蟬擬青霉對小菜蛾致病性的研究

譚艾娟　歐　翔　劉愛英

摘要應用4株蟬擬青霉開展對小菜蛾致病性的研究。結果表明:4株蟬擬青霉分生孢子、菌絲對小菜蛾的致病性有一定差異,其中GZDXIFR4611的感染致死效果最好,孢子懸液的致死率可達到70%,菌絲懸液的致死率可達到65%,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供了參考數據。

關鍵詞蟬擬青霉;小菜蛾;致病性

中圖分類號 S476.12 文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)15-0369-01

StudyonPathogenicityofPaecilomycescicadaetoPlutella xylostella

TAN Ai-juanOU XiangLUI Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025)

AbstractTo investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae(PC)to Plutella xylostella(L.),the insecticidal mortality of the 4 strains of PC were tested. The results showed that the spore and the hyphae of 4 strains of PC had great differences in the pathogenicity. The highest insecticidal mortalitywas GZDXIFR4611,whose mortality in spore suspension was 70% and in hyphae suspension was 65%.The results provided reference for the use of Paecilomyces cicadae as bio-control fungi.

Key wordsPaecilomyces cicadae;Plutella xylostella;pathogenicity

蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)又名蟬花,是由子囊菌類麥角菌科真菌大蟬草(Cordyceps cicadae)的子實體及其寄主山蟬(Cicadeflammata)幼蟲的蟲體部構成[1]。擬青霉屬真菌作為一類重要的生防真菌可以侵染多種害蟲,產生多種具有生物活性的代謝產物,在害蟲生物防治上有著廣泛的應用[2]。蟬擬青霉既是名貴中藥,又有較高的致病性,可以寄生鱗翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆蟲[3]。小菜蛾(Plutella xylostella(L.))屬鱗翅目菜蛾科,在我國南、北方均有分布,危害植物多達40種以上,也是熱帶和亞熱帶十字花科蔬菜的重要害蟲[4]。對小菜蛾的防治起初采用化學農藥,隨著其對化學農藥耐藥性的增加以及農藥殘留毒性等弊端日益凸顯,生物防治成為當今研究的熱點[5]。現報道4株蟬擬青霉對小菜蛾的致病性,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數據,有一定的應用價值。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試菌株。蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)共4株:GZDXIFR4611采自貴州省貴陽市森林公園,GZDXIFR 4718采自貴州省梵凈山,GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山,GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由貴州大學真菌資源研究所分離、鑒定、保存。

1.1.2試驗試蟲。供試小菜蛾由貴州省農科院植保所提供。

1.1.3培養基。①PDA培養基:馬鈴薯200g切塊,用水煮沸30min,加蔗糖20g、瓊脂20g、水補足1 000mL,pH值自然。②液體培養基[6]:葡萄糖20g,酵母膏5g,K2HPO4 1g,水補足1 000mL,pH值6.5。

1.2試驗方法

1.2.1菌培養。①斜面培養:將4株菌分別接種到PDA試管斜面上,25℃恒溫培養7d,備用。②平板培養:將活化的斜面菌種接種于PDA平板,25℃恒溫培養15d,備用。③液體種子培養:用接種環將已活化的試管斜面菌種接種到裝有50mL液體培養基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,搖床振蕩培養18～20h。④液體發酵培養:將種子培養液按5%的接種量接種到裝有50mL液體培養基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,搖床振蕩培養72～96h。

1.2.2殺蟲制劑準備。①孢子懸液:在培養好的平板菌落上倒入適量的0.05%土溫-80溶液,用接種環輕輕刮下孢子,充分振蕩后用4層紗布濾入無菌三角瓶中,調整孢子濃度為1×107個/mL、2×107個/mL、3×107個/mL,備用。②菌絲懸液:將搖瓶培養好的菌絲用無菌水洗滌除去發酵液,用玻璃勻漿器破碎細胞,無菌水稀釋備用,稀釋倍數(w∶v)為1倍、2倍、5倍。

1.2.3致病性測定。參照安建梅[7]、陳祝安等[8]方法,在直徑為15cm的培養皿內放入圓形濾紙,滅菌、冷卻,將小菜蛾2～3齡的幼蟲分別浸于配好的待測溶液中。每濃度處理20頭蟲,浸漬10～20s后放入培養皿中,飼喂新鮮甘藍菜葉片,放在20～25℃室溫下飼養,每天更換新鮮的甘藍菜葉片,并在培養皿內放濕棉球以保持高濕,逐日統計感染死亡率。以無菌水為對照,設3個重復。致死率=試驗組死亡率-對照組死亡率。

2結果與分析

2.1感染癥狀

在試驗過程中,小菜蛾感染了蟬擬青霉后1～2d長得很慢,而對照長得很快,可見菌液對小菜蛾有抑制生長的作用。處理后4～7d蟲體僵硬,出現死亡高峰,繼續培養1～2d 后,蟲體被白色菌絲覆蓋,無孢梗束形成,對感染的小菜蛾進行粘片顯微觀察,可見蟬擬青霉菌絲形成的產孢結構和分生孢子。

2.24株蟬擬青霉菌絲懸液對小菜蛾的致病性差異

由表1可看出,不同濃度的4株蟬擬青霉菌絲懸液對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR 4611的致病性最強,致死率可達到65%。

2.34株蟬擬青霉孢子懸液對小菜蛾的致病性差異

由表2可看出,不同濃度的4株蟬擬青霉孢子懸液對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR 4611的致病性最強,致死率可達到70%。

3結論與討論

(1)對小菜蛾的致病性測定結果顯示,4株蟬擬青霉菌株對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。通過對蟬擬青霉孢子懸液、菌絲懸液致病性測定表明,孢子懸液的致病能力略高于菌絲懸液,其中GZDXIFR4611孢子懸液對小菜蛾的最高致死率可達到70%,菌絲懸液的最高致死率可達到65%。由此說明,孢子懸液的致病能力高于菌絲懸液,4株蟬擬中GZDXIFR4611致病性最強。

(2)昆蟲病原真菌通過體表接觸即能使寄主感染、發病并引起寄主昆蟲死亡,可以發揮獨到的作用[5]。對感染的小菜蛾進行粘片顯微觀察,結果顯示芽孢結構是蟬擬青霉;孢子懸液致病的原因可能在于孢子萌發時芽管侵入蟲的體表使蟲致死。

(3)昆蟲病原真菌在昆蟲病原微生物中種類最多,約占昆蟲病原微生物種類的60%以上。在溫室栽培業蓬勃發展的今天,研究利用昆蟲病原真菌已成為害蟲微生物防治研究領域的熱點。有關小菜蛾的致病性研究方面,目前僅有少量關于白僵菌、綠僵菌和擬青霉等的研究報道[9,10];對蟬擬青霉的研究主要集中在藥用方面,在生物防治方面的研究不多,研究表明,蟬擬青霉作為生防試劑有良好的開發應用前景,有待進一步深入研究。

4參考文獻

[1] 陳祝安,劉廣玉,胡菽英.蟬花的人工培養及其藥理作用研究[J].真菌學報,1993,12(2):138-144.

[2] 陳祝安.蟲生真菌蟬擬青霉的研究[J].真菌學報,1991,10(4):280-287.

[3] 鄒曉,劉愛英,梁宗琦.紫外線誘變蟬擬青霉對白粉虱治病性的影響[J].菌物研究,2004,2(4):35-39.

[4] 黃劍,吳文君.小菜蛾抗藥性研究進展[J].貴州大學學報(自然科學版),2003,20(1):97-104.

[5] 韓燕峰,張延威,梁建東,等.一些擬青霉菌株對小菜蛾致病性的初步研究[J].植物保護,2008,34(2):46-49.

[6] TAN AIJUAN,LIANG ZONGQI,LIU AIYING.Orthogonal Experi-ment on the Optimum cluture conditions of paecilomyces cicadae[J].Jou-rnal of Huazhong Agricultural University,2004,23(1):33-35.

[7] 安建梅.蟲生真菌粉質擬青霉對黃刺蛾幼蟲的致病性研究[J].山西農業大學學報,2000(2):105-107.

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