河南省鶴壁市食源性和禽源性沙門氏菌耐藥性研究

張秀麗,楊保偉,廖興廣,郭曉玲,炊慧霞

河南省鶴壁市食源性和禽源性沙門氏菌耐藥性研究

張秀麗1,楊保偉2,廖興廣1,郭曉玲3,炊慧霞1

目的 了解河南省食源性和禽源性沙門氏菌菌型分布和耐藥性的關系。方法隨機采集生雞肉和大型養(yǎng)雞場不同雞齡的雞肛拭子標本,按照 GB/T4789.4-2008進行沙門氏菌的分離和鑒定,瓊脂平板稀釋法對分離株進行藥敏測定,結果依照CLSI/NCCLS(2005版)進行判定。結果生雞肉沙門氏菌檢出率為81.5%;雞肛拭子總體檢出率為14.1%,其中種雞檢出率(18.4%)高于小雞(15.3%),高于待宰成年雞(2.0%)。不同雞齡分離的沙門氏菌耐藥譜明顯不同,來自小雞和成年待宰雞的沙門氏菌耐藥嚴重,而來自種雞的沙門氏菌幾乎不耐藥;生雞肉和雞肛拭中沙門氏菌型別不同。食源性和禽源性沙門氏菌耐藥譜明顯不同,但均具有嚴重的多重耐藥現(xiàn)象。結論河南省食源性和禽源性沙門氏菌菌型不同,耐藥譜不同,但均存在嚴重的多重耐藥現(xiàn)象,不同雞齡檢出沙門氏菌耐藥譜存在較大差異,提示在雞的飼養(yǎng)過程中,抗生素的不合理使用情況比較嚴重。

食源性;禽源性;沙門氏菌;菌型;耐藥

沙門氏菌是影響食品安全的致病菌之一,廣泛存在于自然界和溫血動物體內,是一種重要的人獸共患性病原菌。近年來,由于抗生素在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)和臨床治療中的廣泛使用及濫用,導致其耐藥性增強,耐藥譜加寬〔1〕。細菌抗生素抗性問題已成為全球關注的焦點〔2〕。為弄清禽源性和食源性沙門氏菌菌型分布和耐藥性的關系,我們于2008年5月到2009年10月對河南省鶴壁市市售生雞肉和雞帶染沙門氏菌情況進行了調查,并對分離菌株進行了藥敏分析。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集與運送 生雞肉樣品:無菌隨機采集當?shù)鼐用裰饕徺I點生雞肉樣品31份和雞內臟(雞肝、雞胗、雞心)34份共計65份,置于樣品保存箱內(0℃～4℃),于6h內送實驗室檢驗;雞肛拭標本297份(其中成年待宰雞49份,采自集貿市場,15～35日齡雞150份、種雞98份,均采自鶴壁市大型養(yǎng)雞場):以無菌棉拭子插入活雞肛門內2cm～3cm,旋轉一圈,取出放入緩沖蛋白胨水10m L,立即放入樣品保存箱內(0℃～4℃),于6 h內送檢。

1.2 檢驗方法 按照 GB/T4789.4-2008〔3〕進行沙門氏菌的分離和鑒定,試驗過程以沙門氏菌CMCC54007為陽性對照;瓊脂平板稀釋法對沙門氏菌分離株進行藥敏測定,結果判定依照美國臨床實驗室標準委員會(CLSI/NCCLS)2005版〔4〕手冊進行。每批試驗均用大腸桿菌(A TCC25922)和金黃色葡萄球菌(A TCC29213)進行質量控制。試驗選用W HO推薦的 12種抗生素,分別為頭孢他定(CAZ)、四環(huán)素 (TET)、氯霉素 (CHL)、鏈霉素(STR)、慶大霉素(GEN)、卡那霉素(KNA)和丁胺卡那(AM I)、氨芐青霉素(AM P)、克拉維酸+氨芐青霉素(AMC)、萘啶酮酸(NAL)、環(huán)丙沙星(CIP)和磺胺甲基異口惡唑+TM P(SXT)。

1.3 試劑 緩沖蛋白胨水、TTB增菌液、SC增菌液、XLD瓊脂為美國BD公司生產(chǎn);CHROM agar沙門氏菌顯色平板為法國科瑪嘉公司產(chǎn)品,鄭州博賽生物技術研究所分裝;API20E試劑條法國梅里埃公司生產(chǎn);M H瓊脂為英國OXO ID公司產(chǎn)品;沙門氏菌診斷血清為泰國A&S公司生產(chǎn)。所有試劑和培養(yǎng)基均在有效期內使用并經(jīng)過核查。

2 結 果

2.1 生雞肉(含內臟)和雞帶染沙門氏菌陽性率共檢測65份生雞肉,陽性53份,陽性率81.5%;雞肛拭子297份,陽性42份,陽性率14.1%,見表1。2.2 生雞肉和雞帶染沙門氏菌菌型分布 從生雞肉中分離出53株沙門氏菌,分布在10個血清型別中,結果見表2。從雞肛拭標本中分離出5個型別的沙門氏菌,見表3。

2.3 不同雞齡帶染沙門氏菌耐藥性 我們測定了來自于種雞18株、15～35日齡小雞24株(分離自23份雞肛拭)和成年待宰雞1株共43株的沙門氏菌對12種藥物的敏感性,不同雞齡分離的沙門氏菌耐藥譜明顯不同,來自小雞沙門氏菌耐藥率多數(shù)在80%以上(除AM I、AMC和SXT);來自成年待宰雞的菌株對5種藥物耐受;來自種雞的沙門氏菌耐藥輕微,僅對TET和 KAN的耐藥率稍高,為52.9%,其余的均在11.8%以下。

表1 雞肛拭和雞肉沙門氏菌檢出率Table 1 Detection rate of Salmonella in chicken anal swab and chicken meat

表2 鶴壁市生雞肉中沙門氏菌菌型分布(n=53)Table 2 Distribution of Salmonella serotype in fresh chicken meat in Hebicity(n=53)

表3 鶴壁市雞肛拭中沙門菌菌型分布(n=43)Table 3 Distribution of Salmonella serotype in chicken anal swab in Hebi city(n=43)

2.4 禽源沙門氏菌和食源性沙門氏菌的耐藥性比對 對分離自生雞肉的53株和雞肛拭的43株沙門氏菌進行了12種藥物敏感試驗,整體表現(xiàn)為耐藥,結果見圖1;來源于生雞肉和雞肛拭的共同血清型腸炎和印第安納沙門氏菌對12種藥物敏感試驗結果見圖2、圖3。

2.4 禽源沙門氏菌和食源性沙門氏菌的多重耐藥性比對 來源于生雞肉沙門氏菌53株,2耐以上菌株 37株,占 69.8%;5耐以上菌株 31株,占58.5%;11耐菌株3株,占5.7%。來源于雞肛拭的43株沙門氏菌,2耐以上菌株24株,占55.8%;8耐以上菌株23株,占53.5%;11耐以上菌株5株,占11.6%,有1株舒卜拉沙門氏菌出現(xiàn)對12種抗生素的耐受。來源不同但血清型別一致的沙門氏菌如腸炎和印第安納沙門氏菌共37株,但多重耐藥譜相同的僅1株。

3 討 論

沙門氏菌作為人和動物共患病原菌,可以引起人沙門氏菌病和雞白痢,也可潛伏在人和動物體內,使其成為健康攜帶者〔5〕。在沙門氏菌生態(tài)循環(huán)的生物圈中,食物是人感染沙門氏菌的重要媒介。采樣中市場調查發(fā)現(xiàn),一些農(nóng)貿市場和大型機械屠宰廠用的屠宰機器和清洗用具,在屠宰后從不進行清洗和消毒,這樣感染沙門氏菌的雞通過屠宰污染機器和用具,再通過污染的機器和用具傳染到其他雞酮體和環(huán)境;現(xiàn)在市場的不合理銷售方式也增加了相互污染的機會,提高了生雞肉沙門氏菌污染率?，F(xiàn)場調查飼養(yǎng)戶得知,種雞的飼養(yǎng)環(huán)境清潔度高,飼養(yǎng)精心,飼料添加劑和預防用藥少;肉雞生長周期短,一般40～42d出籠,飼料添加劑和各種各樣的用藥是必不可少的,藥物的選擇性壓力是造成細菌耐藥的主要原因。從圖1可以看出,河南省食源和禽源性沙門氏菌均產(chǎn)生了嚴重的耐藥,整體耐藥率均為100%,但二者對不同藥物的耐受程度不同,在12種藥物中,禽源沙門氏菌有9種藥物耐受程度超過了食源沙門氏菌,特別是 CAZ和 AM I,耐受率均在50%左右。具有共同來源的2個型別沙門氏菌印第安納和腸炎,對12種藥物的耐受表現(xiàn)不同,食源性印第安納有8種抗生素耐受率高于禽源性,而食源性腸炎沙門氏菌除SM Z外均低于禽源性。

來源于生雞肉和雞肛拭樣品的沙門氏菌多重耐藥比較嚴重,有研究結果顯示〔6-7〕:多重耐藥沙門氏菌株會通過食物鏈通過動物向人類傳遞,其耐藥性獲得的途徑主要為基因突變、外排泵、耐藥基因編碼的鈍化酶和滅活酶的產(chǎn)生、可移動的細菌遺傳耐藥基因元件及其轉移。動物的不合理用藥使其體內沙門氏菌產(chǎn)生耐藥性,這種耐藥通過食物傳遞給人類,人類的不合理或濫用藥物又使細菌的耐藥譜增寬,加劇細菌耐藥性,因此應從動物和人類兩方面引導抗生素的合理使用,雙管齊下,才能更好的減緩抗生素耐藥性變化的趨勢,為人類健康發(fā)揮長久作用。

〔1〕朱力軍.動物大腸桿菌的耐藥變化趨勢〔J〕.中國獸藥雜志,2001,35(2):16-18.

〔2〕周貴民,張軍民.我國細菌耐藥性監(jiān)測應注意的幾個問題〔J〕.中華檢驗醫(yī)學雜志,2004,27(10):5-6.

〔3〕中華人民共和國國家標準.食品衛(wèi)生微生物檢驗沙門氏菌檢驗(GB/T4789.4-2008)〔S〕.中國標準出版社 ,2008.

〔4〕Performance standards for antimicrobial susceptibility testing,Fifteenth informational supp lement,CLSI/NCCLS document M 100-S15〔S〕.2005,25(1):34-37.

〔5〕Fernando C,Julian D.Horizontal gene transfer and the origin of speciescies:lessons from bacteria.Trends Microbiol〔J〕,2000,133:128-133.

〔6〕Chen S,Zhao S,White DG,et al.Characterization of multiple-antimicrobial-resistance Salmonella serovars isolated from retail meats〔J〕.App l Environ Microbiol,2004,70(1):1-7.

〔7〕楊保偉,盛敏,席美麗,等.沙門氏菌抗生素抗性機理研究進展〔J〕.微生物學通報,2008,35(9):1479-1484.

Antimicrobial resistance of food borne and poultry-borne Salmonella in Hebi City,Henan Province

ZHANG Xiu-li,YANGBao-wei,L IAO Xing-guang,GUO Xiao-ling,CUAN Hui-xia
(Henan Center for Disease Control and Prevention,Zhengzhou 450016,China)

The purpose of the study was to understand the relationship between antimicrobial resistance and sero type distribution of poultry-borne and food borne Salmonella in Henan Province.The sample of fresh chicken meat in the marketplace and anal swab of chicken in different ages in the native large-scale chicken farm were collected random ly,and the Salmonella was isolated and identified according to GB/T4789.4-2008.The antimicrobial susceptibility of Salmonella was tested using agar dilution,and the results were determined according to the standard of CLSI/NCCLS,2005(Clinical Laboratory Standard Institute).The 81.5%of fresh chicken and 14.1%of chicken anal swab were positive to Salmonella,and the detection rate of Salmonella in broiler breeders(18.4%)was higher than that in young chicken(15.3%)and in adult chicken that would be slaughtered(2.0%).Antimicrobial resistance profiles of chicken in different ages were obviously different:Salmonella isolates from adult slaughtered chicken showed heavily antimicrobial resistance,while Salmonella strains from broiler breeders were almost susceptible to antimicrobial.Serotypes of Salmonella from fresh chicken and chicken anal swab were different.Although multidrug resistance was common,the resistance spectrum were different and the antimicrobial resistance profiles of Salmonella isolated from food and poultry were obviously different.There were also significant differences in the antibiotic resistance profiles of Salmonella from chicken in different ages,which showed the using of antibiotics in chicken farming was unreasonable.

foodbo rne;poultry-bo rne;Salmonella;serotype;antimicrobial resistance

R378.2

A

1002-2694(2010)12-1134-03

張秀麗,Email:zhangxl@hncdc.com.cn

1.河南省疾病預防控制中心,鄭州 450016;

2.西北農(nóng)林科技大學食品科學與工程學院,楊凌712100;

3.鶴壁市疾病預防控制中心,鶴壁 458030

2010-04-04;

2010-09-23