１０種殺菌劑對(duì)板栗疫病菌的抑制作用

摘要 為了篩選防治板栗疫病的高效、低毒、低殘留殺菌劑，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了10種殺菌劑對(duì)栗疫病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果。結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑+丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈、咪鮮胺和多氧霉素對(duì)栗疫病菌具有很強(qiáng)的抑制作用，EC₅₀在0.0148～8.752 ug/mL之間，為生產(chǎn)上有效地防治板栗疫病提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞 板栗疫病；栗疫病菌；殺菌劑；生物測(cè)定

中圖分類號(hào) S436.64

由栗疫病菌[Cryphonectria parasitica(Murr．)Barr]引起的板栗疫病又稱干枯病、胴枯病、潰瘍病，是板栗的主要病害，主要危害樹干和主枝，引起樹皮腐爛，少數(shù)枝梢枯萎。19世紀(jì)末20世紀(jì)初，該病使美洲栗遭到滅種的威脅。板栗疫病在我國分布廣泛，多數(shù)板栗產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生。防治板栗疫病使用的藥劑一般有代森錳鋅(Ditha-nero-45)、石硫合劑、抗菌劑402、70％甲基托布津、多菌靈和武夷菌素等等，缺乏有效的新型高效殺菌劑，生產(chǎn)上對(duì)板栗疫病的防治也不夠重視。中國板栗產(chǎn)量為世界之最，年均增長(zhǎng)率約為6．8％，到2005年底，我國板栗種植面積達(dá)125萬hm²，占世界種植面積的38％，總產(chǎn)量達(dá)82.5萬t，約占世界產(chǎn)量的3/4。板栗疫病的防治問題也顯得更為突出。本試驗(yàn)旨在通過室內(nèi)生物測(cè)定，篩選出對(duì)栗疫病菌具有高效、低毒、低殘留的新型殺菌劑，為板栗疫病的田間防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 供試菌株

采用常規(guī)組織分離法，從北京地區(qū)板栗疫病的樹干病組織中分離栗疫病菌，本試驗(yàn)所用23號(hào)菌株經(jīng)致病性測(cè)定和單分生孢子的分離，保存在PDA培養(yǎng)基上備用。

1．1．2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。

1．1．3 供試殺菌劑

共10種，分別為嘧菌酯(25％阿米西達(dá)懸浮劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)、惡霉靈+甲霜靈(30％瑞苗清水劑，日本三共AGRO株式會(huì)社)、氫氧化銅(57.6％冠菌清干粒劑，澳大利亞新農(nóng)有限公司)、苯醚甲環(huán)唑+丙環(huán)唑(30％愛苗乳油，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)、多氧霉素(10％寶麗安可濕性粉劑，日本科研制藥株式會(huì)社)、苯醚甲環(huán)唑(10％世高水分散粒劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)、精甲霜靈+代森錳鋅(68％金雷水分散粒劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)。98％咪鮮胺(施保克)和95.8％咯菌腈(適樂時(shí))2種原藥由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)種子病理與藥理實(shí)驗(yàn)室提供。以常規(guī)殺菌劑98％多菌靈作為藥劑對(duì)照。

1．2 試驗(yàn)方法

采用菌絲生長(zhǎng)速率抑制法。將供試殺菌劑分別稀釋成系列濃度梯度的母液，按一定比例加入到融化好的PDA培養(yǎng)基中，混勻后倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，制成系列濃度梯度的含藥培養(yǎng)基平板。供試的栗疫病菌菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落長(zhǎng)至培養(yǎng)皿近邊緣時(shí)，用直徑5 mm的打孔器在菌落邊緣打取菌落塊，移置到上述含藥的培養(yǎng)基平板中央，每皿接一個(gè)菌落塊。每個(gè)濃度重復(fù)3皿，以加入同等無菌水或溶劑的PDA培養(yǎng)基為對(duì)照。25℃恒溫下培養(yǎng)5 d后測(cè)量菌落直徑。按以下公式計(jì)算藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率：

菌絲生長(zhǎng)抑制率＝(對(duì)照菌落直徑－菌餅直徑)－(處理菌落直徑－菌餅直徑)/(對(duì)照直徑－菌餅直徑)×100％。

將菌絲生長(zhǎng)抑制率轉(zhuǎn)換成幾率值(y)、藥劑濃度(ug/mL)轉(zhuǎn)換成以10為底的對(duì)數(shù)值(x)，作回歸直線，求出毒力回歸方程(y=a+bx)和相關(guān)系數(shù)(r)，計(jì)算殺菌劑對(duì)栗疫病菌菌絲生長(zhǎng)抑制的有效中濃度(EC₅₀，以此表示殺菌劑對(duì)栗疫病菌抑制作用的強(qiáng)弱。

2 結(jié)果與分析

殺菌劑對(duì)板栗疫病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定的結(jié)果表明，10種殺菌劑對(duì)栗疫病菌分別表現(xiàn)出不同的抑制效果，抑制作用差異較大，其中苯醚甲環(huán)唑+丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈3種殺菌劑對(duì)栗疫病菌的菌絲生長(zhǎng)具有極強(qiáng)的抑制作用，抑制效果明顯優(yōu)于常規(guī)殺菌劑多菌靈，EC₅₀分別為0.014 8、0.035 8ug/mL和0.067 6ug/mL；咪鮮胺的抑制作用與多菌靈相近，EC₅₀為0.325 6ug/mL；多氧霉素對(duì)栗疫病菌的抑制效果也比較好，EC₅₀為8.752ug/mL；精甲霜靈+代森錳鋅的抑制作用次之，EC₅₀為20.883ug/mL。其他3種殺菌劑氫氧化銅、嘧菌酯和惡霉靈+甲霜靈的抑制作用較差，EC₅₀值遠(yuǎn)高于其他7種殺菌劑。10種殺菌劑對(duì)栗疫病菌的毒力曲線見圖1，對(duì)栗疫病菌的抑制作用的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和抑制中濃度EC₅₀見表1。

3 討論

本試驗(yàn)測(cè)試了10種殺菌劑對(duì)栗疫病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果，篩選出苯醚甲環(huán)唑+丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈、咪鮮胺和多氧霉素等對(duì)板栗疫病菌均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑菌活性。這些殺菌劑都是一些新型的高效、低毒、低殘留殺菌劑，它們有著不同的作用方式，如咯菌腈通過抑制葡萄糖磷酰化有關(guān)的轉(zhuǎn)移，并抑制真菌菌絲體的生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致病菌死亡。咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑等制甾醇的生物合成，多氧霉素則干擾真菌細(xì)胞壁幾丁質(zhì)的生物合成。其有效成分也有所區(qū)別(表1)，所得結(jié)果能夠反映不同類型殺菌劑對(duì)栗疫病菌的抑制作用程度。本試驗(yàn)結(jié)果為板栗疫病的田間藥劑防治和藥劑的輪換使用提供了試驗(yàn)依據(jù)。各板栗園可根據(jù)實(shí)際情況從中選擇適宜的殺菌劑種類進(jìn)行合理用藥，如采用刮樹皮后涂藥或涂藥泥等方式進(jìn)行。