骨髓穿刺組織石蠟制片方法改進(jìn)的探討

董　愉　董　毓　梁英杰　石慧娟　吳惠群

【關(guān)鍵詞】骨髓組織；脫鈣液；改進(jìn)方法

由于骨髓組織含有大量的鈣鹽而非常堅(jiān)硬，不能直接進(jìn)行石蠟制片，而經(jīng)過脫鈣處理后，才能進(jìn)行切片、HE染色、特殊染色和免疫組化染色。脫鈣過度或不當(dāng)均可影響上述染色。因此，脫鈣時(shí)間和脫鈣液的選擇十分重要。傳統(tǒng)的方法用14%硝酸脫鈣液脫鈣常出現(xiàn)脫鈣過度或不足，難以掌握，常造成組織切片不完整、組織結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞模糊不清，以致醫(yī)生閱片時(shí)診斷困難甚至誤疹。為此，近一年來，筆者用4%鹽酸脫鈣液，代替原有14%硝酸脫鈣液，進(jìn)行骨髓組織脫鈣，取得到了比較好的效果，也避免了用塑料包埋切片后，不能進(jìn)行免疫組化染色的不足。現(xiàn)將方法介紹如下。

1 材料和方法

1．1 材料 中山一院2007年全年骨髓活檢標(biāo)本480例。

1．2 方法 第1天：新鮮的骨髓標(biāo)本立即置于10%甲醛液固定（過夜）。第2天：08：00上班，立即置于4%鹽酸脫鈣（3．5～4 h）：稍水洗。11：30置于70%乙醇30 min；12：00流水沖洗2．5 h，然后轉(zhuǎn)入10%甲醛液補(bǔ)充固定。17：30分將骨髓標(biāo)本與當(dāng)天標(biāo)本一起放入全封閉自動(dòng)脫水機(jī)中脫水。第3天：石蠟包埋、切片、染色、出片交醫(yī)生發(fā)報(bào)告。

2 結(jié)果

與以往用１４％硝酸脫鈣相比，骨髓切片完整，細(xì)胞形態(tài)保存良好，染色鮮艷，核質(zhì)對(duì)比清晰，并且免疫組化染色得到的效果較好。見圖1~4。將骨髓組織，在固定充分的情況下進(jìn)行14％硝酸與4％鹽酸脫鈣的比較，見表1。

3 討論

過去，骨髓組織制片多采用甲基丙烯酸乙基（ＨＥＭＡ）等特殊包埋劑包埋，不需經(jīng)脫鈣處理可進(jìn)行切片ＨＥ染色，但操作類煩瑣也不能作免疫組化染色，因此， 筆者這樣脫鈣處理進(jìn)行石蠟切片的技術(shù)方法，以滿足臨床病理診斷免疫組化輔助的需要。常規(guī)骨組織脫鈣主要采用14％硝酸脫鈣，但硝酸對(duì)骨髓組織破壞極大，免疫組化染色效果不佳。

實(shí)踐證明，過去用的14%硝酸對(duì)骨髓組織脫鈣，具有作用快，脫鈣能力強(qiáng)的特點(diǎn)，但由于硝酸是強(qiáng)酸，往往對(duì)骨髓組織脫時(shí)間不易控制（以大頭針能刺入骨髓組織無阻力感為標(biāo)準(zhǔn)來衡量脫鈣時(shí)間），常出現(xiàn)脫鈣不足或脫鈣過度等狀況。脫鈣時(shí)間過長(zhǎng)，骨髓組織破壞，結(jié)構(gòu)模糊不清或者無法制片；脫鈣時(shí)間過短，脫鈣不充分，骨髓組織較硬，以致無法制造出完整的切片。

醫(yī)院早上送來的骨髓組織，往往是剛剛穿刺的新鮮標(biāo)本，固定時(shí)間還不夠。需要進(jìn)上步固定過夜，這樣做與當(dāng)天穿刺當(dāng)天取材制片的比較，切片完整，厚薄均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存良好，免疫組化、特染染色效果較好。相反，固定時(shí)間不夠的骨髓組織，無論在切片、HE染色、特殊染色和免疫組化中，染色效果都不理想。以致病理醫(yī)生難以作出診斷，拖延了病理報(bào)告發(fā)出的時(shí)間，甚至造成誤診。

由于骨髓組織富含鈣鹽、纖維支架少，組織具有硬、脆、疏松的特點(diǎn)，4%鹽酸脫鈣液酸度比硝酸脫鈣液酸度比硝酸脫鈣液濃度較低，因此采取延長(zhǎng)脫鈣時(shí)間的做法，使脫鈣過程緩慢而較持久地進(jìn)行（脫鈣時(shí)間一定不能少于4 h，以大頭針能穿過無阻力為準(zhǔn)，骨髓組織脫鈣才算完成）。流水沖洗一定要充分，如果沖洗時(shí)間不夠，骨髓組織帶有酸性，HE染色時(shí)胞核著色偏淺，核質(zhì)對(duì)比不清晰，免疫組化假陽性率高。因此流水沖洗時(shí)間不能少于2．5 h。

鹽酸會(huì)使組織膨脹，而酒精對(duì)組織具有收縮作用。因此，脫鈣后將組織放入70％乙醇作用30 min，以減低鹽酸對(duì)組織影響。經(jīng)過一段時(shí)間的反復(fù)比較和實(shí)踐，用4％鹽酸脫鈣的方法能使骨組織切片、ＨＥ染色、特殊染色和免疫組化染色達(dá)到較穩(wěn)定的效果，達(dá)到優(yōu)質(zhì)骨髓切片標(biāo)準(zhǔn)有助于診斷，得到到廣大病理醫(yī)生的認(rèn)同。值得大力推廣。

參考文獻(xiàn)

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［2］ 蔡秀玲，駱新蘭，張威，等.骨髓穿刺活檢標(biāo)本石蠟切片的質(zhì)控.診斷病理學(xué)雜志，2005，12（5）：392．