高效液相色譜法測定白帶丸中芍藥苷的含量

摘要：目的：建立白帶丸中芍藥苷HPLC含量測定方法。方法：固定相：Kromasil 5u 100AC₁₈柱；流動相：乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)；流速：lml·min^-1；檢測波長：230nm~柱溫：室溫。結果：該方法線性范圍為0.3878～1.55lμg(r=0.9996，n＝9)，平均加樣回收率為99.78％，RSD為0.36％(n＝9)。結論：本方法準確，簡便靈敏，可靠，可用于該制劑的質量控制。

關鍵詞：高效液相色譜法；白帶丸；芍藥苷

中圖分類號：R927.2

文獻標識碼：A

文章編號：1007－2349(2007)07－0035－02

白帶丸由黃柏(酒炒)、椿皮、白芍、當歸、香附(醋制)5味中藥材組成，具有清熱，除濕，止帶的功效，用于濕熱下注所致的帶下病。中國藥典2005版一部只對其鹽酸小檗堿的含量進行測定，為更好地控制產品質量，完善和提高其質量標準，現對芍藥苷的含量進行測定。芍藥苷的含量測定方法已報道的主要有薄層層析法，薄層掃描法，紫外分光光度法，正交函數分光光度法，高效毛細管電泳法，反相高效液相色譜法及高效液相色譜法。本文以高效液相色譜法測定白帶丸中芍藥苷的含量作為評價制劑質量的一個指標。

1 儀器與試藥

1．1儀器Agilent 1100系列高效液相色譜儀，包括：四元泵，真空脫氣機，自動進樣品，VWD檢測器(可變波長檢測器)，Agilent 1100LC化學工作站；賽多利斯BP211D電子天平。

1．2試藥芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號110736～200422，含量測定用)，白帶丸(廠家：福州海王金象中藥制藥有限公司，生產批號：040954，041056，050816)，乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：Kromasil 5u 100AC，8柱(250×4.6ram)；流動相：乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)；流速：lml·min^-1；檢測波長：230nm；柱溫：室溫；進樣體積：l0ul(自動進樣)；理論塔板數：按芍藥苷峰計算不得低于2000。

3 方法與結果

3．1對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品10.34mg，加稀乙醇制成每lml含5.17×10^-2mg的溶液，搖勻，即得。

3．2供試品溶液的制備取本品約0.5g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3．3線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液7．5，10，12.5，15，17.5，20，22.5，25，30tA注入高效濾相色譜儀中，按上述色譜條件進行測定，以峰面積(mAU)Y對應芍藥苷進樣量(μg)X進行回歸分析，得回歸方程：Y=1446.34X+44.41，r=0.9996(n=9)表明芍藥苷在0.3878～1.551g范圍內具有良好的線性關系。標準曲線見圖1。

3．4精密度試驗分別精密吸取芍藥苷對照品溶液10μl，連續重復進樣6次，結果峰面積的RSD為0.18％(n=9)，表明芍藥苷進樣精密度良好。

3．5重現性試驗取同一生產批號(041056)的樣品，按上述樣品溶液制備方法和色譜條件進行6次平行測定，計算芍藥苷的平均含量為2.902mg·g^-1，RSD=0.54％(n＝6)，表明本法測定的重現性良好。

3．6穩定性試驗取同一生產批號(041056)的供試品溶液，分別在0、2、4、8、12及24h進樣10μl，測定峰面積，結果芍藥苷平均含量為2.90mg·g^-1RSD=0.43％(n=6)，表明樣品溶液放置24h內穩定。

3．7回收率試驗取已知含量的同一生產批號(041056)的樣品，采用加樣回收試驗，分別以樣品量的80％，100％，120％的比例精密加入芍藥苷對照品，按樣品測定項下的方法測定含量，得平均回收率為99.78％，RSD＝0.36％(n＝9)，結果見表1。

3．8樣品測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，記錄峰面積，計算含量，結果3個批號(040954，041056，050816)的芍藥苷含量(nag·g^-1)分別為3.88，3.22，7.70。

3．9干擾試驗模擬處方制備不含白芍的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制1份陰性對照溶液。分別吸取芍藥苷對照品溶液，白帶丸供試品溶液和陰性對照溶液，按上述測定方法進行測定，結果表明其他各味藥材不干擾芍藥苷的測定見圖2～圖4。

4 討論

4．1流動相的選擇文獻報道的高效液相色譜法測定芍藥苷的方法較多，多用流動相分別為乙腈：水(12:88)，水：甲醇(60:40)等系統，分離效果都不好，本實驗中考察了甲醇：水(30:70)，乙腈：水(17:83)等流動相，但分離也不佳，峰形差，而乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)可使樣品中芍藥苷峰與雜質峰完全分離。參照《中國藥典》2005年一部白芍，逍遙散等含量測定項下芍藥苷的參數及本試驗結果，規定芍藥苷峰的理論塔板數不低于2000。

4．2結果評價實驗結果表明，本實驗所采用測定方法測定芍藥苷，重現性良好，回收率高，且在該色譜條件下，芍藥苷進樣精密度良好，故該法結論可靠，可作為白帶丸的質量控制標準。