斜帶髭鯛外周血紅細胞和血栓細胞的超微結構

梅景良, 閆 琳, 王湘平

(1. 福建農林大學 動物科學學院; 2. 福建農林大學 測試中心, 福建 福州 350002)

斜帶髭鯛外周血紅細胞和血栓細胞的超微結構

梅景良1, 閆 琳1, 王湘平2

(1. 福建農林大學 動物科學學院; 2. 福建農林大學 測試中心, 福建 福州 350002)

應用透射電鏡技術研究了斜帶髭鯛(Hapalogenys nitens)外周血紅細胞和血栓細胞的超微結構。結果表明：紅細胞呈卵圓形或長橢圓形, 胞核居中, 異染色質呈斑塊狀分布; 胞質中含有線粒體、多核糖體、小囊泡、高爾基體和邊緣帶; 可見核正處于分裂的細胞或雙核細胞, 以及凋亡紅細胞。血栓細胞形態多樣, 細胞表面有的無突起, 有的有短的突起或長的絲狀偽足; 胞核位于細胞中央, 異染色質呈片狀或網狀分布; 胞質中含有豐富的游離核糖體、微管, 少量的粗面內質網、線粒體、致密顆粒和大液泡; 由大量空泡和大小不一、形態各異的小管構成的表面相連小管系遍布于胞質中, 成為血栓細胞的一個顯著特征; 偶見血栓細胞以其絲狀偽足抱裹異物顆粒的現象。

紅細胞; 血栓細胞; 超微結構; 外周血; 斜帶髭鯛(Hapalogenys nitens)

作為血液有形成分的血細胞既是魚類機體的組成部分, 也是機體主要的免疫細胞, 在維持機體正常的生理機能和防御疾病的過程中發揮著重要作用。魚類的血液學參數資料不但可以反映魚體的生理狀態和健康情況, 也常結合其他常規診斷方法用來確定和評估導致魚體產生應激進而致病的環境條件[1～3], 所以一直以來都是人們極感興趣的熱門研究課題[4～7]。斜帶髭鯛(Hapalogenys nitens)是中國東南沿海近年來重要的經濟魚類養殖對象, 有關其人工繁殖、遺傳特性和養殖條件等方面的研究已有較多報道[8～11], 對其組織器官中肥大細胞的超微形態學結構亦有見報道[12], 然而有關其血細胞形態學的研究資料卻極少, 目前僅見作者關于其嗜中性粒細胞核內包涵體超微結構的報道[13]。故此, 作者對斜帶髭鯛外周血細胞的超微結構進行了系統研究, 旨在豐富魚類外周血細胞的形態學資料。作者就紅細胞和血栓細胞的超微結構研究結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用 8尾人工養殖斜帶髭鯛購自福州市農貿市場, 觀察體表健康無病, 個體大小接近, 體質量為317.8～351.3 g, 體長為25.9～28.2 cm?；铙w運回實驗室, 暫養于水族箱2 d直到采集血樣, 其間不投餌料,用空氣壓縮機24 h充氣增氧。

1.2 方法

實驗魚用MS-222麻醉, 心臟采血2 mL注入離心管中, 3 000 r/min離心 10 min, 除去上清液, 在4℃1.5%多聚甲醛-3%戊二醛溶液中預固定 20 min,挑取白細胞層, pH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗2～3次, 于5℃低溫環境下切成約2 mm×1 mm×1 mm大小, 再放入固定液中固定1周。之后將樣本經4℃PBS清洗, 1%鋨酸后固定, 酒精-丙酮梯度脫水, 環氧樹脂包埋, 半薄切片以亞甲藍染色后在光鏡下定位,LKB-V型超薄切片機切片, 醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色, JEM-1010透射電鏡觀察、拍片。

2 結果

2.1 斜帶髭鯛紅細胞的超微結構

斜帶髭鯛外周血紅細胞呈卵圓形或長橢圓形,表面光滑無胞突。胞核居中, 呈卵圓形, 核膜清晰,部分細胞可見核膜周隙寬闊, 核孔明顯。濃密的異染色質沿核膜內側周邊呈帶狀分布, 核中央呈斑塊狀分布(圖1A)。大部分細胞胞質均勻, 電子密度較低;少數細胞胞體較大, 胞質電子密度相對偏低而較為透亮(圖1B)。胞質中含有1～5個線粒體, 線粒體呈卵圓形, 板層嵴與長軸平行, 嵴間腔清晰可見; 還散布著少量多核糖體、小囊泡和一個高爾基體, 在靠近膜下的胞質偶爾可見邊緣帶(圖1A、圖1C)。除可見到核正處于分裂的細胞或雙核細胞之外(圖1D、圖1E),尚可見凋亡紅細胞, 細胞表面較粗糙, 細胞核染色質凝聚、邊集呈環狀排列, 線粒體解體空化或致密化而結構較為模糊, 并移近胞膜, 有的與胞膜發生融合(圖1F)。

2.2 斜帶髭鯛血栓細胞的超微結構

血栓細胞呈紡錘形、長紡錘形、橢圓形、圓形或不規則形, 有的細胞表面較光滑無胞突, 有的細胞表面則存在較多突起或凹陷(圖1G)。核位于細胞中央, 較大, 一側常有較深的凹入缺刻, 故因切面位置不同, 核可呈各種形狀, 有圓形、長橢圓形, 甚至出現雙核形; 異染色質豐富, 電子致密, 多集中在核膜內側分布, 核中央呈片狀或網狀分布。胞質較少,主要集中于兩端, 故垂直于長軸橫切的細胞僅呈現為一薄層胞質包于核外(圖1G)。胞質中除含有豐富的游離核糖體和微管之外, 還有少量粗面內質網,這些內質網有的相互交聯成網狀, 核糖體大多已脫落; 胞質中可見個別大型線粒體, 線粒體的板層嵴與長軸垂直, 嵴間腔清晰可見(圖1H)。胞質中偶見電子密度較均勻的致密顆粒(圖2A)。

圖1 斜帶髭鯛外周血紅細胞和血栓細胞電鏡圖Fig. 1 Electron micrographs of peripheral blood erythrocytes and thrombocytes in skewband grunt (Hapalogenys nitens)

電鏡下, 斜帶髭鯛血栓細胞最具特征性的結構是普遍存在于胞質中的表面相連小管系(surfaceconnected canalicular system, SCCS)。根據這些表面相連小管系所呈現的超微結構特點不同, 可將其分為SCCS1、SCCS2和SCCS3三種類型(圖1H, 圖2A)。SCCS1為細管型表面相連小管系, 其超微結構與粗面內質網較為相似, 細管內基質電子密度與胞質接近, 但因無核糖體附著, 故表面較為光滑; 單根存在或交叉連接成網, 在細胞膜表面常有開口(圖1H, 圖2B), 并偶爾可見其開口處有分泌物排出(圖2C)。SCCS2為小囊泡型表面相連小管系, 由大量小囊泡和小管構成, 囊泡大小約為90 nm×60 nm, 其超微結構類似于滑面內質網, 囊泡內基質電子密度中等或稍低于胞質; 小囊泡常數個緊靠在一起或已融合呈小管狀, 分布于膜下胞質中的小管系在細胞膜表面也有開口(圖2A)。在斜帶髭鯛血栓細胞中存在最為普遍的是 SCCS3, 即大空泡型表面相連小管系。構成 SCCS3的空泡大小不等、形狀各異, 有的空泡大小約為340 nm×220 nm, 呈橢圓形, 開口于細胞膜表面的則呈熱水瓶狀, 泡內基質電子密度極低(圖2A);有的空泡較大, 約為580 nm×360 nm, 呈橢圓形或短管狀, 泡內基質透亮, 在細胞膜表面有明顯的開口(圖2D); 有的空泡內具有顆粒狀內含物, 其結構較為模糊, 與胞質存有聯系(圖2E); 有的空泡內有長條形胞質結構伸入, 使空泡呈彎管狀(圖2F); 有的大空泡內嵌套著 1～2個由胞質相互聯系在一起的中等空泡, 形成奇特的“空泡迷宮”(圖2G)。

一些血栓細胞的胞質尚存在個別大液泡, 這種液泡其內部基質有的較均勻, 電子密度接近或稍低于細胞基質(圖2E); 有的基質不甚均勻而呈絮凝狀, 其中有電子密度較高的微細點狀物散在分布(圖2F)。偶爾可見此種液泡通過SCCS1而與SCCS3相連(圖2F)。

圖2 斜帶髭鯛外周血血栓細胞電鏡圖Fig. 2 Electron micrographs of peripheral blood thrombocytes in skewband grunt (Hapalogenys nitens)

有的細胞胞質向外伸出許多指狀突起或細長的絲狀偽足(圖2E、G)。偶見血栓細胞以其絲狀偽足抱裹異物顆粒的現象(圖2H)。圖2H中可見到絲狀偽足與同側的指狀突起正在接合而形成一個大泡, 其接合處的緊密連接清晰可見; 絲狀偽足和指狀突起的泡內側胞質膜面呈現強烈的嗜染性, 泡中的異物顆粒電子密度中等, 結構已較為模糊不清。

3 討論

3.1 關于斜帶髭鯛紅細胞的超微結構

研究表明, 斜帶髭鯛的紅細胞是一種有核細胞。外周血中的紅細胞明顯存在兩個不同發育階段, 一個是不成熟階段, 這個階段紅細胞的胞質因血紅蛋白含量較少而致電子密度較低較透亮; 另一個是成熟階段, 細胞胞質電子密度較高, 且細胞數量占絕對優勢, 這些現象與其他魚類紅細胞的觀察結果相似[4,14]。本研究中觀察到了核正處于分裂或已成雙核的紅細胞, 表明斜帶髭鯛的紅細胞可以在外周中進行直接分裂。國內學者在一些魚類的外周血中也發現了紅細胞的直接分裂現象, 但他們是在顯微鏡而非在電鏡下觀察到這類紅細胞的。因此, 在電鏡下觀察到紅細胞的直接分裂現象這在國內尚屬首次報道。

在斜帶髭鯛紅細胞中很容易觀察到線粒體, 這一點與 López-Ruiz 等[14]、Sekhon 等[15]、梅景良等[5]、袁仕取等[16]、周玉等[17]對一些魚類紅細胞的觀察結果相似, 但范瑞青等[18]、朱洪文等[19]在個別魚類的紅細胞中卻未能觀察到線粒體。目前一般認為, 魚類紅細胞電鏡樣品中是否能夠觀察到線粒體很可能與魚類的種間差異、魚齡或紅細胞的發育狀態不同有關[5,16]。當然, 在紅細胞中觀察不到線粒體, 也不排除可能是因為線粒體已被降解代謝或已被排出胞外所致, 如本研究中曾觀察到有些線粒體結構已模糊不清, 并不斷移近細胞膜而與之融合; Sekhon等[15]在對虹鱒(Salmo gairdneri)紅細胞的觀察過程中也發現, 隨著紅細胞的成熟, 胞質中降解的線粒體不斷被排出胞外。在斜帶髭鯛紅細胞中尚觀察到多核糖體、小囊泡和高爾基體, 這與 López-Ruiz等[14]、Sekhon等[15]的觀察結果相一致, 而與朱洪文等[19]的觀察結果不同。在斜帶髭鯛紅細胞胞質中存在較多的細胞器表明, 這種紅細胞的代謝功能較強, 并且相較于哺乳動物外周血紅細胞而言其分化程度較低。

在斜帶髭鯛紅細胞中尚偶然發現一種現象, 就是其膜下胞質中存在著邊緣帶(marginal band)。關于魚類紅細胞中的邊緣帶, 國外已有較多報道[4,15,20,21],但國內相關報道極少[22]。邊緣帶也稱邊緣維管束(marginal microtubule bundle),有人認為它們是低等脊椎動物有核紅細胞的特征之一[22], 并可能具有骨架的功能而在維持紅細胞的彈性和形狀方面起重要作用, 以及可能在細胞內的物質轉運方面起促進作用[4,23,24]。但到目前為止, 對于大多數研究結果來說,在魚類紅細胞中存在邊緣帶并不是一種普遍現象[14,16,17,20], 因此斷定邊緣帶是低等脊椎動物有核紅細胞的一種特征這一觀點是值得商榷的。

3.2 關于斜帶髭鯛血栓細胞的超微結構

有學者認為, 魚類血栓細胞是僅次于紅細胞的常見血細胞種類[5,14], 但與紅細胞和白細胞相比較而言, 有關血栓細胞形態學方面的研究卻很少[14]。血栓細胞是參與魚類凝血過程的外周血細胞, 它相當于哺乳動物的血小板[25,26]。魚類血栓細胞與哺乳動物血小板之間最大的不同之處在于魚類血栓細胞是有核的,并且核質比較大, 斜帶髭鯛的血栓細胞也不例外。

斜帶髭鯛血栓細胞在超微結構方面不同于其他血細胞的一個最顯著特征是其胞質中遍布著表面相連小管系, 這與一些魚類血栓細胞的形態結構特點是相一致的[4,14,27,28]。表面相連小管系曾有不同的名稱, 如“表面相連系統”(surface-connected system)、“開放小管系”(open canalicular system)[29], “吞飲小囊泡”(pinocytotic vesicle)[15,20], 目前普遍采用的是“表面相連小管系”這一名稱[4,14,29]。在人類血小板胞質內也存在著小管系, 但有兩套, 一套是開放小管系, 呈現為大小不等的空泡狀, 在血小板表面有開口; 另一套是致密小管系(dense tubular system), 屬封閉性小管, 多分布在血小板周邊, 管腔電子密度中等, 相當于滑面內質網[30]。在低等脊椎動物有核血栓細胞中所發現的表面相連小管系在結構上基本都與前者相同[4,14,27,29]。Daimon等[27]根據研究結果發現, 表面相連小管系并非由眾多孤立的空泡構成, 而是由遍布于胞質的小管相互連通構成的一個管網結構, 電鏡下所見到的空泡只是小管的橫切面。由于表面相連小管系的總面積可達血栓細胞表面積的 4倍之多[4,28], 因此通常認為, 表面相連小管系的作用在于擴大胞漿膜面積以提高血栓細胞與外界之間進行代謝交換的效率[4,27], 這可能也就是斜帶髭鯛血栓細胞存在“空泡迷宮”的意義所在。還有學者發現在表面相連小管系內含有鈣鎂依賴性ATP酶[31]和存儲著鈣離子[32,33], 并且在凝血過程中對細胞所合成化學物質的釋放起著通道性的作用[27]。當然, 表面相連小管系也已成為電鏡下血栓細胞有別于淋巴細胞的一個標志性特征, 因為淋巴細胞中并不具有表面相連小管系[4]。

本研究表明, 斜帶髭鯛血栓細胞中明顯存在著三種不同形態的表面相連小管系SCCS1、SCCS2和SCCS3, 并呈現出了一種有趣的現象, 就是具有SCCS1、SCCS2的血栓細胞一般細胞表面較光滑無胞突, 而具有SCCS3的細胞表面則存在較多指狀突起或絲狀偽足。Sano-Martins等[34]研究表明, 當蛇Waglerophis merremii的靜息態血栓細胞受到二磷酸腺苷(ADP)激活時, 其形態就會由橢圓體變成球狀體, 且細胞表面的突起大量增多, 表面相連小管系顯著擴張。人類的血小板也同樣具有兩種形態, 一是呈雙凸圓盤狀未激活態, 一種是具有絲狀偽足而呈不規則形的激活態[30]。據此似乎可以推測得到, 以SCCS1分布為主的斜帶髭鯛血栓細胞是處于靜息態的血栓細胞, 以 SCCS3分布為主的是已經被激活后的血栓細胞, 而以SCCS2分布為主的則是正處在激活過程中的血栓細胞。但是, 在研究中還發現了另一些奇特的現象, 即以SCCS1分布為主的血栓細胞其所含有的線粒體普遍為大型線粒體, 有的長度可達1.55μm, 約為胞核的一半長, 同時在 SCCS1的開口處可見有胞內物質排出。這些跡象有表明, 含有SCCS1血栓細胞的代謝功能相當活躍, 很可能并非處于靜息狀態, 而是在執行某種特定的生理功能。因此, 斜帶髭鯛血栓細胞中這三種不同形態的小管系所代表的確切生理學意義尚需進一步的研究探討。

斜帶髭鯛血栓細胞胞質中還含有豐富的游離核糖體、微管和少量的粗面內質網、線粒體, 這與Sekhon 等[15]、Daimon 等[27]、Daimon 等[28]、Ferguson[35]對其他一些魚類的研究結果是相一致的, 但對其中相互交聯成網狀結構的內質網筆者則傾向于認為這很可能是斜帶髭鯛血栓細胞的致密小管系, 因為它與 Daimon等[36]在雞血栓細胞中所觀察到的致密小管系結構類似。在斜帶髭鯛血栓細胞胞質中尚觀察到少量電子密度較均勻的致密顆粒, 這些顆粒在形態學上較類似于人類血栓細胞的α顆粒[30]。Esteban等[21]在舌齒鱸(Dicentrarchus labrax)、Cannon等[37]在斑(Ictalurus punctatus)的血栓細胞中也發現有類似的致密顆粒, 但 López-Ruiz等[14]在金頭鯛(Sparus aurata)血栓細胞中未能觀察到這種顆粒。Sano-Martins等[34]在蛇W. merremii的血栓細胞中除了觀察到α顆粒之外, 還觀察到了次級溶酶體, 并且隨著血栓細胞的激活這兩種顆粒的內容物都會被釋放。在斜帶髭鯛一些血栓細胞中存在的個別大液泡,由于其內部呈較均勻低電子密度基質或絮凝狀基質,完全有別于SCCS3的大空泡, 并且其內容物很可能通過SCCS1和SCCS3進行外排, 因此這種大液泡在形態上與 Daimon等[38]所描述的雞血栓細胞的大空泡較為接近, 并相當于哺乳動物血栓細胞的致密顆?；蛉祟愌毎摩念w粒[30]。

在本研究中觀察到的血栓細胞抱裹異物顆?，F象, 根據其絲狀偽足和指狀突起的泡內側胞質膜面所呈現的強烈嗜染性, 以及泡中異物顆粒的結構已模糊不清, 可以推測這可能是血栓細胞正通過泡內側胞質膜面分泌一些酶類對所抱裹異物進行消化的一種吞噬作用。由觀察結果尚可以發現, 這種吞噬作用是一個主動的過程, 這與 Burrows等[39]的觀點一致。關于魚類血栓細胞對各種異物(包括細菌和其他抗原)是否具有吞噬能力的問題, 一直存有爭議[40,41]。但許多學者的研究結果表明, 魚類血栓細胞不僅能吞噬碳顆粒[35,39]和細菌[42], 還能吞噬消化血循中的細胞殘骸[43]和蠶蝕分解衰老紅細胞[5]。因此從形態學的角度上來說, 魚類血栓細胞不應只是一種參與凝血過程和免疫過程的血細胞[41,44], 很可能還是一種具有吞噬作用的細胞。

[1]Beelen R, Boyd B, Garavello J C,et al. A cytochemical,light and electron microscopic study of the peripheral blood leucocytes of hybrid surubim catfish (Pseudoplatystoma corruscans×Pseudoplatystoma fasciatum)[J]. Comp Clin Path, 2003, 12：61-68.

[2]Pavlidis M, Futter W C, Katharios P,et al. Blood cell profile of six Mediterranean mariculture fish species[J].J Appl Ichthyol, 2007, 23：70-73.

[3]Sepici-Din?el A, Benli A C K, Selvi M,et al. Sublethal cyfluthrin toxicity to carp(Cyprinus carpioL.)fingerlings：biochemical, hematological, histopathological alterations[J]. Ecotoxicol Environ Saf, 2009, 10：1 016-1 019.

[4]Esteban M A, Mu?oz J, Meseguer J. Blood cells of sea bass (Dicentrarchus labraxL.). Flow cytometric and microscopic studies[J]. The Anatomical Record, 2000,258：80-89.

[5]梅景良, 王壽昆, 祁保民, 等. 黑鯛外周血細胞的顯微和超微結構觀察[J]. 熱帶海洋學報, 2008,27(2) ：45-53.

[6]陳剛, 周暉, 葉富良, 等. 美國紅魚血細胞觀察[J].熱帶海洋學報, 2006, 25(2)：59-65.

[7]周永燦, 邢玉娜, 馮全英. 魚類血細胞研究進展[J].海南大學學報(自然科學版), 2003, 21(2)：171-176.

[8]方瓊珊, 鄭樂云, 王涵生. 斜帶髭鯛人工催產技術研究[J]. 海洋科學, 2001, 25(12)：15-17,45.

[9]王世鋒, 杜佳瑩, 蘇永全, 等. 斜帶髭鯛野生與養殖群體遺傳結構的ISSR分析[J]. 海洋學報, 2007, 29(4)：105-110.

[10]張雅芝, 胡家財, 謝仰杰, 等. 不同餌料對斜帶髭鯛稚魚生長和存活的影響[J]. 海洋科學, 2003, 27(1)：30-33.

[11]鄭樂云, 方瓊珊, 王涵生, 等. 鹽度對斜帶髭鯛仔魚活力及攝食率的影響[J]. 海洋科學, 2004, 28(4)：5-7,28.

[12]梅景良, 閆琳, 王湘平. 斜帶髭鯛后腸、頭腎及脾臟中肥大細胞超微結構觀察[J]. 海洋學報, 2009, 31(2)：120-128.

[13]梅景良, 閆琳, 王湘平. 斜帶髭鯛外周血嗜中性粒細胞核內包涵體的超微結構[J]. 中國實驗動物學報,2008, 16(6)：431-434.

[14]López-Ruiz A, Esteban M A, Meseguer J. Blood cells of the gilthead seabream (Sparus aurataL.)：light and electron microscopic studies[J]. The Anatomical Record, 1992, 234(2)：161-71.

[15]Sekhon S S, Beams H W. Fine structure of the developing trout erythrocytes and thrombocytes with special reference to the marginal band and the cytoplasmic organelles[J]. American Journal of Anatomy, 1969,125(3)：353-373.

[16]袁仕取, 張永安, 姚衛建, 等. 鱖魚外周血細胞顯微和亞顯微結構的觀察[J]. 水生生物學報, 1998, 22(1)：39-45.

[17]周玉, 郭文場, 楊振國, 等. 歐洲鰻鱺外周血細胞的顯微和超微結構[J]. 動物學報, 2002, 48(3)：393-401.

[18]范瑞青, 姜明, 汝少國, 等. 不同滲透壓下美國紅魚外周血細胞超微結構的變化[J]. 海洋科學, 2000,24(11)：48-53.

[19]朱洪文, 王浩, 秦國強. 鯽魚(Carassius auratus)外周血細胞顯微和亞顯微結構的觀察[J]. 動物學研究,1985, 6(2)：147-153.

[20]Fawcett D W, Witebsky F. Observations on the ultrastructure of nucleated erythrocytes and thrombocytes with particular reference to the structural basis of their discoidal shape[J]. Z Zellforsch, 1964, 62：785-806.

[21]Esteban M A, Meseguer J, García A A,et al.Erythropoiesis and thrombopoiesis in the head kidney of the sea bass(Dicentrarchus labraxL.). An ultrastructural study[J]. Arch Histol Cyto, 1989, 152：407-419.

[22]傅莉娟, 高平, 嚴紹頤. 金魚成熟紅血細胞的超微結構研究[J]. 科學通報, 1988, 33(15)：1 178-1 181.

[23]Cohen W D. Observations of the marginal band system of nucleated erythrocytes[J]. The Journal of Cell Biology, 1978, 78：260-273.

[24]Joseph-Silverstein J, Cohen W D. The cytoskeletal system of nucleated erythrocytes. III.Marginal band function in mature cells[J]. The Journal of Cell Biology, 1984, 98：2 118-2 125.

[25]Doggett T A, Harris J E. Ultrastructure of the peripheral blood leucocytes ofOreochromis mossambicus[J].Journal of Fish Biology, 1989, 34(5)：747-756.

[26]Jagadeeswaran P, Sheehan J P, Craig F E,et al. Identification and characterization of zebrafish thrombocytes[J]. British Journal of Haematology, 1999, 107：731-738.

[27]Daimon T, Uchida K. Ultrastructural evidence of the existence of the surface connected canalicular system in the thrombocyte of the shark(Triakis scyllia)[J]. J Anat,1985, 141：193-200.

[28]Daimon T, Mizuhira V, Takahashi I,et al. The surface connected canalicular system of carp(Cyprinus carpio)thrombocytes：its fine structure and three-dimensional architecture[J]. Cell Tissue Res, 1979, 203：355-365.

[29]Daimon T, Mizuhira V, Uchida K. Fine structural distribution of the surface-connected canalicular system in frog thrombocytes[J]. Cell Tissue Res, 1979, 201：431-439.

[30]成令忠, 鐘翠平, 蔡文琴. 現代組織學[M]. 上海：上海科學技術文獻出版社, 2003. 286-301.

[31]Cutler L S, Feinstein M B, Christian C P. Cytochemical localization of ouabain-sensitive (K+)-dependentp-nitrophenyl phosphatase (transport ATPase) in human blood platelets[J]. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry, 1980, 28：1 183-1 188.

[32]Daimon T, Uchida K, Mizuhira V. Ultrastructural localization of acid protein polysaccharides and calcium in the vacuoles of the chicken thrombocyte[J]. Histochemistry, 1977, 52：25-32.

[33]Daimon T, Mizuhira V, Uchida K. Ultrastructural localization of calcium around the membrane of the surface connected system in the human platelet[J]. Histochemistry, 1978, 55：271-279.

[34]Sano-Martins I S, Jared C, Brunner A J R. Ultrastructural alterations in thrombocytes of the snakeWaglerophis merremiiafter activation by ADP[J].Comparative Haematology International, 1994, 4：226-231.

[35]Ferguson H W. The ultrastructure of plaice(Pleuronectes platessa)leucocytes[J]. J Fish Biol, 1976, 8：139-142.

[36]Daimon T, Uchida K. Electron microscopic cytochemical observations on the membrane systems of the chicken thrombocyte[J]. J Anat, 1978, 125(1)：11-21.

[37]Cannon M S, Mollenhauer H H, Eurell T E,et al. An ultrastructural study of the leukocytes of the channel catfish,Ictalurus punctatus[J]. J Morphol, 1980, 164：1-23.

[38]Daimon T, Uchida K. Cytochemical demonstration of amine-storing vacuoles and lysosomes in the chicken thrombocytes[J]. Histochemistry, 1982, 75：309-317.

[39]Burrows A S, Fletcher T C, Manning M J. Haematology of the turbot, Psetta maxima(L.)：ultrastructural, cytochemical and morphological properties of peripheral blood leucocytes[J]. J Appl Ichthyol, 2001, 17：77-84.

[40]Meseguer J, Esteban M A, Rodríguez A. Are thrombocytes and platelets true phagocytes?[J]. Microscopy Research and Technique, 2002, 57：491-497.

[41]Passantino L, Cianciotta A, Patruno R,et al. Do fish thrombocytes play an immunological role? Their cytoenzymatic profiles and function during an accidental piscine candidiasis in aquarium[J]. Immunopharmacology and Immunotoxicology, 2005, 27：345-356.

[42]Stosik M, Deptula W, Trávnicek M. Studies on the number and ingesting ability of thrombocytes in sick carps(Cyprinus carpioL.)[J]. Vet Med, 2001, 46：12-16.

[43]Tavares-Dias M, Ono E A, Pilarski F,et al. Can thrombocytes participate in the removal of cellular debris in the blood circulation of teleost fish? A cytochemical study and ultrastructural analysis[J]. J Appl Ichthyol, 2007, 23：709-712.

[44]K?llner B, Fischer U, Rombout J H W M,et al. Potential involvement of rainbow trout thrombocytes in immune functions：a study using a panel of monoclonal antibodies and RT-PCR[J]. Dev Comp Immunol, 2004,28：1 049-1 062.

Ultrastructural study on peripheral blood erythrocytes and thrombocytes in skewband grunt (Hapalogenys nitens)

MEI Jing-liang1, YAN Lin1, WANG Xiang-ping2
(1. College of Animal Science; 2. Test Center, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China)

Mar., 24, 2008

erythrocyte; thrombocyte; ultrastructure; peripheral blood;Hapalogenys nitens

The aim of the present paper was first to examine the peripheral blood erythrocytes and thrombocytes in skewband grunt (Hapalogenys nitens) by transmission electron microscopic method and second to characterize them ultrastructurally. Subsequent study showed that erythrocytes were oval or elongated ellipsoidal cells with a central, oval nucleus with heterochromatin blocks. A few dividing or divided nuclei appeared in the cells. Scarce organelles such as some mitochondria, polyribosomes, small vesicles and an occasional small Golgi complex were found in the cytoplasm. A marginal band of microtubules was presented beneath the plasmalemma. Some apoptotic red blood cells were also seen. On the electron micrographs, thrombocytes were variable in form with short pseudopodia, long filopodia or no protrusion. The nucleus exhibited the characteristics of large heterochromatin blocks or networks. Organelles such as free ribosomes and microtubules were abundant, rough endoplasmic reticulum,mitochondria, electrondense granules and largr vesicles were scarce. The surface-connected canalicular system(SCCS) formed by numerous vacuoles and canaliculi of different sizes and shapes has a distinguishing feature of thrombocytes and distributed throughout the cytoplasm. Meanwhile, the phagocytosis of thrombocytes was described. And the phagocytic ability of piscine thrombocytes was also discussed in this paper.

Q172 文獻標識碼：A 文章編號：1000-3096(2010)02-0080-06

2008-03-24;

2009-05-12

福建省自然科學基金資助項目(X0650005)

梅景良(1967-), 男, 福建惠安人, 副教授, 碩士, 主要從事水產動物疾病防治研究, 電話：0591-87694452, E-mail：fujianmjl-@126.com

梁德海)