新疆地區(qū)綿羊和肉雞不同組織獸藥殘留及消除規(guī)律研究

卞欣欣,董志遠(yuǎn),郭 璇,賈新建,邵 偉,景 煒,蒲雪松,余 雄

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,烏魯木齊 830052;2.新疆維吾爾自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所)

隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展,大量藥物在生產(chǎn)中被廣泛的使用。食品動(dòng)物在使用獸藥后,獸藥的原形及其代謝物等有可能蓄積或殘存在動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官內(nèi),或進(jìn)入泌乳動(dòng)物的乳、或產(chǎn)蛋家禽的蛋中,藥物殘留危害著人類的健康。隨著人們生活水平的提高,近年來(lái)畜產(chǎn)品中藥物殘留問(wèn)題日益受到重視。但是到目前為止,國(guó)內(nèi)外關(guān)于抗生素和驅(qū)蟲(chóng)藥在綿羊和肉雞各組織中殘留量的研究較少,難以滿足畜牧生產(chǎn)的需要。新疆地區(qū)羊肉和雞肉生產(chǎn)過(guò)程中獸藥的使用和殘留情況的研究較少,因此本試驗(yàn)在這方面進(jìn)行了研究,為畜禽生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 哈薩克羊15只,年齡9～10月齡,體重40～45 kg,沒(méi)有使用過(guò)任何抗生素和驅(qū)蟲(chóng)類藥物。新疆泰昆集團(tuán)阜康500商品雞場(chǎng)提供的42日齡AA肉雞10只。

1.2 儀器與試劑 Agilent1100系列高效液相色譜儀及化學(xué)工作站,包括自動(dòng)進(jìn)樣器、熒光檢測(cè)器、DAD檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器、視差檢測(cè)器、恒溫柱溫箱、真空在線脫氣裝置,550型酶標(biāo)儀(配備450 nm濾光片),氮吹儀(N-EVAPTM-111,美國(guó)Organomation Associates公司),離心機(jī)(TDL-40B,上海安亭科學(xué)儀器廠),Millipore超純水制備器,旋渦混合儀,振蕩混合儀,恒溫水浴箱,超聲波清洗機(jī),分析天平(感量0.000 01 g),天平(感量0.01 g)。乙腈、甲醇、正己烷、丙酮、乙醚、乙酸乙酯為色譜純;二乙胺為分析純。標(biāo)準(zhǔn)品:阿苯達(dá)唑、阿苯達(dá)唑砜、阿苯達(dá)唑亞砜、鹽酸左旋咪唑、吡喹酮由美國(guó)Sigma公司提供,含量均大于99%。試劑盒由北京望爾生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 藥物與設(shè)計(jì)

1.3.1 綿羊的投藥方法及樣品采集 試驗(yàn)在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行,為期40 d。由于各種藥物的休藥期不同,因此將15只羊隨機(jī)分為3組,每組5只,且組間體重差異不顯著(P＞0.05)。試驗(yàn)綿羊的用藥程序如表1所示,投藥后5、15、25 d各隨機(jī)選擇1組宰殺,取其肌肉(包括臀肌、半腱肌、背最長(zhǎng)肌)、肝臟和腎臟組織,-20℃冰箱中保存待測(cè)。對(duì)所采集的樣品測(cè)定每種藥物的殘留量,并研究其在綿羊組織中的殘留規(guī)律。

表1 綿羊的投藥程序

1.3.2 肉雞樣品的采集 實(shí)驗(yàn)中AA肉雞的投藥程序依照新疆地區(qū)商品肉雞的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,在第42天(出欄)隨機(jī)抽取10只,宰殺,取其胸肌、腿肌、心臟、肝臟和腎臟組織,-20℃冰箱中保存待測(cè)。強(qiáng)力霉素在雞10～13、16～19日齡時(shí)投放,劑量4 mg/kg;硫酸新霉素在雞16～19、31～33日齡時(shí)投放,劑量16 mg/kg。由于以上2種藥物在肉雞的飼養(yǎng)過(guò)程中使用的頻率特別高,因此,在出欄時(shí)主要針對(duì)這2種藥物的殘留做了檢測(cè)。

1.4 樣品處理 吡喹酮的樣品處理按照農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-11-2007的步驟操作;阿苯達(dá)唑的樣品處理按照農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告-9-2007的步驟操作;左旋咪唑的樣品處理按照J(rèn)AP-175左旋咪唑檢測(cè)方法處理;綿羊組織中青霉素鈉、硫酸鏈霉素、頭孢噻呋鈉、伊維菌素和肉雞組織中強(qiáng)力霉素、新霉素的樣品處理與結(jié)果計(jì)算按試劑盒說(shuō)明的操作程序進(jìn)行。

1.5 色譜分析條件 吡喹酮色譜柱:XTerra C18柱(250 mm ×4.6 mm,4.5μ m),以乙腈、水為流動(dòng)相,梯度洗脫程序見(jiàn)表2,流速0.9 mL/min,柱溫28℃,進(jìn)樣量10 μ L,紫外檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序

左旋咪唑色譜柱:XTerra C18柱(250 mm×4.6 mm,4.5 μ m),以乙腈∶磷酸二氫鉀—二乙胺緩沖液(pH7.5)(3∶7)的混合溶液為流動(dòng)相,流速 1.0 mL/min,柱溫 35℃,進(jìn)樣量 20 μ L,DAD 檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng) 250 nm。

阿苯達(dá)唑色譜柱:XTerra C18柱(250 mm×4.6 mm,4.5 μ m);流動(dòng)相 :A 相:乙腈,B 相:水 ,C 相 :10%冰乙酸;梯度洗脫程序見(jiàn)表3,流速1.0 mL/min,柱溫25℃,進(jìn)樣量 20 μ L,DAD檢測(cè)器檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)292 nm。

表3 流動(dòng)相梯度洗脫程序

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,運(yùn)用SPSS 13.0進(jìn)行方差分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 綿羊組織中藥物殘留情況

2.1.1 抗生素類藥物殘留檢測(cè)結(jié)果 表4表明,青霉素鈉在腎臟組織中的殘留量極顯著(P＜0.01)地高于肝臟和肌肉組織;肝臟與肌肉中青霉素鈉的殘留量未表現(xiàn)出顯著差異(P＞0.05);結(jié)果顯示,腎臟＞肝臟＞背最長(zhǎng)?。就渭。景腚旒　ｎ^孢噻呋鈉在綿羊各組織的殘留量均未表現(xiàn)出顯著差異(P＞0.05),并且殘留量較低,在3μ g/kg左右。

表4 停藥5 d青霉素鈉、頭孢噻呋鈉在綿羊組織的殘留量(n=5) μ g/kg

表5表明,停藥10 d時(shí)硫酸鏈霉素在肝臟和腎臟中的殘留量與肌肉組織相比差異極顯著(P＜0.01),腎臟中殘留量最高,達(dá)242 μ g/kg,各肌肉組織間差異不顯著(P＞0.05);停藥20 d時(shí)硫酸鏈霉素在肝臟和腎臟中的殘留量與肌肉組織相比差異極顯著(P＜0.01),肝臟和腎臟中硫酸鏈霉素的殘留量是肌肉組織的6.5倍,臀肌、半腱肌和背最長(zhǎng)肌中硫酸鏈霉素的殘留量差異不顯著(P＞0.05);停藥30 d時(shí),硫酸鏈霉素在肝臟和腎臟中的殘留量與肌肉組織相比差異極顯著(P＜0.01),肝臟中殘留量最高,達(dá)到 219μ g/kg,各肌肉組織間差異不顯著(P＞0.05)。

在停藥10 d時(shí),臀肌、半腱肌和背最長(zhǎng)肌中硫酸鏈霉素殘留量與20 d相比差異極顯著(P＜0.01),停藥10 d時(shí)硫酸鏈霉素在各肌肉組織內(nèi)的殘留量是停藥20 d時(shí)的4倍左右,不過(guò)這三個(gè)部位在20 d和30 d未表現(xiàn)出顯著差異(P＞0.05);第10 d、20 d和30 d肝臟中硫酸鏈霉素殘留量差異不顯著(P＞0.05);比較硫酸鏈霉素在腎臟中的殘留量,在10 d和20 d差異不顯著(P＞0.05),30 d殘留量比前兩批下降了20%,與前兩批比較差異極顯著(P＜0.01)。

表5 硫酸鏈霉素在綿羊組織的檢測(cè)結(jié)果(n=5) μ g/kg

2.1.2 抗寄生蟲(chóng)類藥物殘留檢測(cè)結(jié)果 停藥17 d時(shí),伊維菌素在綿羊不同組織的平均殘留量分別是:臀肌 2μ g/kg 、半腱肌 1μ g/kg、腎臟 3.2μ g/kg,肝臟和背最長(zhǎng)肌未檢出;停藥27 d時(shí)的樣品未檢出。左旋咪唑、阿苯達(dá)唑和吡喹酮均未檢出。

2.2 肉雞組織中獸藥殘留情況 表6表明,肉雞(42 d)出欄時(shí),新霉素在胸肌、腿肌和心臟中的殘留量與肝臟、腎臟比,差異極顯著(P＜0.01),胸肌和腿肌中新霉素的殘留量最高,肝臟和腎臟最低,殘留量?jī)H為肌肉中的四分之一;強(qiáng)力霉素在腎臟中的殘留量與其他組織相比差異極顯著(P＜0.01),腎臟中的殘留量比肌肉、心臟和肝臟高10倍左右。

表6 出欄肉雞不同組織中藥物的殘留量(n=10) μ g/kg

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

3.1.1 停藥5 d時(shí)檢測(cè)綿羊各組織中青霉素鈉的殘留情況,腎臟內(nèi)的殘留量最高,達(dá)到 40.70μ g/kg,是肝臟的4倍,肌肉中的殘留量最低,僅為腎臟殘留量的六分之一。研究結(jié)果表明,在肝臟和肌肉組織中的殘留量較低,說(shuō)明青霉素鈉在這兩種組織中的代謝速率比較快。青霉素鈉在腎臟中含量較高,在腎功能正常的情況下,50%～75%自腎臟排出;小部分在肝臟內(nèi)代謝[1]。本試驗(yàn)?zāi)I臟中青霉素鈉的殘留量最高,這與前人研究結(jié)果相似。目前,國(guó)內(nèi)尚無(wú)青霉素鈉在綿羊組織殘留量的報(bào)道,只有少數(shù)幾種青霉素在牛奶中殘留檢測(cè)的報(bào)道[2]。中國(guó)和歐共體(EEC)規(guī)定食用組織中青霉素的最高殘留限量(MRL)標(biāo)準(zhǔn)為50μ g/kg,本試驗(yàn)在停藥5 d時(shí),青霉素鈉在綿羊各組織中的殘留量低于標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.1.2 頭孢噻呋鈉在綿羊停藥5 d時(shí)檢測(cè),各組織內(nèi)殘留量均極低,約3μ g/kg,在體內(nèi)分布量依次為腎臟＞背最長(zhǎng)?。就渭。靖闻K＞半腱肌。頭孢噻呋鈉在動(dòng)物體內(nèi)的殘留量非常低,FDA(美國(guó)藥品食品管理局)已確定其宰前停藥期與牛奶廢棄期為0 d[3]。由中國(guó)和歐共體(EEC)規(guī)定的食用組織中頭孢噻呋的最高殘留限量(MRL)標(biāo)準(zhǔn)可知,停藥5 d時(shí),頭孢噻呋鈉在綿羊各組織的殘留量未超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.1.3 中華人民共和國(guó)獸藥典規(guī)定硫酸鏈霉素在綿羊上使用的休藥期是18 d,因此,分別在停藥10、20、30 d各檢測(cè)一批樣品,結(jié)果顯示,在10 d硫酸鏈霉素在各組織中殘留量最高,肝臟和腎臟的殘留量比肌肉組織的高一倍;停藥20 d,與10 d比較,肌肉組織中硫酸鏈霉素的殘留量減少了80%左右,但是肝臟和腎臟中殘留量變化不明顯;停藥30 d硫酸鏈霉素在綿羊肌肉組織中的殘留量較20 d下降了30%左右,肝臟和腎臟的殘留量下降了10%左右。說(shuō)明硫酸鏈霉素在綿羊肌肉組織中的代謝速率在前20 d較快,20 d后由于殘留量較少,代謝速率降低。研究結(jié)果表明,硫酸鏈霉素在綿羊的肝臟和腎臟中代謝時(shí)間長(zhǎng),殘留量高;肌肉組織中代謝快,殘留量低。注射部位和腎臟中鏈霉素殘留滯留期較長(zhǎng),其他可食部分殘留量低[1]。歐盟對(duì)動(dòng)物性食品中鏈霉素的最大殘留限量做了明確的規(guī)定[4],本試驗(yàn)檢測(cè)的3批樣品均未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.1.4 伊維菌素在停藥17 d檢測(cè)結(jié)果顯示,腎臟殘留量最高3.2 μ g/kg,腎臟＞臀?。景腚旒?肝臟和背最長(zhǎng)肌未檢出。停藥27 d的樣品未檢出。放射標(biāo)記伊維菌素代謝研究表明,肝臟和脂肪是伊維菌素進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化的兩個(gè)主要場(chǎng)所,同時(shí)也是藥物分布濃度最高,消除速度最為緩慢的兩種組織[5]。另有研究表明,羊皮下注射或內(nèi)服0.3 mg/kg伊維菌素后,在體內(nèi)殘留較多的組織包括肝臟、脂肪、骨骼和膽汁[6]。本研究表明,在休藥期內(nèi),伊維菌素在綿羊各組織中的殘留量低于歐共體(EEC)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.1.5 阿苯達(dá)唑在停藥后7 d未檢出。羊殘留消除研究表明,用藥后數(shù)日內(nèi)組織中的代謝物濃度變化很大,羊一次內(nèi)服15 mg/kg阿苯達(dá)唑后,肝臟中殘留量最高,休藥1 d,肝臟中總殘留量為16 mg/kg,休藥4 d和 20 d,殘留量降至 700μ g/kg和 170μ g/kg,只是組織中的殘留量較低[1]。

3.1.6 左旋咪唑在停藥后6 d,未檢出。研究表明,左旋咪唑口服后迅速被機(jī)體吸收,排泄分解迅速[7]。左旋咪唑及其代謝產(chǎn)物可自尿、糞便及呼吸道排出,自尿中排出的原形藥物約為服入總量的16%。給羊肌肉注射左旋咪唑10 mg/kg,10 min后即可自尿中測(cè)出,2 h后尿中含量最高,4 h后已全部消失[8]。

3.1.7 吡喹酮在停藥后17、27和37 d各檢測(cè)1批,均未檢出。

3.1.8 中國(guó)和歐共體(EEC)規(guī)定食用組織中新霉素的最高殘留限量(MRL)標(biāo)準(zhǔn)為,肌肉和肝臟 500 μ g/kg、腎臟1 000 μ g/kg。本試驗(yàn)中,新霉素在肉雞胸肌和腿肌中殘留量最高,達(dá)5.7 μ g/kg,肝臟和腎臟最低,殘留量?jī)H為肌肉中的四分之一。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)可知,新霉素在肉雞各組織中的殘留量低于標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.1.9 強(qiáng)力霉素在腎臟中的殘留量最高,達(dá)81.97 μ g/kg,比肌肉、心臟和肝臟高10倍多。強(qiáng)力霉素內(nèi)服吸收良好,生物利用度達(dá)90%以上;體內(nèi)分布廣泛,以腎臟和肝臟中濃度最高,骨和牙質(zhì)次之[9]。本試驗(yàn)中強(qiáng)力霉素在各組織中的殘留量均低于中國(guó)和歐共體(EEC)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

3.2 結(jié)論

3.2.1 綿羊肌肉注射青霉素鈉停藥5 d后檢測(cè)結(jié)果顯示,青霉素鈉在綿羊腎臟中的殘留量最高,是肝臟的4倍,肌肉組織中的殘留量最低。

3.2.2 綿羊肌肉注射頭孢噻呋鈉停藥5 d時(shí)在各組織中的殘留量均極低。

3.2.3 綿羊肌肉注射硫酸鏈霉素,分別在停藥10、20和30 d后檢測(cè)。結(jié)果表明,硫酸鏈霉素在綿羊的肝臟和腎臟中代謝時(shí)間長(zhǎng),殘留量高;肌肉組織中代謝快,殘留量低。

3.2.4 綿羊內(nèi)服伊維菌素,停藥17 d時(shí)檢測(cè),以腎臟中的殘留量最高,肝臟和肌肉組織很少。

3.2.5 綿羊內(nèi)服阿苯達(dá)唑,停藥7 d檢測(cè),未檢出;綿羊內(nèi)服左旋咪唑,停藥6 d檢測(cè),未檢出;綿羊內(nèi)服吡喹酮,停藥17、27和37 d時(shí)檢測(cè),均未檢出。

3.2.6 肉雞42 d(出欄)時(shí),新霉素在肉雞的胸肌和腿肌中殘留量最高,在肝臟和腎臟中的殘留量?jī)H為肌肉組織的四分之一。

3.2.7 肉雞42 d(出欄)時(shí),強(qiáng)力霉素在腎臟中的殘留量最高,是肌肉組織、心臟和肝臟殘留量的10倍多。

3.2.8 本試驗(yàn)中各種藥物的殘留量均低于中國(guó)和歐共體(EEC)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)殘留限量。

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