歐洲花楸的組織培養和快速繁殖試驗研究

黃立華　王占龍　于　欣

摘要：春季采取歐洲花楸品種1（Sorbus aucuparia European Mounain） 和品種2“太陽神”（Sorbus aucuparia Titan）的尚未萌動的1年生帶側芽莖段為試材，用0.1％Hgcl2分別用不同的時間進行處植體表面消毒。結果表明這兩個品種的1年生帶側芽莖段滅菌時間為15min效果較好；而在分化增殖階段，培養基MS+6-BA0.8mgL-1(以下單位同)+NAA0.4+肌醇15的分化苗較為粗壯，增殖系數大于9。而在同一個生根培養基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中培養生根苗時，光照時間為14 小時，發根情況好，苗健壯，移栽易成活。

關鍵詞：歐洲花楸；組織培養；繁殖試驗

歐洲花楸（Sorbus aucuparia ），屬薔薇科、花楸屬。原產歐洲和亞洲西部。歐洲花楸為喜光和半耐蔭先鋒樹種，耐旱性強，耐寒力強，栽培性狀優良，既可耐冷濕環境，也能耐干燥瘠薄土壤，可用于荒山綠化。歐洲花楸屬落葉小喬木，春天花朵為白色，復傘房花序，花朵密集，繁花似錦，葉片春夏季為深綠色，秋季為鮮艷的紫紅色，有光澤，整個冬季至翌年2月橘紅色的果實宿存于枝頭，與瑞雪互映，這在東北一般園林花木中是不可多得的。歐洲花楸在歐洲已被廣泛應用于園林綠化中。果實可用于加工天然實用色素、食品、功能性飲料、藥品。可以說歐洲花楸是集食用、園林和生態價值于一身的珍貴樹種。

為了加快推廣速度，滿足市場的苗木需求，我們自2004年開始通過組培快繁大量獲得歐洲花楸組培苗，快繁組培苗已達到每年約50000株已形成規模化生產。期望本文能對歐洲花楸規模化栽培提供一條可能有效的途徑。

1試驗材料

1.1植物名稱a.歐洲花楸（Sorbus aucuparia European Mounain）

b.歐洲花楸“太陽神”（Sorbus aucuparia Titan）。

1.2 材料類別1年生帶側芽莖段

1.3 取材時間4月份芽尚未萌動前。

1.4 取材地點遼寧省干旱地區造林研究所的歐洲花楸試驗園。

2 試驗材料的處理與消毒

將品種a.（Sorbus aucuparia European Mounain）和品種b.太陽神（Sorbus aucuparia Titan）的外植體材料流水沖洗30min。放入肥皂液中用毛刷輕輕刷去植物表面的泥土，清水沖洗干凈。將外植體剪成15cm左右的莖段，用自來水沖洗2～3h后將材料置于超凈工作臺上，先用75％酒精消毒1min，再用無菌水沖洗3次，繼而以0.1％的Hgcl2分別對兩個品種的外植體表面消毒10 min、15min、20min（滅菌效果見表1），無菌水沖洗5次，取出一根莖段將其放在已經過高溫滅菌的吸水紙上，吸干表面水分后，在無菌紙上將外植體切成1～2cm左右帶腋芽的莖段，接種在芽誘導培養基中培養，每瓶為一個帶芽莖段。啟動培養成功后，再將啟動培養萌動的嫩梢轉入增殖培養基中繼續進行增殖培養。

3 培養條件

3.1培養基

芽誘導培養基：MS＋6－BA1.0mgL-1(單位下同)＋NAA0.2。

分化增殖培養基：

MS＋6-BA0.8+NAA0.4（1）

MS+6-BA0.8+NAA0.4+肌醇15（2）

MS+6-BA0.8+NAA0.1（3）

MS+6-BA0.4+NAA0.4（4）

MS+6-BA1.5+NAA0.4（5）

生根培養基：1/2MS+IBA0+NAA0.05

本試驗以MS為基本培養基。培養基中均附加3%蔗糖和0.6%瓊脂，PH5.8，培養室溫為23～28℃，光照度為1500～2000Lx，啟動培養和分化增殖培養的光照時間為12hd-1，生根培養的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。

4 無菌培養

4.1 芽的誘導與叢生芽培養

芽在誘導培養基MS＋6－BA1.0mgL-1＋NAA0.2中培養20d后開始萌動，伸長成無菌苗。培養超過30d后，長成3～6cm高的大量叢生芽。將無菌綠苗剪切成2cm左右的莖段，轉接到激素含量不同的增殖培養基中培養，生長增殖結果見表2。

4.2 根的誘導

繼代增殖培養的2～5cm高的無根幼苗切成單株后轉入生根培養基+6-BA0.2+NAA0，生根培養的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。培養7d后在不定芽的基部開始有不定根突起，15d后大部分不定芽均有根長出，生根率達90%～100%，30d左右每個小芽可發根4～8條形成幼苗，生根情況見表3

5 煉苗與移栽

生根苗培養30d后，苗長到5cm高時，把瓶蓋揭開一半，往瓶里倒少許自來水，以防培養基抽干，馴化3d后，再把瓶蓋全部揭開，再馴化一周之后，取出生根苗，用水洗去全部培養基，移栽到營養杯中，營養杯中的營養基質為肥沃熟表土＋草炭土＋鐵礦尾砂，比例為：4：3：3。將營養基質用高錳酸鉀消毒。培養苗移栽至培養杯后澆透定根水，上搭遮陰網，栽培環境溫度控制在17℃～27℃，相對濕度為90％，1周噴1/2MS大量元素營養液1次。30d后，苗的成活率可達97％。

6 結果與分析

6.1 不同滅菌時間對滅菌效果的影響

用0.1Hgcl2對兩個試驗品種的外植體進行10min、15min、20min的滅菌，結果見表1。

從表1 可以看出，這兩個品種的1年生莖段的滅菌時間15min效果較好，滅菌率在80％以上。試驗中發現，滅菌時間短，雜菌不能全部殺死就會造成污染，而滅菌時間超過15min，兩個品種的莖段及腋芽除污染外，大部分褐化，雖培養了較長時間也未見萌動。

6.2不同培養基對芽的分化增殖的影響

將誘導成功的無菌綠苗剪切成2cm左右的莖段轉接到激素含量、營養物質不同不同的培養基中進行增殖培養，生長、增殖情況見表2。

由表2可以看出，1號培養基MS＋6-BA0.8+NAA0.4和2號培養基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15中培養的無菌苗增殖系數高，并且無菌苗長得較為粗壯。尤其是2號培養基，自2005年10月對無菌苗進行大量增殖培養后，用2號培養基重復繼代培養2005年春季的誘導分化成功的無菌苗，苗的增殖系數始終保持在9.0 以上，生長狀況穩定，未見發生變異，生根狀況良好。與每年新誘導分化成功的新的無菌苗的增殖生長情況無差異。而未加肌醇的培養基中的無菌苗，隨著繼代次數的增加，組培苗的分化系數呈下降趨勢，長勢弱于2號培養基中的組培苗。這說明肌醇有利于歐洲花楸的組培苗增殖。5號培養基MS+6-BA1.5+NAA0.04雖然分化系數最高，但叢生苗過于細弱，幼苗生長無力，試管苗有玻璃化現象。3號培養基MS+6-BA0.8+NAA0.1中苗生長無力，葉色發黃、落葉。4號培養基MS+6-BA0.4+NAA0.4中無菌苗的增殖系數低，不利于增殖分化。可見，6-BA濃度低時，增殖系數低，而6-BA濃度高時，增殖系數高，但容易形成大量弱叢生苗，不能用于下一步的分化、生根培養；6-BA濃度過高時，莖基部會產生大量愈傷組織，試管苗發生玻璃化現象，影響分化。所以說，2號培養基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15是歐洲花楸增殖分化的最適培養基。

6.3不同光照時間對歐洲花楸無菌苗生根的影響

2～5cm高的叢芽切成單株后轉入生根培養基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中，生根培養的光照時間為12hd-1、14hd-1、16hd-1培養，無菌苗的生根情況見表3。

由表3可以看出，在相同的生根培養基中，光照時間在14小時以上，生根苗的根系生長好，植株長高，健壯、葉色鮮綠（見圖片二），移栽成活率超過90％。光照14hd-1與光照16hd－1的生長情況無差異，從節約能源角度出發，生根時的光照時間為14hd-1即可。

7 結論

7.1 對1年生、尚未萌動的帶側芽莖段消毒的時間以15min較好，滅菌率在80％以上。

7.2 激素濃度與營養物質影響芽的分化率與增殖系數，每千克激素濃度相同的培養基中加入15g肌醇可使經過多次繼代培養的無菌苗的增殖系數仍保持在9以上。初步篩選出芽分化增殖階段的最適培養基為MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15；

7.3 在生根培養基誘導生根培養階段光照時間在14小時以上，有利于根系的生長。苗壯，苗移栽成活率高。

通過四年的歐洲花楸組培擴繁試驗，雖然獲得了一些有成效的經驗，為加快歐洲花楸組培擴繁和推廣速度具有一定的參考意義。但仍有需要完善和進一步探索的地方，如：在增殖分化培養基中加入肌醇對增加增殖系數的最佳量及作用機理還需做深入的探索、研究。

參考文獻

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