ＲＰ－ＨＰＬＣ法同時測定腰痛寧膠囊中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

摘 要：目的：同時測定腰痛寧膠囊中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。方法：采用高效液相色譜法，Agilent C₁₈色譜柱，乙腈-0.02mol/L NaH₂PO₄(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6∶94)為流動相；檢測波長為207nm。結果：方法學考察結果表明，本研究建立的分析方法有較好的重現性和穩定性。鹽酸麻黃堿平均回收率為101.38%，RSD為2.02%(n=6)，鹽酸偽麻黃堿平均回收率為101.24%，RSD為2.25%(n=6)。結論：本法操作簡便、結果準確，可用于該制劑中麻黃藥材的質量控制。

關鍵詞：腰痛寧膠囊；RP-HPLC；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)05-033-03

腰痛寧膠囊為常用中成藥，是國家中藥保護品種。主要成分有馬錢子、麻黃、乳香等數十種名貴中草藥。具有消腫止痛，疏散寒邪，溫經通絡的功效^[1]。因麻黃除醫療功效作用外，還有一定的毒副作用，在制劑過程中須嚴格控制其含量^[2]。但目前針對麻黃的質量控制多對其中的鹽酸麻黃堿進行含量測定^[3]。不同產地的麻黃藥材，其中的麻黃堿和偽麻黃堿含量差別很大，且偽麻黃堿也具有一定的治療和毒副作用，因此有必要開發一種方法，同時對麻黃藥材中的麻黃堿和偽麻黃堿同時進行質量控制。

1 儀器、試藥與樣品

儀器：waters 2695高效液相色譜儀。

試劑：乙腈(色譜純，fisher公司)，磷酸二氫鈉、三乙胺、磷酸(分析純，北京化工廠)，超純水(Milli Q 超純水，過0.2μm微孔濾膜)。

對照品：鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所購置，批號：171237-200505，供含量測定用)。鹽酸偽麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所購置，批號：111242-200405，供含量測定用)。

樣品：腰痛寧膠囊(河北承德頸復康藥業集團股份有限公司提供，批號：20070513、20070519、20070522)。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C185μ(4.6×250mm)，柱溫：25°C；以乙腈-0.02mol/L NaH₂PO₄(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6∶94)為流動相；流速：1mL/min。

2.2 對照品溶液的制備

取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分別為76.2μg 和32.9μg。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，取出膠囊中藥物，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入濃氨試液3mL使藥物充分濕潤后，再加入乙醇-乙醚(1∶3)混合溶液40mL，浸泡30min后于超聲波儀器上超聲提取60min，放冷，將乙醚提取液至蒸發皿中，加1%鹽酸甲醇溶液4mL，50℃水浴蒸干，殘渣加1%鹽酸甲醇溶液使溶解，轉移至10mL量瓶中，用1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.4 陰性對照試驗

用除麻黃藥材外的其它藥材的處方量，照工藝要求制備陰性對照品，按質量標準正文中含量測定項下進行高效液相色譜試驗，所得陰性對照色譜圖中，在腰痛寧膠囊色譜圖中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰的出峰位置上未出現吸收峰，表明處方中其它藥材對鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量測定無影響(見圖1～3)。

圖1 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品溶液色譜

圖2 腰痛寧膠囊溶液色譜

圖3 腰痛寧膠囊陰性樣品溶液色譜

2.5 線性關系的考察

精密吸取濃度為76.2μg/mL的鹽酸麻黃堿和32.9μg/mL鹽酸偽麻黃堿對照品溶液2，5，8，10，15，20μl，注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件分析，測定各自峰面積，以對照品進樣量(μg)對峰面積值進行回歸，求得鹽酸麻黃堿回歸方程：y=2345106x -117828 R² =0.9989，鹽酸偽麻黃堿回歸方程：y=2463715x-30739，R²= 0.9991。結果表明鹽酸麻黃堿在0.1524～1.524 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，鹽酸偽麻黃堿在0.0658～0.658 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取同一批號(20070522)樣品，研細，取約1g，精密稱定，按照“2.3”供試品溶液制備方法操作，按“2.1”色譜條件分析，連續進樣6次，測定各自鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，測得峰面積值的RSD為1.54%和0.34%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 重現性試驗

取同一批號(20070522)樣品，研細，取約1g(共6份)，精密稱定，按照“2.3”供試品溶液制備方法操作，按“2.1”色譜條件分析，測定每份樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量。結果樣品中鹽酸麻黃堿平均含量為0.8399mg/g，RSD為2.03%(n=6)，鹽酸偽麻黃堿平均含量為0.2608mg/g，RSD為2.50%(n=6)。

2.8 穩定性試驗

取同一批號(20070522)樣品，研細，取約1g，精密稱定，按照“2.3”供試品溶液制備方法操作，按“2.1”色譜條件分析，分別在0、2、4、8、12、24小時，測定各自樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，測得峰面積值的RSD為1.80%和0.59%(n=6)，說明供試品溶液中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在24小時內穩定。

2.9 回收率試驗

取同一批號(20070522)樣品，取0.5g(共6份)，精密稱定，分別加入鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿混合對照品0.38mg和0.172mg，稱定重量，按照“2.3”供試品溶液制備方法操作，按“2.1”色譜條件分析，測定樣品中含量，計算回收率，結果鹽酸麻黃堿平均回收率為101.38%，RSD為2.02%(n=6)，鹽酸偽麻黃堿平均回收率為101.24%，RSD為2.25%(n=6)，符合要求。結果見表1，表2。

2.10耐用性試驗

(1)不同色譜柱的耐用性：按“2.1”色譜條件，使用Agilent HC-C18柱5μm (4.6mm×250mm)和AllsphereODS-25μ(4.6×250mm)對腰痛寧膠囊溶液進行色譜分析，測試結果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿達到基線分離，說明色譜柱耐用性好。

(2)不同儀器的耐用性：按“2.1”色譜條件，用AllsphereODS-25μ(4.6×250mm)色譜柱，分別采用Agilent1100series與Waters 2695高效液相色譜儀，按照“2.1”色譜條件分析，測試結果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿達到基線分離，說明色譜柱耐用性好。

2.11 樣品含量測定

分別取3個批號樣品，按照“2.3”供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件測定各自樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量。結果見表3，表4。

3 討論

供試品提取方法的選擇：在提取過程中，參考《中國藥典》2005年版麻黃^[4]提取，但因過中性氧化鋁柱對加樣回收影響較大，從而影響含量測定，故優化提取方式，考察了超聲提取和索氏回流，結果無顯著差別，超聲提取操作較為簡便，故采用超聲提取方法。另外因鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿易揮發，在提取過程中應控制樣品溫度在60°C以下。

提取溶劑的選擇：本實驗使用了甲醇、乙醇、乙醚以及乙醇和乙醚的不同比例的混合液多種溶媒提取，結果顯示，提取溶劑為乙醇-乙醚(1：3)混合溶液最好。

流動相的選擇：曾有報道使用離子液體^[5]可以極其方便分離出鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿，但該離子液體難以獲取，同時該方法不便于推廣。參考《中國藥典》2005年版麻黃項的流動相^[4]，進行試驗，反復摸索，最終選定乙腈-0.02mol/L NaH2PO4(含0.2%三乙胺，0.4%磷酸)溶液(6：94)為流動相，樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰形較好，與其它組分均可達到基線分離，空白對照亦無干擾。本實驗結果表明，用本文HPLC法同時測定腰痛寧膠囊中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，方法靈敏度高、專屬性強、重現性好，可有效控制腰痛寧膠囊中麻黃質量。

參考文獻：

[1] 新藥介紹.腰痛寧膠囊簡介[J].山東醫藥，2004，44(10).

[2] 丁麗麗，施松善等.麻黃化學成分與藥理作用研究進展[J].中國中藥，2006，31(20).

[3] 郭東艷，史亞軍等.HPLC測定復方麻黃止咳顆粒中鹽酸麻黃堿的含量[J].陜西中醫，2005，26(4).

[4] 國家藥典委員會編.中國藥典(I部)[S].北京：化學工業出版社，2005.

[5]Lijun He，Wenzhu Zhang et.al.Effect of1-alkyl-3-methylimidazolium—based ionic liquids as the eluent on the separation of ephedrines by liquid chromatography[J].Journal of Chromatography A，1007 (2003) ：39~45.

(責任編輯：王尚勇)