雛鴨黃曲霉毒素中毒自然病例的病理學(xué)診斷

摘要：對(duì)湖北省隨州、新州和襄樊養(yǎng)鴨場(chǎng)的發(fā)病雛鴨進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，病理學(xué)觀察，血清GLU、ALT、AST、TP檢測(cè)，鴨胚、雛鴨接種試驗(yàn)和飼料黃曲霉毒素B1檢測(cè)等一系列實(shí)驗(yàn)室檢查。結(jié)果顯示：死亡雛鴨肝臟腫大，表面有白色網(wǎng)格狀花紋。組織病理學(xué)觀察，肝細(xì)胞嚴(yán)重水泡變性和脂肪變性，肝細(xì)胞索之間有膽小管顯著增生。發(fā)病雛鴨血清生化指標(biāo)GLU為5.89±1.71mmol/L，TP含量為8.74±1.88g/L，ALT和AST活性分別為168.19±8685U/L和101.08±57.58U/L；鴨胚及雛鴨接種試驗(yàn)均未出現(xiàn)死亡；飼料中黃曲霉毒素B1含量分別為6，7p，g/kg至8.31ug/kg。檢查結(jié)果表明：3地鴨場(chǎng)雛鴨均為黃曲霉毒素中毒。

關(guān)鍵詞：雛鴨；黃曲霉毒素中毒；病理學(xué)診斷

中圖分類號(hào)：S834；S856.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007－273X(2008)02－0026－02

黃曲霉毒素是一組由黃曲霉、寄生曲霉等霉菌產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)極相似的代謝產(chǎn)物，是危害最嚴(yán)重、污染最普遍、理化性質(zhì)最穩(wěn)定的一類霉菌毒素。已發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素及其衍生物約有20余種，在所有黃曲霉毒素中，B1的毒性最強(qiáng)，而且B1已經(jīng)被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)確定為I類致癌物。自然界中的黃曲霉通常寄生在玉米、小麥、大麥、燕麥、稻米、花生、魚(yú)粉及其制品、花生餅，這些物質(zhì)在貯藏過(guò)程中易感染黃曲霉而產(chǎn)生黃曲霉毒素。黃曲霉毒素中毒是家禽吃了由黃曲霉菌污染的飼料而發(fā)生的一種以肝臟損傷為主要特征的蓄積性中毒疾病。家禽中以雛鴨最為敏感，中毒后可造成大批死亡。

筆者就2006年幾例雛鴨黃曲霉毒素中毒病例進(jìn)行了病理學(xué)診斷，現(xiàn)將情況報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 材料

湖北省隨州市某種鴨場(chǎng)8日齡、14日齡患病雛種鴨；武漢市新州區(qū)某鴨場(chǎng)8－14日齡患病肉雛鴨；湖北省襄樊某鴨場(chǎng)19日齡肉鴨。

10日齡鴨胚10個(gè)：1日齡健康櫻桃谷肉鴨10羽。均購(gòu)于武漢市春江種鴨場(chǎng)。

葡萄糖(GLU)試劑盒，總蛋白(TP)試劑盒，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT/GPT)試劑盒，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST/GOT)試劑盒均購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司。

1．2 方法

1．2．1 發(fā)病情況調(diào)查 對(duì)該鴨場(chǎng)飼養(yǎng)雛鴨的發(fā)病日齡、發(fā)病率和死亡率、發(fā)病雛鴨的臨床癥狀等情況進(jìn)行了解。

1．2．2 樣品的采集與處理對(duì)發(fā)病雛鴨進(jìn)行心臟采血。待自然凝固后，3000r/min離心10min，分離血清，4℃保存，以備血清生化指標(biāo)的測(cè)定，所有血清樣品均在采集后24h內(nèi)測(cè)定。待采血結(jié)束后經(jīng)頸靜脈放血致死，剖檢，觀察發(fā)病雛鴨的大體病變，采取肝臟組織于10％中性福爾馬林溶液中固定。

1．2．3 血清生化指標(biāo)測(cè)定用半自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中血糖(GLU)、總蛋白(TP)含量、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的變化。血清葡萄糖為葡萄糖氧化酶法；總蛋白為雙縮脲法；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶均為連續(xù)監(jiān)測(cè)法。

1．2．4 肝臟組織病理學(xué)觀察取固定完全的雛鴨肝臟組織。經(jīng)常規(guī)石蠟包埋、切片、H．E染色，光鏡下觀察病理組織學(xué)變化。

1．2．5 鴨胚、雛鴨接種試驗(yàn)取病死鴨肝臟，研磨，1：5稀釋，加青、鏈霉素各1000IU/mL，反復(fù)凍融3次，3000r/min離心30min取上清液，接種10日齡鴨胚10個(gè)，0.2mL/胚，另外用滅菌生理鹽水對(duì)照接種2個(gè)鴨胚。接種1日齡雛鴨10羽，0.3mL/羽。

1．2．6 飼料檢測(cè) 采集發(fā)病雛鴨使用的飼料樣品送華中農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料檢測(cè)站檢測(cè)黃曲霉毒素B1含量。

2 結(jié)果

2．1 發(fā)病情況調(diào)查結(jié)果和I臨床癥狀

湖北省隨州某種鴨場(chǎng)共有種雛鴨1萬(wàn)余套，自3日齡開(kāi)始發(fā)病。自發(fā)病到送檢的1周時(shí)間內(nèi)，該批種鴨發(fā)病1000只，死亡50只，病死率5％。武漢市新州區(qū)某肉鴨場(chǎng)有肉鴨2000只，9日齡開(kāi)始發(fā)病，發(fā)病5d，發(fā)病600只，死亡60只，病死率10％。湖北省襄樊某肉鴨場(chǎng)有肉鴨3000只，9日齡開(kāi)始發(fā)病，至19日齡，發(fā)病1400只，死亡1260只，病死率90％。

病鴨表現(xiàn)為食欲減退，生長(zhǎng)緩慢、嗜睡呆立，衰弱，步態(tài)不穩(wěn)、跛行，少數(shù)病鴨腳和腿由于皮下出血而呈淡紫色。病雛鴨死前常有抽搐，死亡后呈角弓反張現(xiàn)象。

2．2 剖檢病變

主要病變?cè)诟闻K，發(fā)現(xiàn)肝臟明顯腫大，表面粗糙，肝質(zhì)地較硬，肝表面有白色網(wǎng)格狀花紋，膽囊充盈。脾臟明顯腫大。外觀呈網(wǎng)格狀花紋。十二指腸黏膜充血、出血，腎臟腫脹充血。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，腫脹變圓。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有圓形空泡，發(fā)生嚴(yán)重的脂肪變性，肝細(xì)胞壞死；匯管區(qū)和肝小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞呈條索狀或團(tuán)塊狀增生，增生的膽管上皮細(xì)胞向肝小葉內(nèi)伸展。

2．3 鴨胚、雛鴨接種實(shí)驗(yàn)

10個(gè)鴨胚在37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)均正常孵化出殼；

10羽雛鴨接種24h、48h、72h后均無(wú)死亡，生長(zhǎng)亦未受到抑制。體重增重正常。

2．4 血清生化檢驗(yàn)

雛鴨血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2．5 飼料檢驗(yàn)

經(jīng)檢測(cè)飼料中黃曲霉毒素B1含量分別為6.7ug/kg、6.4ug/kg和8.3ug/kg。

3 討論

上述鴨場(chǎng)發(fā)病雛鴨的主要病變都發(fā)生在肝臟，表現(xiàn)為質(zhì)地較硬，表面粗糙，組織病理學(xué)變化為肝細(xì)胞脂肪變性，肝組織間質(zhì)有明顯的膽管上皮細(xì)胞增生，可以診斷發(fā)病雛鴨是黃曲霉毒素中毒。鴨胚及雛鴨的接種實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該鴨場(chǎng)此次暴發(fā)的疾病不是由細(xì)菌或病毒所引起的。

臨床上常用血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性來(lái)鑒別診斷肝病的性質(zhì)和程度。當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死、中毒等損害時(shí)，轉(zhuǎn)氨酶就會(huì)由肝細(xì)胞釋放到血中，引起血中轉(zhuǎn)氨酶升高。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了發(fā)病雛鴨血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的濃度。與正常比較，血清中轉(zhuǎn)氨酶升高，表明肝臟受損。

黃曲霉毒素是一組次級(jí)真菌代謝產(chǎn)物，在我國(guó)飼料檢測(cè)中以B1計(jì)，目前飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)黃曲霉毒素B1的安全限量有規(guī)定。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定肉用仔鴨前期、雛鴨配合飼料及濃縮飼料≤10ug/kg，肉用仔鴨后期、生長(zhǎng)鴨、產(chǎn)蛋鴨配合飼料及濃縮飼料≤15ug/kg。

發(fā)病鴨場(chǎng)飼料黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果均符合國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，但有研究表明，飼料中含黃曲霉毒素1ug/kg即可引起中毒。動(dòng)物因種類、性別、年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況不同對(duì)黃曲霉毒素B1的敏感性不同，最敏感的動(dòng)物為雛鴨。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，對(duì)飼料黃曲霉毒素檢測(cè)的結(jié)果只能作為通常情況下的參考值。而不是絕對(duì)的量度標(biāo)準(zhǔn)。

目前對(duì)黃曲霉毒素引起的中毒無(wú)有效的治療方法，重在預(yù)防，防止飼料霉變，提高飼料質(zhì)量意識(shí)，切實(shí)加強(qiáng)飼料原料及其產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)督和管理是關(guān)鍵。