天麻小菇屬萌發菌生產技術

陳順方　祁　岑　黃先敏

摘要簡要介紹了萌發菌的生活特性,并從菌種分離、鑒定、培養等方面介紹了萌發菌的生產技術,以指導實際生產。

關鍵詞天麻;萌發菌;生產技術

中圖分類號Q949.32文獻標識碼B文章編號 1007-5739(2009)15-0110-01

天麻又名神草、仙仙根、定風草、離合草、仙人腳、鬼督郵、還筒子、赤箭、離母、四龍子、鬼箭桿、盜人腳、山蘿卜、水洋芋,其地下球莖是我國名貴的傳統中藥。蘭科天麻屬,多年生草本植物,無根、無綠色葉片,在其生活史中大部分時間在地下度過,既不能從土壤中吸收無機礦物元素,也不能進行光合作用自養生活,其生長發育所需營養主要依靠同化侵入其體內的一些真菌而獲得。種子需要同化小菇屬等真菌才能獲得營養而發芽,發芽后形成的球莖又必須同化蜜環菌才能正常生長發育形成成體球莖(箭麻)[1]。從目前已用于生產的萌發菌看,萌發菌為弱腐生菌,培養條件苛刻、技術要求較高,一般由專業生產廠提供。現將萌發菌生產技術介紹如下。

1生活特性

到目前為止,文獻報道的可促使天麻種子發芽的真菌有12種,用于生產的萌發菌均屬于小菇屬真菌,其生活特性如下。

1.1腐生為主,兼性寄生

萌發菌對樹葉中的纖維素有強烈的分解和消化能力,多腐生于高山林間落葉上。當天麻種子落入感染了萌發菌的樹葉上時,萌發菌又可侵入具有生命力的天麻種子。因此,萌發菌主要營腐生生活,但也有兼性寄生的特性。

1.2萌發菌生長對空氣的要求

在自然條件下,主要分布在枯枝落葉層及疏松的表層土壤中。在培養過程中如果培養料裝得太多或瓶蓋太緊,菌絲生活力減弱甚至死亡。說明萌發菌是一類好氣性真菌,需要有足夠的氧氣才能正常的生長發育。

1.3萌發菌生長對溫度的要求

在自然條件下,萌發菌子實體一般在夏季出現,說明其菌絲生長需要有較高的溫度。試驗表明,萌發菌在15～30℃溫度范圍內均能生長,以25℃時菌絲生長為最快,低于20℃或高于28℃菌絲生長速度明顯減漫,高于30℃以上24h,菌絲將失去生活力,甚至死亡。

1.4萌發菌生長對基質含水量的要求

在自然條件下,萌發菌多生長在濕度較高的環境中。試驗結果表明,不同的萌發菌對水分的要求不同,但都喜歡生長在基質含水量在100%～200%的高濕環境中,基質含水量過高和過低都會導致菌絲生長速度減緩,甚至停止生長。

1.5萌發菌生長對基質酸度的要求

在自然條件下,萌發菌常生長在中性及偏酸性環境。試驗結果表明,萌發菌菌絲在pH值4.5～7.0均能生長,以pH值5.0～5.5最適宜,堿性條件不利于菌絲生長。

2萌發菌的分離與鑒定

2.1菌種的分離

萌發菌通常分布在山區較為潮濕的枯枝落葉上,不像蜜環菌那樣有獨特的菌索,一般不能直接用肉眼識別。因此,用于分離萌發菌的材料十分有限。如果在沒有人為使用萌發菌的情況下,天麻種子能在樹葉上萌發形成原球莖,說明這樹葉上肯定有萌發菌,選取這些樹葉或原球莖作為分離材料(最好選原球莖),從中分離出萌發菌。具體方法是:在天麻種子成熟季節,從山區林下收集潮濕的樹葉,洗去泥土后,放入木箱、花盆等容器中,撒上天麻種子,蓋上塑料窗紗,再撒1層樹葉后蓋上沙土。2個月后觀察是否有天麻種子萌發。若有,則可取出原球莖并作為萌發菌的分離材料。取出的原球莖先用清水洗凈,于無菌室中用0.1%升汞水中浸泡1min,再用無菌水沖洗3～4次,最后用滅過菌的濾紙吸去表面的水后切成小塊,分開放入事先準備好的PDA平面培養基中培養,待原球莖小塊處長出白色菌落后,進行菌種的純化。經純化獲得單一菌株后進行鑒定。

2.2菌種鑒定

在生產上,萌發菌鑒定最簡便和實用的辦法是進行天麻種子發芽試驗,即將經分離所得菌種拌播天麻種子,試驗其發芽情況。萌發菌大多分布在山區較為潮濕的枯枝落葉上,說明枯枝落葉是萌發菌良好的培養基質,但從現有萌發菌的試驗結果看,樹葉、玉米芯、棉子殼、麩皮等都可作為培養基。為方便后續發芽試驗,最好選用樹葉作為培養基。具體方法如下:

用250mL的錐形瓶裝上用水浸泡并洗凈的樹葉,稍加壓緊,葉形較大的落葉可適當剪小。然后進行高壓滅菌,在無菌室將斜面培養基的菌連同培養基挑取一塊,轉接在樹葉培養基中,在25℃下培養,菌絲長滿后即可進行發芽試驗。做種子發芽試驗時,先在直徑約10cm的培養皿底部墊1層薄的海綿,加入適量的水以保持潮濕,然后將已長滿菌的樹葉放在海綿上,再將天麻種子播撒在菌葉上。在25℃下培養,3周以后用放大鏡觀察。也可以用50mL的扁平克氏瓶,底部放海綿,加入適量水,上層放用水浸泡并洗凈的樹葉,高度達到瓶高的2/3,經高壓滅菌后,接菌,待菌絲基本長滿樹葉后,在樹葉和瓶壁上撒一些種子,通過瓶壁可觀察到樹葉上種子萌發的動態。

天麻種子只有1層薄薄的種皮,播種時消毒容易傷胚。

主要采取以下2種方法避免雜菌污染。一是當天麻果實即將開裂而未開裂時,將果實剪下。在無菌室中,先切去頂端殘存的花冠,用25%酒精擦洗表面消毒,再挑取其中的種子播在有菌樹葉之上。二是將未作任何消毒的種子,直接播在菌葉之上。但是葉面必須長滿菌,使其占生長優勢,這樣種子帶上的一些雜菌也不能生長,也能達到較好的效果。如果在所分離的菌種中有可使天麻種子發芽且情況滿意的菌種,生產上就可以對其進行擴繁,以準備天麻種植時用。同時,有必要對其進行進一步鑒定,以確定該菌種是否為一種新的菌種。

3萌發菌的培養

3.1一級菌種的培養

在天麻種子萌發試驗中得到肯定結果并準備用于天麻生產的菌種,可在無菌條件下將其轉接于PDA培養基上進行擴繁,在22～25℃溫度下避光培養,當菌絲在培養基上生長至2/3或基本長滿培養基表面時,即可用于生產二級菌種。

3.2二級菌種的培養

在無菌條件下,將培養好的一級菌種轉接于已滅菌的二級固體、半固體或液體菌種培養基上,在25℃恒溫避光條件下培養,菌絲長滿整個培養基后,所得菌種即為二級菌種。

3.3三級菌種(生產種)的培養

將培養好的二級菌種轉接于三級菌種培養基上,菌絲長滿后即得三級菌種。三級菌種可用于伴播天麻種子,進行天麻有性繁殖播種。

4參考文獻

[1] 楊嘉華,屈中權.昭通天麻的研究與開發[M].昆明:云南科技出版社,2007.