西門塔爾牛短期重復超排效果與分析

趙 鑫,胡高博,卞江濤,盧全晟,宋彥軍,薛 利,王國旗,張居農

(1.石河子大學動物科技學院,新疆 832000;2.北京合眾牧豐科技有限公司,北京 100057)

母牛的卵巢在出生時含有20萬～40萬個卵母細胞,但在其生命過程中有99%的原始卵泡閉鎖,僅有1%的可以發育成熟而排卵[1]。應用超數排卵技術可使每次排卵由1～3個增至10～20個,而通過重復超排,可充分發揮良種奶牛的繁殖潛力,對育種和快速擴群具有特別重大的意義。郭志勤等(2001)[2]、張居農等(2005)[3]、呼格吉勒圖(2003)[4]、付靜濤等(2002)[5]、盧全晟等(2003、2005)[6,8]、馬學海(2007)[7]、陳靜波(1992)[9]的研究報道認為,采用外源激素重復超排,以非手術沖胚對中國荷斯坦牛、安格斯牛、海福特牛和娟姍母牛的內分泌及生殖道的刺激影響較小,可多次進行重復超排處理。為探討重復超排在西門塔爾母牛中應用的效果及影響因素,本研究在北京日升德龍奶牛養殖公司牛場進行了試驗,現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 供體母牛 本試驗選擇6頭年齡4～9歲,健康,有正常的發情周期,無繁殖機能疾病,膘情中上等的西門塔爾經產母牛。母牛分娩60 d以上,斷乳,無流產史,性情溫順。直腸檢查卵巢機能正常,子宮頸無明顯彎曲,子宮角對稱。

供試母牛在開放式圈舍按奶牛的飼養管理標準飼喂,計算機控制精確給料,自由飲水。供體牛按飼養管理程序正常飼養,定時飼喂、擠奶,自由運動,每天 3次飼喂,保證充足的微量元素,一次注射維生素A、D、E。

母牛在超排前2個月進入固定胚胎采集與移植場地,單獨組群、編號,保持飼養環境相對穩定。試驗地為北京日升德龍奶牛養殖公司牛場。

1.2 供試藥物與儀器設備 FSH:中國科學院動物研究所純化凍干產品(7.0～7.5 mg/瓶);FSH(Foiltropin):加拿大Vetrepharm Cananda lnc生產;EAZIBREEDCIDR(1.9 g Progesterone):PfizerPty.Iimited生產;氯前列烯醇(PG,0.2mg):上海市計劃生育科學研究所生產;促排卵素3號(LHRH-A3):寧波激素制品有限公司生產;2%利多卡因:泅水希爾康制藥有限公司生產;移植槍、塑料硬外套、無菌軟外套:法國卡蘇公司生產;實體顯微鏡:日本Olympus公司;CL5500胚胎冷凍儀:澳大利亞Cytologic公司生產;Millipore超純水儀:英國Whattman公司生產;0.5～10 jxL微量計量器:美國Gilson公司生產;10～18Fr沖卵管:日本富士平公司生產;35～60塑料培養皿:瑞士Nunc公司生產;集卵杯(側漏式):日本富士平公司生產;集卵杯(側漏式):法國卡蘇公司生產。試驗用無機鹽試劑除特別說明外,均購自Sigma公司。

1.3 母牛超排處理方案 本試驗采用FSH逐次遞減法進行超排處理。首先檢查供體牛子宮及卵巢的狀態,然后按表1的方案進行同期發情與超數排卵進行處理。

在供體牛發情周期任意一天給供體牛埋植CIDR,以埋植CIDR當天為0 d;第5天開始注射FSH,連續4 d減量注射;第7天下午和第8天上午分別注射PG 2支;第8天下午撤栓,同時觀察發情。在供體牛接受爬跨后第1次輸精,之后約隔12 h第2次輸精,輸精劑量比正常人工授精多1倍。試驗組牛在第1次輸精。以發情日計為0 d,在第17天采用非手術法采卵。1個情期后 ,再按上述步驟再次超排同批西門塔爾母牛,對比2次超排的結果。

表1 母牛超排處理方案

1.4 沖胚 本試驗采用2種沖胚方法。第1種方法為注射式沖胚,第2種為硬膜外腔麻醉的滴注式沖胚法,操作過程按盧全晟等(2003)[8]方法進行。

1.5 胚胎的采集與鑒定 在供體牛發情配種后的第7天,用采卵管非手術采卵,在連續變倍體視鏡下,按形態鑒定標準分為A、B、C三個等級。其中只有A、B級可以冷凍保存,C級胚胎一般用胚胎移植槍移植給受體母牛。A級胚胎形態典型,卵細胞和分裂球的輪廓清晰,細胞質致密,色調和分布極均一。B級胚胎與典型的胚胎相比,稍有變形,但卵細胞和分裂球的輪廓清晰,細胞質致密,分布均一,變性細胞和水疤不超過10%～30%。C級胚胎形態有明顯變異,卵細胞和分裂球輪廓稍不清晰或部分不清晰,細胞質不致密,分布不均勻,色調突起的水泡和變性細胞占30%～50%。

本試驗中的可用胚胎指的是A級和B級2個等級的胚胎。

1.6 數據處理 分別統計分析連續超排對母牛回收卵、可用胚胎、退化胚胎和未受精比率,統計結果用方差分析和t檢驗進行顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 第1次超排結果與分析 由表2可見,4～7歲母牛(07106、07112、07136、07140、07142)超排獲得的胚胎數個體間差異不顯著(P＞0.05);而4～7歲母牛與9歲母牛(07119)超排獲得的胚胎數比較,差異顯著(P＜0.05)。

表2 西門塔爾母牛第1次超排結果 枚

2.2 第2次超排結果與分析 間隔30 d,采用同樣的超排處理方案,對6頭西門塔爾母牛進行了第2次超排處理,結果列于表3。2次超排結果比較見表4。由表4可知耳號為07136和07142牛2次超排胚胎可用率差異顯著(P＜0.05),其余 4頭(07106、07112、07119、07140)與第 1次超排結果差異不顯著(P＞0.05);而在退化胚胎率和未受精率方面,兩次超排的結果差異顯著(P＜0.05)。本試驗發現,西門塔爾母牛反復超排,對胚胎可用率沒有顯著影響或者影響比較小(表4),但第2次超排后胚胎退化率明顯增加,未受精率也升高(P＜0.01)。

本試驗還注意到,重復超排后獲胚總數略有下降(P＞0.05),說明超排對西門塔爾母牛有一定的影響,造成這種現象的原因可能是:第1次超排后母牛的卵巢增大,黃體過多,雖然經過一個情期短時間的恢復,仍然有部分母牛的卵巢沒有完全恢復好。而且同一個體在不同時間對藥品反應也會有一定差別,經過重復超排,母牛對藥品的敏感度也會降低。

表3 西門塔爾母牛第2次超排結果 枚

2.3 提高西門塔爾牛超數排卵率相關因素的探討營養狀況是影響供體母牛超數排卵的重要因素之一。郭志勤等(2001)[2]認為,中等膘情的供體牛超數排卵處理后可獲得理想的排卵數,優于其它膘情的牛。本試驗的結果證實了這一點。

本試驗采用綜合措施以提高采胚率和可用胚率,盡量避免應激因素對反復超排結果的影響,收到較好的效果。如加強輸精操作,輸精時使用細且精致的輸精器外鞘,減少子宮損傷;由輸精操作熟練的技術人員輸精;最后一次輸精后8～12 h用青霉素160萬u、鏈霉素100萬u溶液清宮等,這與何光中等(2003)[10]、王洪寶等(2003)[11]、吳亦芳等(2004)[12]、劉俊平等(2008)[13]、李樹靜等(2001)[14]應用此技術得到的效果是一致的。

表4 西門塔爾母牛2次超排結果比較 %

超排處理本身對母牛是一次應激,而重復超排的母牛必須要有一個時期恢復,這個時間以50～60 d為宜。重復超排間隔時間短,供體的生殖系統與激素調節不能完全恢復,重復超排效果不穩定;間隔時間長,則影響到母牛的利用率。

本試驗間隔30 d后對西門塔爾母牛進行重復超排,獲得一定的效果。限于條件,本研究僅對同一供體母牛進行了2次的重復超排,而連續多次重復超排的最佳時間間隔、激素處理方案等還有待于進一步探討。

3 結論

本試驗在間隔30 d對6頭4～9歲的西門塔爾母牛進行重復超排,第1次超排獲得胚胎73枚,可用胚胎49枚;第2次超排獲得胚胎69枚,可用胚胎45枚。母牛經過一個情期的生殖與體況的恢復,其卵巢機能恢復到超排前的狀態,采用重復超排,生產優質胚胎,可以提高優秀母牛胚胎的生產數量。

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