白帶中白色念珠菌蛋白酶的測定及藥敏結果分析

于洪波

【摘要】 目的 評價白帶中白色念珠菌的致病性和指導抗真菌藥物的合理使用。方法 對大慶市中醫醫院2003年1月至2004年12月白帶標本中分離的300株白色念珠菌進行蛋白酶測定，同時測定氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌濃度（MIC）。結果 300株白色念珠菌全部檢出蛋白酶，其中蛋白酶活力高、中、低檢出率分別為83．7%（251株）、12．7%（37株）、4．0%（12株）。4種抗真菌藥物的耐藥率分別是17．3%、11．3%、63．3%和44．6%。結論 白帶中白色念珠菌具有致病性，臨床應密切關注。

【關鍵詞】白色念珠菌；白帶；蛋白酶；耐藥性

白色念珠菌是人體正常菌群之一，主要寄生于人體的體表及口腔咽喉等部位，是引起女性生殖道感染的常見菌。筆者對我院2003年1月至2004年12月300株白帶標本分離的白色念珠菌酸性蛋白酶（acid proteinase，AP）以及白色念珠菌對氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥性進行檢測，以期闡明白帶中白色念珠菌的致病性和耐藥性，指導臨床合理治療。

1 資料與方法

1．1 材料

1．1．1 菌珠 我院檢驗科2003年1月至2004年12保存的白帶標本中分離的白色念珠菌300株。經形態學、芽管生成、假菌絲、厚膜孢子、糖同化等試驗系統鑒定，確定為白色念珠菌。

1．1．2 培養基 哥倫比亞血平板（重慶市龐通科貿有限公司）；產酶培養基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，蛋白胨20．0 g/L，pH4．5^[1]；YGM-牛奶培養基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，瓊脂10．0 g/L，pH4．5^[1]。滅菌后冷卻到50℃加脫脂牛奶（濃度為1．0%）。培養基厚度：9 cm直徑平板準確加入25 ml培養基，約4．0 mm厚。

1．1．3 藥敏測定板 法國生物梅里埃公司生產的酵母真菌藥敏測定板ATB?FUNGUS2。

1．2 方法

1．2．1 AP活力的恢復 用產酶培養基37℃增菌24 h，轉種于哥倫比亞血平板37℃培養24 h，用來恢復白色念珠菌的產酶等生物學活性，保存于4℃備用。

1．2．2 白色念珠菌AP活力測定^[1]試驗菌株點種于YGM-牛奶平板上，37℃培養72 h后，用游標卡尺測量菌落及其周圍透明環的直徑，以透明環直徑/菌落直徑（R）來判斷酶活力的大小。

1．2．3 抗真菌藥物耐藥性測定 嚴格按照說明書進行操作，結果按照美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）標準進行敏感、中介和耐藥的判定，兩性酶素B最低抑菌濃度（MIC）≥2 mg/L為耐藥。

1．3 統計學方法 采用WHONET5．2統計學軟件進行統計分析。

2 結果

2．1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周圍均出現透明環，R的范圍是1．61～6．29，按R大小將試驗菌株分為高活力（R≥3．0）251株，占83．7%；中等活力（2．0≤R＜3．0）37株，占12．7%；低等活力（R＜2．0）12株，占4．0%。

2．2 300株白色念珠菌對常用抗真菌藥物的耐藥性 300株白色念珠菌對氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率為17．3%（52/300）、11．3%（34/300）、63．3%（190/300）、44．6%（134/300）。

3 討論

AP的檢測方法有多種，其中牛奶平板檢測法具有簡單、靈敏、不需染色可直接觀察結果等優點。本實驗采用YGM-牛奶平板法，檢測了300株從白帶標本分離的白色念珠菌AP，結果其產酶率達到100%，且高活力達83．7%，而低活力僅為4．0%，中度活力占12．7%，與國內外相關報道一致。

白色念珠菌的致病性由AP、莢膜及黏附性、芽管生成和疏水性等構成。其中AP為主要的致病因子，有文獻報道白色念珠菌AP的活性與毒力（r=0．994 6）、黏附（r=0．994 4）密切相關^[1]。菌體表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子，疏水性白色念珠菌較親水性白色念珠菌產生芽管的速度快，其黏附組織、塑料、導管和人造瓣膜的能力強。

筆者測得白帶標本中白色念珠菌對氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率分別是17．3%、11．3%、63．3%、44．6%，明顯高于呼吸道中的白色念珠菌^[2-4]，說明白帶中白色念珠菌對氟康唑、伊曲康唑的耐藥性已相當嚴重，這可能與臨床局部使用過多唑類制劑，抗真菌藥物選擇壓力增大有關。因此，臨床對治療白色念珠菌陰道炎時應慎用抗真菌藥物，避免耐藥性的積累。真菌耐藥除與選擇壓力有關外，目前研究認為白色念珠菌耐藥性的產生原因為：①麥角甾醇生物合成通路中關鍵靶酶的變化；②真菌胞膜內藥物濃度的降低；③生物被膜的形成等。現已發現許多白色念珠菌感染的發生與生物被膜形成有關^[5]。

本研究通過對白帶標本中白色念珠菌AP的測定和對常用抗真菌藥物耐藥性分析，證明白色念珠菌具有相當的致病性，且對常用抗真菌藥物已產生不同程度的耐藥，說明在白帶標本中白色念珠菌分離培養和藥敏分析十分重要。

參考文獻

［1］ 黃長武，李興祿，邱君風，等．白色念珠菌在呼吸道中致病性的研究．中華醫院感染學雜志，2004，14（7）：721-723．

［2］ 劉曉敏，林婷．189株肺部酵母樣真菌的鑒定及E-test法藥敏分析．中國醫學檢驗雜志，2004，5（2）：108-109．

［3］ 沈翠芬，張曉祥．臨床標本的真菌培養和藥敏分析．中華醫院感染學雜志，2003，13（4）：382-383．

［4］江艷．93例呼吸道白色念珠菌感染的臨床調查與耐藥現狀分析．四川省衛生管理干部學院學報，2003，22（3）：196-197．

［5］ Douglas LJ．Candida biofilms and their role in infection．Trends Microbiol，2003，11（1）：30-36．