高效液相色譜法測定養陰明目顆粒中馬錢苷含量

馬 玲，葉 磊

(1.安徽省藥物研究所·安徽省中藥研究與開發重點實驗室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中醫學院藥學院，安徽 合肥 230031)

高效液相色譜法測定養陰明目顆粒中馬錢苷含量

馬 玲1，葉 磊2

(1.安徽省藥物研究所·安徽省中藥研究與開發重點實驗室，安徽 合肥 230022；

2.安徽中醫學院藥學院，安徽 合肥 230031)

目的建立測定養陰明目顆粒中馬錢苷含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m），流動相為乙腈－水（15∶85），流速1.0 mL/min，檢測波長為240 nm。結果馬錢苷進樣量在0.084～0.84!g范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 9），平均回收率為98.67%，RSD=0.67%（n=6）。結論高效液相色譜法簡便可行、專屬性強、重現性好，可較好地控制養陰明目顆粒的質量。

養陰明目顆粒；高效液相色譜法；馬錢苷

養陰明目顆粒是由山茱萸、枸杞子、沙苑子、三七、五味子、大薊炭等16味中藥組成的復方制劑，具有滋補肝腎、止血化瘀、清熱明目的功效，用于治療脾腎兩虛、肝郁火旺等所致黃斑變性及其他眼底退行性病變。為有效控制該制劑質量，筆者選擇方中君藥山茱萸的有效成分馬錢苷作為含量控制的指標成分，采用高效液相色譜法測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－10AVP型高效液相色譜儀（日本島津），包括單元泵、紫外檢測器、浙大N2000色譜工作站；AS3120B型超聲提取器。馬錢苷對照品（含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號為111640－200503）；養陰明目顆粒及缺山茱萸的陰性樣品（自制）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Promosil C18柱（250 mm×4.6 mm,5!m）；流動相：乙腈 －水（15 ∶85）；檢測波長 240 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：10!L。理論板數按馬錢苷計算應不低于3 000。

2.2 溶液制備

精密稱取常溫減壓干燥12 h的馬錢苷對照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含42!g的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取樣品顆粒約1 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理30 min,放冷，再稱定質量，用80%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL,加在中性氧化鋁柱（200～300目，5 g，內徑1 cm）上,用40%甲醇40 mL洗脫，收集流出液和洗脫液，蒸干，殘渣加50%甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，0.45!m微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取缺山茱萸的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法操作，制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液適量，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖（圖1）。結果表明馬錢苷色譜峰分離良好，且本品中其他藥材對馬錢苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密吸取對照品溶液（0.084 g/L）1，2，4，6，8，10 mL，置10 mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件注入液相色譜儀，記錄馬錢苷峰面積，以對照品進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=11 948 X－11.837,r=0.999 9（n=6）。結果表明，馬錢苷進樣量在0.084～0.84!g范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10!L共6次，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。結果的 RSD=1.17%（n=6），表明儀器精密度較好。

重現性試驗：取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法操作，各進樣10!L，按上述色譜條件注入液相色譜儀，依法測定。結果馬錢苷平均含量為0.908 mg/g，RSD=1.96%(n=6），表明方法重現性較好。

穩定性試驗：將同一供試品溶液放置0,1,2,4,6,8 h后分別測定。結果的 RSD=1.47%（n=6），表明供試品溶液在8 h內較穩定。

加樣回收試驗：取已知含量（0.908 mg/g）的樣品各6份，每份約0.45 g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入馬錢苷對照品溶液（42!g/mL）5，10，15 mL各2份，按供試品溶液制備方法操作并測定，結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，照供試品溶液制備方法制成溶液，分別精密量取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，按色譜條件注入液相色譜儀，用外標法以峰面積計算含量。結果批號為080904，080907，080910的樣品中馬錢苷含量分別為0.924，0.866，0.903 mg/g。

表1 馬錢苷加樣回收試驗結果(n=6）

3 討論

本品為含16味藥的復方制劑,且馬錢苷極性較強，參照《中國藥典》[1]選用80%甲醇進行超聲處理，進樣后雜質峰干擾太大，故參照相關文獻[2－3]，將80%甲醇處理后的樣品過中性氧化鋁柱，40%甲醇洗脫，最后以50%甲醇溶解，效果較理想。本試驗再次表明，高效液相色譜法方法可靠，靈敏、快速，專屬性強，重現性好，可作為養陰明目顆粒的定量分析方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005：20.

[2]譚秋紅.RP－HPLC法測定六味地黃丸中馬錢苷的含量[J].中國醫學工程，2007，15（7）：601 － 602.

[3]王玉峰，劉敏彥，李向軍，等.高效液相色譜法測定耳聾左慈丸中馬錢苷含量[J]. 中國藥業，2009，18（10）：42 － 43.

Determination of Loganin in Yangying Mingmu Granules by HPLC

Ma Ling1,Ye Lei2
(1.Anhui Provincial Institute of Pharmaceutical Research,Anhui Provincial Research& Development Key Laboratory of Chinese Materia Medica,Hefei,Anhui,China 230022; 2.College of Pharmacy,Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Hefei,Anhui,China 230031)

ObjectiveTo establish the external standard HPLC method for the determination of loganin in Yangying Mingmu Granules.Methods The Promosil C18column(250 mm×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase consisted of acetonitrile－water(15∶85).The flow rate was 1.0 mL/min.The UV detection wavelength was at 240 nm.Results The linear range for loganin was 0.084－0.84!g,r=0.999 9.The average recovery rate was 98.67%,RSD was 0.67%(n=6).Conclusion The method is proved to be simple with strong specificity and good reproducibility,which can be used to control the quality of the preparation.

Yangying Mingmu Granules;HPLC;loganin

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)05－0032－02

馬玲,女,副研究員,主要從事中藥研究與開發工作，（電話）0551 － 3669425（電子信箱）lingma518@soh9.com。

2009－03－03；

2009－06－20)