４種蟲生真菌對煙草甲蟲的侵染致死效果

摘要 研究了4種蟲生真菌對煙草甲蟲的致死效果。結果顯示，球孢白僵菌對煙草甲蟲的防治效果最好，在10³個/mL的孢子濃度下，對煙草甲蟲的致死中時為10 d。另外幾種真菌對煙草甲蟲也有不同程度的感染。經過SPSS軟件分析了白僵菌對煙草甲蟲致死率與時間劑量的量化關系。

關鍵詞 煙草甲蟲；生物防治；蟲生真菌；白僵菌

中圖分類號 S476.12

煙草甲蟲(Lasiderma serricorne)為世界性倉儲害蟲Ⅲ。我國在20世紀90年代曾對全國貯煙害蟲的危害程度進行了調查，每年因蟲害引起的質(重)量損失率為1.64％～2％，其中煙草甲蟲為害引起的質量損失遠大于其他貯煙害蟲。煙草甲蟲不僅蛀食煙葉，形成孔洞，使煙葉成絲率下降；同時排出大量糞便，留下蟲尸，敗壞煙葉吸味，品質下降。另外高等級煙葉儲存期長，蟲損越發嚴重，儲煙害蟲的種群密度與煙葉儲存期呈直線相關。因此防治煙草甲蟲對于煙廠、煙葉復烤廠顯得格外重要。

目前，生物防治由于自身的特點而備受人們關注。在防治煙草甲蟲的應用研究中，蘇云金芽孢桿菌(Bt)對煙草甲有一定的殺蟲活性，但效果并不理想。蟲生真菌作為經過表皮入侵的殺蟲劑有其他殺蟲劑所不具備的優點。沒有化學殺蟲劑的殘留毒害，也不像Bt類農藥必須經過口腔進入昆蟲的腸道才能夠發揮作用。選用真菌作為煙葉倉庫害蟲防治有重要的現實意義。此外，利用真菌進行倉庫內害蟲防治的報道不多。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 供試菌株

玫煙色擬青霉(Paecilomyces fumosoroseus)、布氏白僵菌(Beauveria brongniartii)、球孢白僵菌(B.bassiana)、環鏈擬青霉(Paecilomyces cate-niannulatus)，以上菌株經貴州大學真菌資源研究所鑒定保存。

1．1．2 試驗用蟲

煙草甲蟲采自貴陽卷煙廠南明區煙葉醇化庫。

1．1．3 培養基

馬鈴薯蛋白胨蔗糖(PPSA)培養基：馬鈴薯200 g切成約1 cm²見方的塊，煮沸30 min，過濾除去馬鈴薯塊，定容到1 000 mL，加入20 g蔗糖，5 g蛋白胨，瓊脂20 g。121℃滅菌備用。

沙氏(Sabouraud)培養基：葡萄糖20 g，麥芽糖5 g，蛋白胨10 g，酵母膏5 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。121口C滅菌備用。

0.05％Tween-80溶液，121℃滅菌備用。無菌蒸餾水，滅菌脫脂棉。

1．1．4 儀器

PQX型多段可編程人工氣候箱(寧波東南儀器有限公司制造)，滅菌的15 cm平皿，顯微鏡，血球計數板，軟質毛刷。

1．2 方法

1．2．1 供試菌株的選擇

將從各地采集來的4種蟲生真菌進行溫度篩選。設定了25、30、35℃3個溫度梯度的培養箱。將各菌株接種在沙氏培養基的平板上在上述培養箱中培養10 d。通過觀察比較各菌株的菌落直徑大小來確定試驗用菌株。

1．2．2 孢子懸液的制備

各菌株的斜面培養用沙氏培養基，將培養好的各斜面菌株轉接到含有PPSA培養基的平板上，28℃培養11 d。倒入適量的0.05％Tween-80溶液，用接種環輕輕刮下孢子到滅過菌的三角瓶中，充分振蕩后用2層擦鏡紙過濾入滅菌的平皿中，使最高孢子濃度為超過10⁸個/mL備用。4株菌都配制3個梯度濃度。每個濃度3個平行樣本。

1．2．3 試蟲的選擇

把有試蟲的取樣袋口打開，煙草甲蟲會自行爬出，選取大小比較接近具有良好活動性的煙草甲蟲為試驗試蟲。

1．2．4 侵染方法

將煙草甲蟲放入具有適量孢子懸液的平皿中2～3 s，立即取出，置于鋪有濾紙的培養皿內。每個培養皿內置40頭蟲，1個脫脂棉球，幾片煙葉，30℃，RH75％人工氣候箱培養。定期加無菌水保持棉球的濕度。每2天觀察死亡率，以長出白色菌絲體的死蟲為真菌感染死亡，試驗持續10 d。

1．2．5 對照試驗

采用Tween-80溶液按照方法1.2.4處理試驗用蟲，為Tween-80對照組做3個平行。另外做3個不作任何處理的空白樣本，觀察煙草甲蟲的自然死亡率。

1．2．6 數據處理

采用SPSS統計分析軟件做回歸分析處理。

2 結果與分析

2．1 不同溫度下的菌株生長情況

考慮煙倉醇化庫的溫度范圍和蟲生真菌的生長溫度范圍，設定了3個溫度梯度，其中在25℃下所有的菌株都生長正常。在30℃下只有來自廣西的白僵菌生長正常，其菌落直徑(70 mm)和25℃菌落直徑(69 mm)差別很小，其他的菌株生長都有不同程度的減弱。35℃下所有菌株都未見生長，培養結束后只有白僵菌存活，其他菌都未存活。

2．2 真菌對煙草甲蟲致死效果

在不做任何處理的空白培養皿中甲蟲的平均死亡率為6.8％。在吐溫對照組中甲蟲平均死亡率為19.7％。圖1～4顯示球孢白僵菌防治煙草甲蟲效果較好，另3種真菌感染效果不好。試驗用白僵菌菌株采自廣西桂林，該菌株耐熱性較好，30℃下正常生長，產孢量大。其余幾種真菌在30℃下均生長受限制，影響了對甲蟲的感染率。

2．3 利用SPSS軟件分析4種真菌對煙草甲蟲的致

死情況

選擇真菌對煙草甲蟲的致死率為因變量(y)，孢子濃度(x₁)和時間(x₂)為自變量，建立回歸方程。回歸方法選擇多重線性回歸，得到的結果如表1。根據表1可以初步評價這幾種蟲生真菌對煙草甲蟲的致死效果。當確定真菌孢子濃度則可以估算出煙草甲蟲死亡一半數量時所需要的時間，時間值越小說明真菌的防治效果越好。如果選擇這幾種真菌的孢子濃度數量級都為10⁸，對應回歸方程中的變量值為3，那么可以初步得出各菌株對煙甲的致死中時。根據表1可得，球孢白僵菌為10 d，其他幾種菌分別為玫煙色擬青霉20.3 d、環鏈擬青霉21.1 d，布氏白僵菌28 d。

3 討論

在利用微生物對煙草甲蟲的生物防治中，國內外較新的報道都是關于應用蘇云金芽孢桿菌防治煙甲，而利用真菌這個潛在的資源防治該蟲未見相關報道。本文也只是初步的試驗結果離實際應用還有相當距離。來自廣西桂林的一株白僵菌雖然顯示了較好的應用前景，但也只是在生物測定表現了較好的效果。由于加工好的煙葉在加工過程中經過高溫處理是沒有甲蟲的，只是在貯存醇化的過程中，環境中的甲蟲進入了煙箱或煙包造成甲蟲危害，因而控制環境中的煙草甲蟲種群數量，可以選用白僵菌等蟲生真菌。用蟲生真菌防治煙草甲蟲有一些問題值得關注。(1)蟲生菌是否會對煙草品質產生影響，因為蟲體帶菌很容易將菌污染到煙片上。(2)選育出適合倉儲醇化條件(溫度較高，濕度較低)的高毒力菌株。(3)合適的真菌劑型。(4)在施用策略上也值得關注，應立足于整個倉儲的環境系統來綜合考慮防治方案。