A型流感病毒PB1-F2蛋白的原核表達(dá)\\純化及鑒定

摘要：對(duì)A型流感病毒PB1-F2蛋白進(jìn)行了原核表到及純化，獲得了谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)-PB1-F2融合蛋白，以用于研究流感病毒PB1-F2蛋白的功能及分子作用機(jī)制。以RT-PCR方法擴(kuò)增PB1-172基因，將其克隆至原核表達(dá)載體pGEx-6P-1上。重組質(zhì)粒pGEx-6P-1-PB1-F2轉(zhuǎn)化大腸桿菌(ES-cherichia coli)菌株B121，并誘導(dǎo)表達(dá)，利用谷胱甘肽-Sepharosae 4B親和柱進(jìn)行純化，所得產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE、Westem b10t試驗(yàn)鑒定。結(jié)果顯示，大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)。表達(dá)出了相對(duì)分子量約為36kDa的蛋白，與GST-PB1-F2融合蛋白大小相符；Western blot鑒定顯示，該融合蛋白能夠被抗GST的抗體特異性識(shí)別。試驗(yàn)在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)純化了GST-PB1-F2融合蛋白，為深入研究PB1-172蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。