復方金剛痛風顆粒中菝葜的鑒別與質量研究

摘 要：目的：建立復方金剛痛風顆粒中菝葜的TLC鑒別方法和含量測定方法。方法：以薯蕷皂苷元為對照品，采用氯仿-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，對復方金剛痛風顆粒中的菝葜進行了TLC鑒別；采用大連依利特C₁₈色譜柱(HypersilODS，5μm，4.6×250mm)，乙腈-水(90∶10)為流動相，流速為1mL.min^-1，203nm為檢測波長，柱溫為35℃，測定了復方金剛痛風顆粒中薯蕷皂苷元的含量。結果：薯蕷皂苷元斑點清晰，陰性對照無干擾。薯蕷皂苷元線性范圍為0.212μg～1.908μg (r=0.9999)，平均回收率為100.50%，RSD為1.49%。方法靈敏度高、結果準確、重現性好。結論：所建立的方法簡便可行、重現性好，為復方金剛痛風顆粒質量控制提供了有效途徑。

關鍵詞：復方金剛痛風顆粒；菝葜；薄層色譜法；高效液相色譜法

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)05-043-03

復方金剛痛風顆粒是由菝葜、兩面針、山銀花等中藥制成，具有清熱解毒、活血化瘀、養筋通絡、散寒止痛之功效。用于高尿酸血癥、急性關節炎反復發作、痛風石形成、關節畸形、腎實質性病變和腎尿酸結石等癥。為控制其質量，本篇對薯蕷皂苷元定性定量方法進行了研究，對制劑中的菝葜進行了薄層色譜鑒別。采用HPLC法測定制劑中薯蕷皂苷元的含量，可作為該制劑的質量控制方法。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料

菝葜藥材、綿萆薢藥材均為市售品經我院蔡毅教授鑒定為百合科植物菝葜Smilax chinaL.的干燥根莖和薯蕷科植物綿萆薢Diosorea septemLoba Thunb.的干燥根莖；薯蕷皂苷元對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號為1539-200001；復方金剛痛風顆粒(廣西中醫學院藥學院藥劑教研室自制)。

1.2 儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司)；AgilentVWD紫外檢測器；Agilent色譜化學工作站；AgilentALS自動進樣器；C₁₈柱(大連依利特分析儀器有限公司，HypersilODS，5μm，4.6×250mm)；BP211D電子分析天平(德國賽多利斯)；Millipore simplicity-185超純水器(美國密理博公司)；SB3200-T(上海必能信超聲有限公司)；LG16-W高速離心機(北京醫用離心機廠)；939薄層制板器(重慶南岸貝爾德儀器技術廠)。乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 菝葜、綿粉薢的定性鑒別

取本品顆粒5g，加乙醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液加鹽酸5mL，加熱回流2h，放冷，回收乙醇至無醇味，用石油醚(60～90℃)振搖提取4次(35，35，25，25mL)，合并提取液，蒸干，殘渣加氯仿2mL使溶解，作為供試品溶液。另取菝葜對照藥材和綿萆薢對照藥材各1g、缺菝葜陰性樣品、缺綿萆薢陰性樣品、缺菝葜與缺綿萆薢陰性樣品(雙陰性)各2g，同法制成對照藥材溶液、缺菝葜陰性溶液、缺綿萆薢陰性溶液及缺菝葜與缺綿萆薢雙陰性溶液。另取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(2005年版藥典附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液、缺菝葜陰性溶液、缺綿萆薢陰性溶液及缺菝葜與缺綿萆薢的雙陰性溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；而在缺菝葜與缺綿萆薢的雙陰性對照品色譜處無此斑點，結果見圖1。

1~2供試品；3綿萆薢對照藥材；4菝葜對照藥材；5缺菝葜藥材陰性對照品；6缺綿萆薢藥材陰性對照品；7缺菝葜與缺綿萆薢雙陰性對照品；8薯蕷皂苷元對照品.

圖1 菝葜、綿萆薢薄層鑒別色譜圖

3 含量測定^[1]

3.1 色譜條件

色譜柱：C₁₈柱(大連依利特分析儀器有限公司，5μm，4.6×250mm)；流動相：乙腈-水(90∶10)；流速：1.0mL/min；檢測波長：203nm；柱溫：35℃；進樣量：10μl理論塔板數按薯蕷皂苷元峰計算應不少于8000。

3.2 對照品溶液制備

精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加乙腈制成0.108mg/mL的薯蕷皂苷元對照品溶液。

3.3 供試品溶液的制備

取本品顆粒適量，研細，取約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加乙醇80mL，加熱回流提取2h，濾過，加鹽酸10mL，加熱回流水解2h，回收溶劑至約50mL，用石油醚振搖提取4次(35，35，25，25mL)，合并提取液，水浴蒸干，殘渣加乙腈溶解并移入2mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，作為供試品溶液。同法制成缺菝葜與缺綿萆薢雙陰性溶液。

3.4 方法學考察

3.4.1 標準曲線制備

精密稱取薯蕷皂苷元對照品10.60mg，加乙腈使溶解，定容至100mL量瓶中，再精密量取此溶液2、6、10、14、18(mL)，分別置25mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，以薯蕷皂苷元峰面積(A)為縱坐標，薯蕷皂苷元進樣量 (μg)為橫坐標做回歸計算得回歸方程Y=6.1152C-2.8888，r=0.9999，結果表明薯蕷皂苷元對照品進樣量在0.212～1.908μg之間與峰面積值呈現良好的線性關系，標準曲線見圖2。

圖2 薯蕷皂苷元工作曲線圖

3.4.2 精密度試驗

精密吸取薯蕷皂苷元對照品溶液(0.108mg/mL)10μl，連續進樣6次，分別測其峰面積值，其平均峰面積值為651.54，RSD為1.37%，表明儀器精密度良好，結果見表1。

3.4.3 穩定性試驗

取同一供試品溶液，每隔4h分別進樣10μl，測定薯蕷皂苷元峰面積值，計算RSD=0.31%(n=6)，表明供試品溶液在24h內保持穩定，結果見表2。

3.4.4 重復性試驗

精密稱取同一批號供試品各6份，按樣品測定項下方法進行測定，結果見表3。

3.4.5 加樣回收率試驗

取已測薯蕷皂苷元含量的供試品干燥粗粉約2.5g，精密稱定，分別精密加入一定量的對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，按上述色譜條件測定，計算加樣回收率，結果見表4。

3.5 樣品測定

分別取不同批號的復方金剛痛風顆粒供試品干燥粉末約5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，注入高效液相色譜儀，測定峰面積值，以外標一點法計算薯蕷皂苷元的含量，結果見表5。

圖3 薯蕷皂苷元對照品HPLC色譜圖

a為薯蕷皂苷元

圖4 復方金剛痛風顆粒供試品HPLC色譜圖

a為薯蕷皂苷元

圖5 缺菝葜與缺綿萆薢雙陰性供試品HPLC色譜圖

4 小結與討論

(1)在菝葜、綿萆薢的薄層鑒別及薯蕷皂苷元的HPLC含量測定中，因為菝葜、綿萆薢中均含有薯蕷皂苷元，所以采用缺菝葜與綿萆薢的雙陰性供試品作對照。

(2)在薯蕷皂苷元的HPLC含量測定中，在制備供試品溶液時，分別用氯仿、石油醚以及醋酸乙酯進行萃取，結果表明以石油醚(35，35，25，25mL)直接萃取4次的效果最優。本品薯蕷皂苷元的含量測定在供試品溶液制備時需進行水解，然后用石油醚分次萃取，這是測定樣品中薯蕷皂苷元含量最佳的方法，但處理過程中的步驟較多，會使方法的重復性變差。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(2005年版 一部).北京：化學工業出版社，2005：216，116～117，21~22.

(責任編輯：陳涌濤)

Study on Identification and Quality for Smilax ChinaL of Compound Gout Granules

CHEN Yong，WANG Qin，LI Bing，LILI，PANLi-na，HUANG Ying

Abstract：Objective：To establish TLC identification method and HPLC assay method for Smilax ChinaL of compound gout granules.Methods：Smilax chinaL were identified by TLC respectively，using diosgenin as reference substances，and (10∶1) as mobile phases.Diosgenin were determined by HPLC using the HpersilODS reversed-phase column of C₁₈(4.6×250mm，5μm)，the mobile phase was a combination of acetonitrile and water (90∶10) at the flow rate of1.0mL·min^-1，and the eluate was monitored withUV absorption at 203nm，retention at 35 degrees.Result：The TLC chromatograms of diosgenin were of clearness，good separation，and no interference.The diosgenin contents in Compound gout granules by HPLC，in the linear range of 0.212μg to1.908μg (r=0.9999) and the recoveries of100.50%(RSD=1.49%).Conclusion：The established methods are simple，feasible and reproducible.This study provide a method for the quality control of compound gout granules

Key words：Compound gout granules；Smilax ChinaL；TLC；HPLC