD）.20healthy persons were included as normal controls.The expression of CCR7on the peripheral blood lymphocyte was detected by flow cytometry（FCM）.ResultsThe level of CCR7on CD4+Tand CD8+Tcells from pSSwas higher than that from normal controls（P<0.01）.Furthermore，CD4+Tcells from pSSexpressed CCR7more than CD8+Tcells （P<0.05）.The level of CCR7on CD4+Tcells from pSSwith ILDgroup was higher than that from pSSwithout any viscera damage group.It was also higher than that on CD8+Tcells from the same group （P<0.01）.However，there was no statistic difference between the expressions of CCR7on CD8+Tcells from the two pSSgroups.ConclusionThe expression of CCR7on pSSTlymphocytes increased prominently，especially on CD4+Tcells from pSSwith ILDgroup.

Sjgren′s syndrome；interstitial lung disease；chemoceptor；CCR7

R593.22

A

0258-4646（2010）12-1030-03

國家自然科學基金資助項目（30801204）

吳春玲（1977-），女，主治醫師，碩士.E-mail：wuchling@hotmail.com

2010-05-07