ＨＰＬＣ法測定復方丹參片中三七含量的探討

摘要：目的：建立復方丹參片中三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、Rb_l含量測定的HPLC法。方法：采用Venusil-XBP-C₁₈色譜柱(250×4.6mm，5μm)，以乙腈(A)和水(B)為流動相梯度洗脫，流動相梯度：0min(20％A)→12min(20％A)→60min(36％A)。流速：1.0ml.min^-1，柱溫：30℃，檢測波長：203nm。結果：三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、Rb_l線性范圍分別為0.99～4.95ug、3.14～15.7μg、2.27～11.35μg。該方法加樣回收率：三七皂苷R₁99.8％、人參皂苷Rg_l為99.5％、人參皂苷Rb₁，為99.8％，RSD分別為0.87％、0.62％、0.90％。結論：本法操作簡便、結果準確、靈敏度高，重復性好，能有效的控制復方丹參片的質量。

關鍵詞：復方丹參片；HPLC;三七皂苷R_l；人參皂苷Rg₁；人參皂苷Rb₁；含量測定

中圖分類號：R927.2

文獻標識碼：A

文章編號：1007－2349(2007)07－0038－02

復方丹參片由丹參、三七、冰片組成，具有活血化瘀、理氣止痛的功效。用于氣滯血瘀所致的胸痹。《中國藥典》規定測定丹參中丹參酮Ⅱ_A和丹酚酸B的含量，未對三七進行質量控制。筆者認為，三七在復方丹參片中是主要成分，為了有效控制其產品質量，應對其進行質量控制。本文采用高效液相色譜法測定三七中三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rb₁，的含量，結果表明，本法簡便、迅速、結果準確，現報道如下。

1 儀器試劑與材料

1．1儀器高效液相色譜儀(日本島津)，LC－10ATVP泵，SPD－10PVP紫外一可見檢測器，CTO－10ASVP柱溫箱，SCL－10AVP系統控制器，CLASS－VPLC工作站。

1．2試劑對照品：三七皂苷R₁、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb₁，分別由中國藥品生物制品檢定所提供(批號分別為：110745-200312 110703-0200322 110704-200318)。

乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水。復方丹參片(批號20060204、20060401、20060202)規格每片含丹參酮Ⅱ_A不得少于0.2mg，平均片重分別為0.3129g，0.3064g，0.3029g，由云南白藥集團文山七花有限責任公司提供。

2 方法與結果

2．1色譜條件及系統適應性試驗色譜柱：Venusil－XBP－C₁₈(250X4.6mm，5μm)；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1進行梯度洗脫；流速：1.0m1．min^-1，柱溫：30℃，檢測波長：203nm。在此條件下，組分在60min內出完，在記錄的色譜中，按保留時間先后的出峰順序為：三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rb₁，供試品溶液保留時間與對照品溶液保留時間一致，理論塔板數按三七皂苷R₁的峰計算應不低于4000，分離度大于2.0。空白溶液無干擾。見表1及圖1。

2．2對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R₁、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb₁，對照品適量，加甲醇溶解配制成三七皂苷R_l為0.198mg．ml^-1、人參皂苷Rg_l為0.628mg．ml^-1、人參皂苷Rb_l0.454mg.ml^-1的混合溶液，作為對照品溶液。

2．3供試品溶液的制備取復方丹參片20片，精密稱定，研細，取約1.5g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，放置過夜，置80℃水浴上加熱回流2h，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。作為樣品溶液。同法制備缺三七的陰性對照。

2．4線性關系考察精密稱取三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l對照品適量，加甲醇溶解配制成三七皂苷R_l0.198mg.ml^-1、人參皂苷Rg_l為0.628mg．ml^-1、人參皂苷Rb_l0.454mg.ml^-1的混合溶液，分別精密吸取此混合溶液5μl、lOμl、15μl、20μl、25μl進行分析，以色譜峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制工作曲線，計算回歸方程，見表2。

由表2可見，三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l進樣量分別在0.99～4.95μg、3.14～15.7μg、2.27～11.35μg范圍內線性關系良好。

2．5精密度試驗精密吸取上述對照品溶液l0μl，重復進樣5次，測定峰面積，結果精密度良好。三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l的RSD分別為0.68％、0.36％、0.42％。

2．6穩定性試驗將同一供試品溶液，每隔2h進樣測定1次，分別為0、2、4、6、8、10h內測定，RSD分別為1.0％、0.52％、0.78％，表明供試品溶液在l0h內基本穩定。

2．7重復性試驗取同一批號的樣品(20060204)5份，按供試品溶液制備的方法制備溶液，依法進行測定，結果樣品中測得三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l平均含量分別為0.87(mg／片)、3.79(mg／片、2.76mg／片)，三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l的RSD分別為0.65、0.49％、0.51％。

2．8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的復方丹參片(批號：20060204)樣品5份，分別加入三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l對照品，分別測定計算平均回收率，分別為99.8％、99.5％、99.8％。RSD分別為0.78％、0.37％、0.97％。結果見表3。

2．9樣品含量測定取復方丹參片20片，精密稱定，研細，取約1.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備。精密吸取供試品溶液及對照品溶液各l0μl，按上述色譜條件進行測定，測定結果見表4。

3 討論

因三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l在甲醇中溶解度較好，故選擇甲醇為提取溶媒。筆者比較甲醇80℃加熱回流2h提取后萃取、超聲30min提取后萃取和甲醇浸漬提取后萃取。結果顯示，甲醇80℃加熱回流2h提取后萃取測得的含量較高，另對回流提取時間進行了考察，比較回流提取1h、2h、3h三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l的提得量，結果2h和3h提得量較高，且相差不大，故選擇甲醇80℃加熱回流2h提取后萃取為復方丹參片的提取法。

用HPLC法測定復方丹參片中三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l的含量，經方法研究結果表明此方法重現性，穩定性，回收率好，專屬性較強，可作為復方丹參片中三七皂苷R_l、人參皂苷Rg_l、人參皂苷Rb_l，的測定方法，以便有效的控制該制劑的質量。