紫葉酢漿草快繁技術(shù)的研究

肖文艷　曹　智

【摘要】 研究了不同消毒時間和激素水平對于紫葉酢漿草莖段組織快繁的影響，采用組培方法建立起了紫葉酢漿草離體培養(yǎng)體系。結(jié)果表明：消毒時間以4分鐘為宜；最佳誘導培養(yǎng)基配方為：MS+NAA0.5 mg/L+6-BA1.0 mg/L；最佳增殖培養(yǎng)基為：MS+NAA0.2 mg/L+6-BA0.5 mg/L。

【關(guān)鍵字】 紫葉酢漿草；組織培養(yǎng)；激素水平；

紫葉酢漿草（O xalis triangularis）又名紫蝴蝶，原產(chǎn)熱帶美洲。為酢漿草科酢漿草屬多年生宿根草本植物，株高15～30cm，地下部分長有小鱗莖。葉基生，掌狀復葉，每個復葉由3片小葉組成，小葉倒三角形或倒箭形，葉色常年為艷麗的紫紅色，猶如無數(shù)飄舞的“紫色蝴蝶”[1]，極具觀賞價值。紫葉酢漿草適應性廣，抗性強，生長迅速[2]。是優(yōu)良的地被植物，同時也是布置花壇、花鏡或點綴草坪、道路的良好材料。 具有很高的開發(fā)利用和推廣價值[3]。

紫葉酢漿草的繁殖以分株繁育為主，多在生長季節(jié)進行，也可在春季播種繁殖，但觀賞栽培種結(jié)籽率較低。上述繁殖方法繁殖速度慢，遠不能滿足市場的需求。目前較為理想的是組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，具有速度快，變異率低等優(yōu)點，能滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需求[4]。

紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)李霖等[5]已有作初步報道，但試驗結(jié)果中培養(yǎng)基中激素種類及激素濃度有不同的見解。本實驗通過建立紫葉酢漿草快繁體系，研究激素水平對三角紫葉酢漿草組培快繁的影響。旨在為三角紫葉酢漿草工廠化育苗提供技術(shù)參數(shù)。

1實驗材料和方法

1.1實驗材料

從大棚移入實驗室1個月左右的盆栽三角紫葉酢漿草，以葉柄作為外植體。

1.2外植體消毒

挑選健壯無蟲害的葉柄，用消毒后的剪刀將其剪成約4cm的小段，放于燒杯中，用自來水沖洗外植體10 分鐘，加少量中性洗潔精浸泡0.5 小時，流水沖洗干凈，移入無菌接種室，浸入0.1％HgCl2溶液中振蕩消毒4分鐘，用蒸餾水沖洗5~8次，即可用于接種。

1.3不同的消毒時間

處理時間分別為2分鐘、4分鐘、8分鐘、12分鐘，用無菌水沖洗5次后接種。接種時先用濾紙吸干葉柄表面的水分，把葉柄和葉片切成1cm分別接種于培養(yǎng)基上。觀察不同時間處理對葉柄的愈傷組織誘導率的影響，最終采用最佳消毒時間。

1.4培養(yǎng)基配方

采用MS基本培養(yǎng)基，其中3%蔗糖，0.7%瓊脂，pH值5.8。培養(yǎng)溫度25±2℃，光照3000Lux，12小時/天。培養(yǎng)基見表1、表2。

2結(jié)果與分析

2.1不同消毒時間對三角紫葉酢漿草芽誘導的影響

在8、12分鐘消毒的外植體多出現(xiàn)白化現(xiàn)象，結(jié)果如表3所示：2分鐘消毒的外植體污染率較高，而8分鐘、12分鐘的出芽率較低，4分鐘消毒的出芽率較高為60%，污染率也較低，故最佳消毒時間為4分鐘。

2.2不同激素水平對三角紫葉酢漿草芽誘導的結(jié)果及分析

在超凈工作臺上，切去兩端受損部分留下約1.5~2.0cm的小段，分別接種于不同的誘導培養(yǎng)基(包括不同種類激素的誘導培養(yǎng)基)上培養(yǎng)，每瓶接種2個外植體，每種培養(yǎng)基接種數(shù)為12個。

葉柄接種后逐漸透明，至12天時較為明顯，且兩端切口處膨大并出現(xiàn)白色愈傷組織，培養(yǎng)至19天，愈傷組織開始分化，生出白色不定根，28天以后形成紫色小芽，并始終保持紫色。繼續(xù)培養(yǎng)生長發(fā)育出叢生芽。第40天結(jié)果如表4所示。

從表4可以看出：在9種不同培養(yǎng)基上葉柄均能誘導出愈傷組織和分化出根及芽，其中以處理A4的培養(yǎng)基出芽數(shù)最多，出芽率最高，培養(yǎng)基上生出較多的白色不定根。所以該處理MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.7％最適宜愈傷組織誘導分化和芽的形成。

2.3不同激素水平對三角紫葉酢漿草增殖的結(jié)果及分析

將誘導培養(yǎng)基中已分化的叢生芽移入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶移入?yún)采?~3個，共13瓶。15天后統(tǒng)計情況如表5所示。

表5可見，隨著NAA的濃度的提高，叢生芽增殖率逐漸上升，在NAA為0.2 mg/L時增殖率為229%，增殖效果較好。當NAA的濃度高于0.5 mg/L時增殖率開始下降，且葉片出現(xiàn)畸形。在6-BA單因素實驗中，植株均較弱，說明6-BA的濃度過高或過低對于增殖均不利。基于以上情況叢生芽生長的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.7％，在此培養(yǎng)基上成苗率高，芽苗粗壯，長勢好。

3討論

3.1外植體選取和消毒的關(guān)系

材料的初代培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)過程中較為重要的一個步驟，也是整個培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵步驟。相關(guān)報道認為紫葉酢漿草的誘導培養(yǎng)選擇葉片作為外植體更易形成愈傷組織或分化不定芽。但葉片組織細胞較嫩，在消毒處理時經(jīng)過自來水的沖洗，容易受到機械損傷，經(jīng)HgCl2消毒后，葉片變得軟而難以切割，材料的利用效率不高。以葉柄為外植體材料進行組織培養(yǎng)雖然效果不如葉片，但材料的利用率比較高。如果能從培養(yǎng)基的配方上作些改進，從而提高葉柄培養(yǎng)愈傷組織的誘導率，對生產(chǎn)具有一定的指導意義。

3.2白色不定根的作用

我們在對三角紫葉酢漿草外植體的誘導中發(fā)現(xiàn)，外植體先膨大分化出少量愈傷組織，然后分化形成大量不定根，其上有大量白色絨毛，最后愈傷組織才分化出芽(注:不定根和芽長于愈傷組織的不同部位)。該現(xiàn)象有人認為是植物體內(nèi)的IAA和外源的細胞分裂素誘導了不定根的分化[6]。李霖等[5]認為不定根上的白色絨毛為愈傷組織。王利等[4]認為觀察到分化不定芽早的或不定芽長勢好的外植體，不定根往往較多，這和我們觀察到的現(xiàn)象一致。不定根是否有利于外植體對營養(yǎng)成分的吸收有待于進一步研究。

（收稿：2008-12-10）

參考文獻

[1] 王 志，朱萬琴，李風忱.紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].農(nóng)業(yè)科技通訊，2007，(3):53-53.

[2] 李海燕.紫葉酢漿草的園林應用及培育技術(shù)[J].北方園藝，2007，(2):13.

[3] 王旭昭.紫葉酢漿草栽培技術(shù)與推廣應用[J]，安徽農(nóng)業(yè)科學．2007，35(36)：11905，11922．

[4] 王利，王永清，張帆．三角紫葉酢漿草離體培養(yǎng)植株的再生研究[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學，2005，(02)：238-239，315．

[5] 李霖，宋宜穎，魯潤龍，等．紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)[J]．植物生理學通訊， 2002，38(4):360-360．

[6] 胡國富，李鳳蘭，胡寶忠.三角紫葉酢漿草的組織培養(yǎng)[J]．北方園藝，2008，(6):176-178.