實(shí)用飼料補(bǔ)充蛋氨酸、賴氨酸對異育銀鯽和草魚血漿中游離氨基酸含量的影響

摘要：本研究利用1個短期氨基酸吸收實(shí)驗(yàn)，通過對異育銀鯽幼魚和草魚幼魚投喂含晶體賴氨酸/蛋氨酸以及含微囊賴氨酸/蛋氨酸的飼料，在最后一次投喂后0.5h， 1h， 1.5h， 2.5h， 3h， 6h和9h分別取血樣，通過測其血漿中游離賴氨酸和蛋氨酸的含量，晶體氨基酸和微囊氨基酸均可提高試驗(yàn)鯽魚和草魚血漿中的游離氨基酸濃度；相對而言，添加微囊氨基酸的效果優(yōu)于添加晶體氨基酸。

關(guān)鍵詞：異育銀鯽；草魚；蛋氨酸；賴氨酸；血漿游離氨基酸

魚類對蛋白質(zhì)的需求量實(shí)際是對必需氨基酸和非必需氨基酸混合比例數(shù)量的需要。魚類攝取這樣的飼料，吸收到體內(nèi)的氨基酸才能有效地被合成新的蛋白質(zhì)。生產(chǎn)實(shí)踐證明，飼料中無論缺乏哪一種必需氨基酸，都會影響飼料的價值。在實(shí)際生產(chǎn)中，往往有大量的蛋白源其所含必需氨基酸比例與魚類的需求相差較大，因此，研究者們試圖通過添加外源單體氨基酸的方式來使飼料中氨基酸達(dá)到魚類的需求。但是，許多研究資料表明，不同的魚類對單體氨基酸的利用能力不同。虹鱒、銀大馬哈魚、鰻鱺和羅非魚等能很好地吸收利用晶體氨基酸（荻野珍吉，1980），而鯉（Aoe et al.，1970; Nose et al.， 1974）和溝鯰（Wilson et al.， 1977）對飼料中晶體氨基酸的利用能力較差，必須將飼料調(diào)至中性后才能吸收利用。

草魚和異育銀鯽（以下簡稱鯽魚）均為我國的主要養(yǎng)殖品種，因其具有生長快，抗病力強(qiáng)，肉質(zhì)鮮美、細(xì)嫩等特點(diǎn)，得到生產(chǎn)者和消費(fèi)者的普遍歡迎。本研究通過對草魚和異育銀鯽幼魚投喂添加不同劑型的單體賴氨酸和蛋氨酸飼料，檢測其攝食后血液中游離氨基酸的含量，旨在了解其對飼料中單體氨基酸的吸收利用情況。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)草魚為當(dāng)年培育，取自西南大學(xué)榮昌校區(qū)試驗(yàn)漁場，平均體重（20.3±0.5）g；試驗(yàn)鯽魚取自榮昌梅石壩漁場，平均體重（7.5±0.5）g。試驗(yàn)魚放養(yǎng)在室內(nèi)玻璃鋼水族箱（100cm× 60cm×50cm）中，草魚和鯽魚各設(shè)3個處理組；組1為普通日糧組，組2為晶體氨基酸添加組，組3為微囊氨基酸添加組，每組設(shè)3個重復(fù)，每缸放30尾魚；水源為曝氣自來水。試驗(yàn)魚適應(yīng)環(huán)境5d后，開始投喂試驗(yàn)飼料，日投飼率為體重的3%～5%，每天于9：00和17：00投喂兩次。每天早上清除箱內(nèi)糞便，并換水1/3，飼養(yǎng)時間為10d。試驗(yàn)期間水溫為25±1℃，pH為7.5±0.5，溶氧> 6mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L。

1.2試驗(yàn)飼料

鯽魚試驗(yàn)飼料中組2和組3的粗蛋白含量是一致的，組1略高，各組的蛋氨酸和賴氨酸含量均相等；草魚試驗(yàn)飼料的粗蛋白一致，但組2和組3的蛋氨酸和賴氨酸含量實(shí)測值高于組1。晶體蛋氨酸（標(biāo)識含量99%）和賴氨酸（標(biāo)識含量98.5%）為市售某公司產(chǎn)品；微囊蛋氨酸和微囊賴氨酸，含量均為40%左右，由佛山協(xié)力同創(chuàng)飼料有限公司提供。具體配方組成和營養(yǎng)成分分析見表1和表2。

鯽魚和草魚日糧配制時，均用6mol/L的NaOH溶液調(diào)至中性（Nose et al.，1974），制成粒徑為2.5～3mm的顆粒，60℃烘干后冰箱中-4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3試驗(yàn)取樣及分析處理

1.3.1血漿氨基酸濃度測定

連續(xù)對鯽魚、草魚投飼規(guī)定日糧7d后停止投喂，在其后的0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、6h、9h和12h取樣，尾靜脈取血，用1%的肝素鈉溶液作抗凝劑，每缸每次取3尾魚抗凝血。血樣置1.5mL離心管中3000 r/min離心15min后，取出上清液即獲得血漿。血漿用8%的磺基水楊酸去蛋白后，測定血漿中游離Lys和Met。

測定氨基酸含量采用柱前OPA衍生化RP-HPLC法測定，以4-氨基丁酸為內(nèi)標(biāo)，檢測限為0.5ppm。色譜條件：大連C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：A液：甲醇-0.05mol/L醋酸鈉緩沖液（pH = 9.5）（85：15）；梯度程序：0min，0% B；1min，30% B；12min，30% B；22min，40% B；23min，45% B；27min，45% B；35min，73% B；55min，100% B；流速: 1.2ml/min；柱溫: 25℃。在本色譜條件下，各氨基酸均得到了有效、滿意的分離。

1.3.2氨基酸劑型的溶失率測定

各組鯽魚和草魚試驗(yàn)飼料分別取10g，置于100mL水中10min，期間每隔2min攪動一次，取10mL水溶液測定賴氨酸等含量，每個樣重復(fù)測定3次。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1鯽魚血漿中游離蛋氨酸濃度變化趨勢

從圖1中可以看出，雖然各組日糧的蛋氨酸水平接近一致，但日糧中添加晶體蛋氨酸（組2）和微囊蛋氨酸（組3）后，其血漿峰濃度均高于未添加組（組1）。與此同時，組2在停飼后1h血漿中蛋氨酸即達(dá)峰濃度，而組3和組1則是在停飼后1.5h同時達(dá)到峰濃度。

2.2鯽魚血漿中游離賴氨酸濃度變化趨勢

圖2表明，雖然各組日糧賴氨酸水平接近一致，但鯽魚血漿中賴氨酸的峰濃度卻并不一致，而是從組1至組3逐漸增高。組1、組2和組3的達(dá)峰時間分別是2.5h，2h和3h。

2.3草魚血漿中游離蛋氨酸濃度變化趨勢

本試驗(yàn)各組日糧的蛋白含量基本設(shè)計為一致，但卻未能保證蛋氨酸含量一致，組1濃度最低，因此各組中組1的達(dá)峰濃度最低，但其達(dá)峰時間也最晚，為停飼后第2h，組3的達(dá)峰時間為停飼后第1.5h，組2的達(dá)峰時間為停飼后第1h，圖3。

2.4草魚血漿中游離賴氨酸濃度變化趨勢

本試驗(yàn)各組日糧間的粗蛋白含量及賴氨酸含量都基本一致，因此草魚各組試驗(yàn)停飼后其血漿中的峰濃度均接近一致，達(dá)峰時間是組3和組1一致（停飼后2h），組2達(dá)峰時間加快（停飼后1.5h）。

2.5溶出率測定結(jié)果

表3所列為在本試驗(yàn)條件下制作的飼料浸入水中不同時間測定其脫離出飼料進(jìn)入水體中的游離賴氨酸含量。結(jié)果表明：1）無論鯽魚日糧還是草魚日糧，以晶體賴氨酸形式添加的日糧均比以微囊賴氨酸形式添加的日糧在水中形成更多的溶失率；2）隨著浸入水中的時間延長，不同形式的賴氨酸在水中的溶失率均逐步增加；3）較高的pH值會導(dǎo)致飼料中的賴氨酸出現(xiàn)更高的溶失率。

3試驗(yàn)初步結(jié)論

1）無論補(bǔ)充晶體氨基酸還是微囊氨基酸，均能有效的提高試驗(yàn)鯽魚和草魚血漿中的游離氨基酸濃度；

2）微囊氨基酸的添加量為晶體氨基酸的50%，但血漿氨基酸濃度卻比較接近，表明在飼料制粒過程中微囊氨基酸的損失，以及在水體中的散失要小于晶體氨基酸；

3）晶體氨基酸在兩種魚的血漿中達(dá)峰時間均早于微囊氨基酸的達(dá)峰時間，但微囊氨基酸與飼料中的蛋白氨基酸達(dá)峰時間更接近一致；

4）飼料中晶體氨基酸的溶失率高于微囊氨基酸；在弱堿性水體中，兩種劑型的氨基酸的溶失率均有一定幅度增加。