ＨＰＬＣ法測(cè)定心可寧滴丸中丹酚酸Ｂ的含量

摘 要：目的：對(duì)中藥復(fù)方制劑心可寧滴丸中的丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定。方法：采用高效液相色譜法，以乙腈-0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。結(jié)果：丹酚酸B在0.196～1.960 μg范圍內(nèi)均與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，r為0.99996，平均加樣回收率為97.83%（N＝5），RSD=3.33%。 結(jié)論：本方法快速簡(jiǎn)便，靈敏度和穩(wěn)定性高，為心可寧滴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了良好的基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；心可寧滴丸；丹酚酸B

心可寧滴丸為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第九冊(cè)（WS3B171494）收載的中成藥經(jīng)過(guò)改劑而成，由丹參、三七、冰片、蟾酥等八味中藥組成，主要用于治療冠心病、心絞痛、胸悶、心悸、眩暈等癥^［1］。中國(guó)藥典2005年版一部中，丹參藥材增加了水溶性有效成分丹酚酸B的含量測(cè)定^［2］。由于心可寧滴丸制備工藝中丹參采用水提，故為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥安全、有效，采用了高效液相色譜法對(duì)丹酚酸B含量進(jìn)行測(cè)定，為心可寧滴丸的質(zhì)量提高奠定了良好的基礎(chǔ)，報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器：Agilent1100高壓液相色譜儀系列（美國(guó)），Sartorius BP211D電子分析天平（德國(guó)），電熱恒溫水浴鍋（北京市醫(yī)療設(shè)備廠），超聲清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備二廠），丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所111562200403），心可寧滴丸（自制，批號(hào)分別為20070401、20070301、20070312）；試劑：乙睛為色譜純，甲醇、磷酸等其它試劑均為分析純，水為三蒸水。

12 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件

Agilent Hypersil ODS（4.6mm*150mm，5μm）；乙腈－0.1％磷酸水液（21.5∶78.5）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。流速1.0ml/min，柱溫25℃。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)應(yīng)不低于5000。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備

稱(chēng)取丹酚酸B對(duì)照品，置量瓶中，加水溶解，制成0.098mg/mL的溶液，搖勻，即得。

1.2.3 供試品溶液的制備

取心可寧滴丸適量，碾碎，取約0.4g，精密稱(chēng)量，置于100ml具塞錐形瓶中，加入水50ml稱(chēng)重，超聲處理90min（250W，30kHz），取出，放冷，再稱(chēng)重，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液10ml，取續(xù)濾液過(guò)0.22um微孔濾膜，即得供試品溶液。

1.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

取缺丹參藥材的配方混合物，按照供試品溶液的制備方法同法制備成溶液，作為陰性對(duì)照品。

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別吸取對(duì)照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、15μl、20μl注入色譜儀，以峰面積積分值（mAU*s）對(duì)進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=496.321X-3.078，r=0.99996，結(jié)果表明，丹酚酸B在0.196～1.96 μg范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24h的不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，考察保留時(shí)間和峰面積的一致性，丹酚酸B的平均保留時(shí)間為11.69min，RSD為0.047%，平均峰面積為487.2 mAU*s，RSD為0.12%。

1.3.3 精密度試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，考察色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性。丹酚酸B的平均保留時(shí)間為11.64min，RSD為0.11%，平均峰面積為486.4mAU*s，RSD為0.25%。

1.3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品，稱(chēng)取5份，同法提取，檢測(cè)，考察色譜峰保留時(shí)間和峰面積的一致性。丹酚酸B的平均保留時(shí)間為11.62min，RSD為0.34%，平均峰面積為486.5 mAU*s，RSD為131%。

1.3.5 回收率試驗(yàn)

取同一批號(hào)已測(cè)知含量的樣品0.2g 5份，精密稱(chēng)定，分別準(zhǔn)確加入1.20mg/mL對(duì)照品溶液各1mL，按供試品溶液制備方法進(jìn)行提取，分別取10μL進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果得到丹酚酸B平均加樣回收率為97.83%，RSD=3.33%。見(jiàn)表1。

1.3.6 供試品的測(cè)定

分別取20070401、20070301、20070312批樣品0.4g，精密稱(chēng)定，按供試品制備方法制備成供試品溶液，精密吸取供試品溶液10L，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果得到丹酚酸B含量分別為6.27mg/g、6.26mg/g、6.24mg/g。

2 討論

在含有丹參的中藥制劑中，特別是水提取工藝中，對(duì)丹參中的丹酚酸B進(jìn)行含量測(cè)定對(duì)保證藥品的安全、有效是必要的。曾以中國(guó)藥典2005版一部丹參項(xiàng)下的流動(dòng)相進(jìn)行分析，結(jié)果分析時(shí)間較長(zhǎng)，峰塔板數(shù)相對(duì)較低一些，而采用本文所述條件得到很好的分析效果，分析速度快，陰性無(wú)干擾。

采用甲醇、乙醇回流提取、甲醇超聲和水超聲提取等方法，以水溶液進(jìn)行直接超聲提取，避免了脂溶性成分對(duì)分離的干擾，丹酚酸B峰分離度好，峰塔板數(shù)高，且回收率良好；甲醇提取后蒸干再用水溶解進(jìn)樣分離，效果和水液基本一致，但操作繁瑣一些，且回收率低于水提，故而確定丹酚酸B的含量測(cè)定采用水溶液直接超聲提取。提取時(shí)間的選擇采用水超聲30、60、90、120min后進(jìn)行考察測(cè)定，結(jié)果顯示，在90min后提取基本完全，回收率考察達(dá)到了97.83％。

本文方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，為心可寧滴丸的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)建立奠定了良好基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 劉東輝，李軍，黃意甜.高效液相色譜法測(cè)定心可寧膠囊中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量［J］中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2005，11（6）：26.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

（責(zé)任編輯：杜 靖）

Determination of Salvianolic Acid B in XinKening Drop Pills by HPLC

Abstract：Objective：To establish a method to determine salvianolic acid B in xinkening drop pills. Methods： The RpHPLC method was applied with Acetonitrile and 0.1％ H₃PO₄ water as mobile phase（21.5：78.5）， with detection wavelength at 286nm. Results： In the range from 0.196 to 1.960 μg， salvianolic acid B was in a good line with chromatograph peaks area，r=0.9996， the average recovery ratio is 97.83%（N=5），RSD=3.33%. Conclusions： The method is quickly simple with a high intelligent degree and stabilities. The method could be used to control quality effectively as a good base.

Key words：HPLC； XinKening Drop Pills； Salvianolic acid B