烤煙煙葉胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶分離條件的優化
2010-01-01 00:00:00賈峰魏慶華杜錚王彩霞黃曉書劉衛群
山東農業科學 2010年6期
摘要：通過不同流動相、測定溫度、流速的對比，優化了分離煙葉總DNA中胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的高效液相色譜法。烤煙煙葉DNA采用CTAB法提取，高氯酸水解，用KOH調節pH到3－5，取上清液測定。色譜柱為Nucleosil C18(250mm×4.6mm，5μm)。優化后測定條件為：流動相采用甲醇：5mmol／L戊烷磺酸鈉(10:90，V／V)，流速0.7ml／min，柱溫30℃，檢測波長273nm，進樣量20μl。該方法簡化了流動相的配制，縮短了分離時間，胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的加標回收率分別為103.50％和96.67％，相對標準偏差為2.35％和2.80％。用該方法研究烤煙煙葉發育過程中總DNA胞嘧啶和5－甲基胞嘧啶的含量，效果良好，符合煙葉生長發育規律。
關鍵詞：反相高效液相色譜；烤煙煙葉；5－甲基胞嘧啶；胞嘧啶
中圖分類號：S572－34 文獻標識號：A 文章編號：1001－4942(2010)06－0094－04
