黃精多糖口服液制備工藝研究

孔 瑕，黃 晴，李 慧，陳章寶

（西南大學藥學院中醫藥學院，重慶 400715）

黃精，是百合科植物滇黃精Polygonatumkingianum Coll.et Hemsl.、黃精 Polygonatumsibiricum Red.或多花黃精Polygonatumcyrtonema Hua的干燥根莖。依外形上的差別，習稱“大黃精”、“雞頭黃精”、“姜形黃精”。黃精具有悠久的臨床藥用歷史，現代藥理試驗證明其具備提高免疫力、降低血糖、降低血脂、抗腫瘤、抗菌抗病毒等作用。

選用重慶產黃精為原料，以提取液中多糖的含量為指標，考查黃精多糖提取方法、提取液澄清劑和口服液處方組成等因素，篩選得到黃精多糖口服液最佳制備工藝，為黃精的進一步開發和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

黃精藥材，采自重慶酉陽黃精種植基地。

無水葡萄糖對照品，上海源葉生物科技有限公司提供；無水乙醇、濃硫酸、苯酚、碳酸氫鈉、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP-K30），成都市科龍化工試劑廠提供；Ⅲ型ZTC1+1天然澄清劑，天津振天成科技有限公司提供。

1.2 儀器與設備

SHZ-D（III） 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌機、DF-101S型循環水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責任公司產品；RE-2000A型旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠產品；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海齊欣科學儀器有限公司產品；精密天平，北京賽多利斯儀器系統有限公司產品；GI系列滅菌鍋，廈門致微儀器有限公司產品；超聲波細胞儀，寧波新芝生物科技股份有限公司產品；TG16-WS型臺式高速離心機，湘儀離心機儀器有限公司產品；冷凍干燥機，北京博醫康實驗儀器有限公司產品。

1.3 黃精多糖的含量測定[1]

1.3.1 對照品溶液的制備

1.3.2 標準曲線的制備

精密量取對照品溶液0.1，0.3，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，加水至2.0 mL，搖勻后精密加入6%苯酚1.0 mL，搖勻后精密加入濃硫酸5.0 mL（總體積8mL），冷卻至室溫后，沸水浴顯色15 min，以2.0 mL水按同樣顯色操作為空白。紫外-可見分光光度法，于波長490 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、多糖質量濃度（μg/mL） 為橫坐標，標準曲線方程為Y=0.045 1X+0.032 6，R2=0.999 9。

苯酚-硫酸法標準曲線見圖1。

圖1 苯酚-硫酸法標準曲線

1.3.3 精密度試驗

取同一標準品溶液按“1.3.2”項下方法顯色，測吸光度，連續測定6次，RSD=0.274%（n=6），表明儀器精密度良好。

1.3.4 加樣回收率試驗

精密量取質量濃度為1.0 mg/mL的黃精多糖供試品溶液10 mL，加入100 mL容量瓶中定容，得質量濃度為0.1 mg/mL的黃精多糖溶液。精密量取上述溶液1 mL，平行5份，分別加入0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mg/mL的葡萄糖標準品溶液1 mL，苯酚-硫酸法顯色，測定回收率。加樣回收率平均值為98.6%，RSD=1.15%（n=5），說明該試驗方法可行。

1.3.5 穩定性試驗

蟋蟀在堂，歲聿其莫。 今我不樂，日月其除。 無已太康，職思其居。 好樂無荒，良士瞿瞿。 (莫，暮。 職，應該。)

精密量取同一黃精多糖供試品溶液2 mL，苯酚-硫酸法顯色后分別在0，10，20，30，40，50，60 min測定吸光度，結果測得RSD=1.36%（n=7），表明供試品溶液顯色后在60 min穩定（測定過程需在60 min內完成）。

1.4 黃精多糖提取工藝的研究

1.4.1 黃精多糖回流提取方法

取黃精粉末100 g，加水（料液比1∶10），水浴80℃，回流提取1 h，取出濾液，濾渣加水，繼續提取1 h。合并濾液，濃縮至一定濃度。

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，水浴80℃，回流提取1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，煮沸1 h，將兩部分濾液合并，濃縮體積至1 000 mL。

1.4.2 黃精多糖超聲提取方法

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，60℃超聲提取1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，繼續提取1 h。合并濾液，濃縮體積至1 000 mL。

1.4.3 黃精多糖煎煮提取方法

取200 g黃精，洗凈后加入2 000 mL水，煎煮1 h，取出濾液，濾渣加入2 000 mL水，繼續煎煮1 h。合并濾液，濃縮體積至1 000 mL[2-3]。

1.5 ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑最佳工藝的研究

ZTC1+1天然澄清劑主要去除鞣質、蛋白質、樹脂等膠體不穩定成分，對中藥有效成分如多糖、黃酮、生物堿、皂苷類礦物質等不影響[4]。

1.6 黃精多糖口服液的處方篩選

正交試驗在處方預試驗選擇的基礎上，以防腐劑（A）、穩定劑（B）、pH值（C） 為因素，以多糖含量和澄明度為指標，用正交試驗優化口服液輔料。每個因素設立3個水平。

正交因素與水平設計見表1[5-6]。

表1 正交因素與水平設計

1.7 工藝驗證

按照以上篩選得到的口服液制備工藝制備多糖口服液，檢測口服液多糖含量、澄明度等指標。

2 結果與分析

2.1 黃精多糖提取工藝的研究

黃精多糖分別用回流提取、超聲提取和煎煮法提取的黃精多糖含量分別為58.4%，57.9%，59.6%，3種提取方法提取的糖含量相差不大，黃精用直接煎煮法提取的黃精多糖含量最高，且操作最簡便，因此選擇煎煮法提取黃精多糖。

2.2 ZTC 1+1和殼聚糖2種澄清劑的比較試驗結果

2種澄清劑對黃精提取液進行澄清的試驗結果見表2。

表2 2種澄清劑對黃精提取液進行澄清的試驗結果

相比殼聚糖澄清劑，使用Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清劑后黃精多糖保留率更高，而且能夠更好地除去黃精水提物中的雜質。故以Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清劑作為澄清劑澄清黃精多糖水提取液。

2.3 黃精多糖口服液的輔料篩選

以澄明度、總多糖含量為指標，根據上表進行試驗。

試驗結果見表3，方差分析見表4。

表3 試驗結果

表4 方差分析

比較3個因素的極差可得，各因素口服液澄明度影響程度依次為穩定劑＞防腐劑＞pH值，穩定劑對口服液澄明度及多糖含量的影響較大，為了提高口服液澄明度，由表3得最佳工藝為A2B3C1，綜合單因素考查結果確定最佳輔料組合為防腐劑羥苯乙酯0.04%，穩定劑PVP-K30 0.2%，pH值5.0。

2.4 工藝驗證

按照以上篩選得到的黃精多糖口服液制備工藝重復制備3批產品，直觀觀察產品為棕紅色液體且無沉淀生成，按黃精多糖含量測定方法測定功效成分多糖質量濃度為1.28±0.05 g/10 mL，均符合產品質量標準，且重現性良好。

3 結論

黃精主要成分是多糖，多糖耐熱且水溶性好，因此用直接煎煮法可以將黃精中多糖提取出來,能滿足口服液制備要求，同時用水提取黃精中多糖，黃精中的其他水溶性成分（如生物堿、甙、鞣質、水溶性有機酸）也會被提取出來，這些成分容易形成沉淀，影響口服液的穩定性，因此黃精多糖提取液采用ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑進行絮凝沉淀，提高口服液的穩定性，ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清劑的最佳工藝為B/A組分濃度1%/1%，藥液濃度1∶5，溫度70℃，B/A組分用量體積比5。為提高口服液的穩定性，對口服液的處方進行篩選，得到黃精多糖口服液的最佳處方為黃精多糖提取濃縮液約350 mL，穩定劑0.2%，pH值5.0，羥苯乙酯0.04%，純化水定容至400 mL，制備的多糖口服液澄清、多糖含量符合口服液質量標準。