蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2與接頭蛋白Gab2在子宮內膜癌中的表達及意義

李美艷，盧靜，韓新彥，王菊榮

(邯鄲市中心醫院婦一科1、生殖醫學科2，河北邯鄲056008)

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2與接頭蛋白Gab2在子宮內膜癌中的表達及意義

李美艷1，盧靜2，韓新彥1，王菊榮1

(邯鄲市中心醫院婦一科1、生殖醫學科2，河北邯鄲056008)

目的探討蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2與接頭蛋白Gab2在子宮內膜癌中的表達、兩者的相關性及其與預后的關系。方法采用免疫組化SP法，檢測50例子宮內膜癌（癌組）、50例子宮內膜不典型增生（癌前病變組）及30例正常增殖期子宮內膜(正常組)中Shp2蛋白和Gab2蛋白的表達水平，分析其表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系，及二者的相關性。結果正常組、癌前病變組和癌組的子宮內膜組織中，Shp2蛋白的陽性表達率分別為0、12.00%、64.00%，Gab2蛋白的陽性表達率分別為3.33%、38.00%、58.00%，且組間比較均有統計學意義(P＜0.05)；Shp2蛋白及Gab2蛋白的陽性表達率在肌層浸潤深度及有無淋巴結轉移組中比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)；多因素生存分析顯示：Shp2蛋白陽性表達者的總生存率明顯下降，Gab2蛋白陽性表達者總生存率也明顯下降；子宮內膜癌中Shp2蛋白的表達與Gab2蛋白的表達呈正相關(r=0.368，P＜0.05)。結論Shp2蛋白及Gab2蛋白的表達可能參與了子宮內膜癌的發生、發展、浸潤等過程，有可能作為判斷子宮內膜癌預后的新指標。

子宮內膜癌；Shp2蛋白；Gab2蛋白；免疫組織化學

細胞的生物學活動中，蛋白質磷酸化與去磷酸化在信號轉導機制中發揮著重要作用，腫瘤的發生、發展與磷酸化水平異常相關。Shp2(Protein tyrosine phosphatase 2)蛋白是第1個被確定的具有磷酸酶活性的促腫瘤蛋白，研究發現，Shp2蛋白在肺癌、結腸癌和乳腺癌等多種實體瘤的發生、發展中起著重要作用[1-2]。Gab2蛋白可介導多種細胞外刺激引起的信號傳遞，在細胞增殖、分化、凋亡及遷移等生理過程中發揮重要作用，而Shp2蛋白和Gab2蛋白在子宮內膜癌中的表達情況，國內外鮮見報道。本文采用免疫組化技術探討子宮內膜癌中Shp2蛋白和Gab2蛋白的表達及與子宮內膜癌臨床病理特征的關系，旨在為子宮內膜癌臨床治療指導及預后評估提供有價值的預測指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2004年6月至2014年6月在邯鄲市中心醫院住院治療的患者130例，年齡30～75歲，平均49.56歲，中位年齡49.00歲，95%CI(44.50，54.20)歲。其中Ⅰ型子宮內膜癌50例(癌組)，不典型增生的子宮內膜50例(癌前病變組)，正常增殖期子宮內膜30例(正常組)，正常增殖期子宮內膜及不典型增生的子宮內膜均來自于診刮及手術切除子宮的內膜標本。子宮內膜癌手術病理分期按2009年FIGO標準進行分類，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例；高分化(G1)22例，中分化(G2)18例，低分化(G3)10例；肌層浸潤深度＜1/2肌層31例，≥1/2肌層19例；伴有淋巴轉移的10例，無淋巴轉移的40例。所有患者術前均未接受放療、化療或激素治療，無手術禁忌，進行書信、電話、騰訊QQ和微信隨訪，隨訪時間截止到2014年6月，臨床資料完整。由兩位病理醫生復習病理切片，并選取包含腫瘤組織的石蠟標本備用。

1.2 實驗方法采用免疫組織化學SP法，染色步驟按試劑盒說明書嚴格操作。

1.3 試劑Shp2蛋白為兔抗人多克隆抗體與Gab2蛋白為兔抗人單克隆抗體(英國Abcam公司)，SP廣譜超敏試劑盒、PBS緩沖液、DAB酶底物顯色劑均購自福州邁新生物技術公司。

1.4 結果判定標準雙盲狀態下對免疫組化染色結果進行評價，每張切片隨機觀察5個高倍視野，每個視野計數100個細胞，陽性判斷參照文獻[3]。

1.5 統計學方法應用IBM SPSS19.0統計軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗和Fisher精確概率法；兩者相關性用非參數Spearman等級相關分析，應用Cox比例風險模型進行多因素生存分析，并繪制生存曲線，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Shp2蛋白、Gab2蛋白在子宮內膜組織中的表達Shp2蛋白和Gab2蛋白均定于細胞質，陽性以細胞質中出現棕黃色或棕褐色顆粒(見圖1、圖2)，陰性對照為無著色(見圖3)。由Shp2蛋白和Gab2蛋白的組織表達(見表1)可見，在子宮內膜癌中Shp2蛋白、Gab2蛋白的陽性表達率均顯著高于正常組和癌前病變組，且組間比較均有統計學意義(Shp2：χ2=47.482，P=0.00＜0.05；Gab2：χ2=14.268，P=0.00＜0.05)。

表1 Shp2蛋白和Gab2蛋白在不同內膜組織中的表達(例)

圖1 Shp2蛋白在子宮內膜癌中的表達(×200)；圖2Gab2蛋白在子宮內膜癌中的表達(×400)；圖3Shp2蛋白、Gab2蛋白在子宮內膜癌中陰性表達(×200)

2.2 Shp2蛋白、Gab2蛋白與子宮內膜癌臨床參數的關系Shp2蛋白的表達與手術病理分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移情況有關(χ2值分別為8.315、6.376、 6.272，P＜0.05)，Gab2蛋白的表達與肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關(χ2值分別為8.642、5.255，P＜0.05)，二者均與年齡無關(χ2值分別為0.643、0.384，P＞0.05)，見表2。

表2 Shp2蛋白和Gab2蛋白與子宮內膜癌臨床參數的關系

2.3 Shp2蛋白和Gab2蛋白在子宮內膜癌中表達的關系Shp2蛋白和Gab2蛋白的表達呈正相關(r= 0.368，P=0.009＜0.05)，見表3。

2.4 Shp2蛋白及Gab2蛋白與子宮內膜癌預后的關系

表3 Shp2蛋白和Gab2蛋白表達的關系(例)

2.4.1 Shp2蛋白表達與子宮內膜癌預后的關系采用逐步回歸法對Shp2蛋白表達進行多因素Cox模型分析，配合模型時，進入模型和從模型中剔除變量的水準分別定為0.05和0.06，回歸分析后建立回歸方程，篩選出變量為X5(有無淋巴結轉移)：偏回歸系數B為1.793；偏回歸系數的標準誤SE為0.812；Wald值為4.874；P值為0.027；相對危險度估計Exp（B）為6.006；95%置信區間下限為1.223、上限為29.499；生存曲線見圖4。

2.4.2 Gab2蛋白表達與子宮內膜癌預后的關系采用逐步回歸法對Gab2蛋白表達進行多因素Cox模型分析，配合模型時，進入模型和從模型中剔除變量的水準分別定為0.05和0.06，回歸分析后建立回歸方程中的變量如表4；生存曲線見圖5。

表4 Gab2蛋白Cox模型分析

圖4 Shp2蛋白陽性和陰性患者生存率

圖5 Gab2蛋白陽性和陰性患者生存率

3 討論

Shp2蛋白由PTPN11基因編碼，屬于非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶家族的成員之一，是目前磷酸化酶中唯一已被證實的原癌基因，它通過調節多條信號轉導通路(如Ras/ERK通路，PI3K/Akt/mTOR等)，參與細胞的存活、遷移、粘附、細胞骨架形成等從而促進腫瘤的發生。研究發現，在乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌、宮頸癌等惡性腫瘤中均表現為高表達[4]。本實驗結果顯示：Shp2蛋白在正常子宮內膜，不典型增生子宮內膜，子宮內膜癌組中陽性表達率分別為：0、12.00%、64.00%，表現為逐漸增高趨勢，且組間比較差異有統計學意義。通過分析Shp2蛋白的表達與臨床參數的關系發現，Shp2蛋白和子宮內膜癌的FIGO分期、肌層浸潤深度、淋巴結轉移均密切相關，多因素Cox模型生存分析顯示，Shp2蛋白的陽性表達與淋巴結轉移密切相關。從生存曲線中看出，Shp2蛋白陽性者總生存率降低，可見與預后相關的因素主要為淋巴結轉移情況，提示Shp2蛋白可能參與了子宮內膜癌的轉移、浸潤等過程，也進一步證實了PTPN11/Shp2可能為一癌基因有關，這和王化淳等[5]在口腔鱗狀細胞癌中的研究報道一致。這為臨床檢測Shp2蛋白表達水平預測子宮內膜癌患者的轉移情況進而判斷患者的預后情況提供理論依據。

Gab2蛋白屬于Gabs家族蛋白，基因定位于11q14.1，蛋白分子量97～100 kD，Gab2蛋白結構中缺少催化區域，不能直接引起磷酸化反應，但pH結構域結合的位點使其能招募多種接頭蛋白及酶類分子，完成信號傳遞，在細胞增殖、分化、凋亡及遷移等生理過程中發揮重要作用。Gab2蛋白通過與ErbB2/Neu等原癌基因共同協作參與原位腫瘤到侵襲性腫瘤的轉化過程，促進了腫瘤的轉移[6]。研究表明，Gab2是一種錨定蛋白，能夠介導Shp2蛋白在細胞中的定位，調控Shp2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的發揮[7]。Brummer等[8]在乳腺癌相關研究中證實，Shp2蛋白通過與Gab2蛋白結合，參與PI3K/Akt途徑使人類表皮生長因子受體-2(HER-2)過表達，促進癌細胞凋亡抑制、上皮間質轉化等惡性生物學行為進展。研究發現Gab2蛋白在人類白血病和卵巢癌中高表達[9-10]。本研究結果顯示，Gab2蛋白的陽性表達率亦是逐漸遞增的趨勢(3.33%、38.00%、58.00%)，表達情況與肌層浸潤深度、淋巴結轉移有關，從生存曲線中可見Gab2蛋白陽性的患者生存率也逐漸下降，且對二者相關性分析顯示存在正相關(r=0.368，P=0.009＜0.05)，本實驗與Brummer等[8]研究結果一致，可以推測Gab2蛋白與Shp2蛋白共同參與了子宮內膜癌的發展、浸潤、轉移的過程，有助于臨床醫師通過Shp2蛋白和Gab2蛋白的表達來判斷患者的預后情況。

總之，Shp2蛋白陽性和Gab2蛋白陽性者，患者的生存率降低，因此Shp2蛋白和Gab2蛋白可能為子宮內膜癌的臨床診斷、預后判斷、監測和基因治療提供新的靶點。

[1]Yu SJ,Yu JK,Ge WT,et al.SPARCL1,Shp2,MSH2,E-cadherin, p53,ADCY-2 and MAPK are prognosis-related in colorectal cancer [J].World J Gastroenterol,2011,17(15):2028-2036.

[2]Zhou X,Coad J,Ducatman B,et al.SHP2 is up-regulated in breast cancer cells and in infiltration ductal carcinoma of the breast,implying its involvement in breast oncogenesis[J].Histopathology,2008, 53(4):389-402.

[3]Bocanegra M,Bergamaschi A,Kim YH,et al.Focal amplification and oncologene dependency of Gab2 in breast cancer[J].Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[4]Muenst S,Obermann EC,Cao F,et al.Src homology phosphotyrosyl phosphatase-2 expression is an independent negative prognostic factor in human breast cancer[J].Histopathology,2013,63(1):74-82.

[5]王化淳,黃圣運,謝紅軍.蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在口腔鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義[J].山東大學學報,2014,52(2):82-89.

[6]Fleuren ED,O'Toolle S,Millar EK,et al.Overexpression of the oncogenic signal transducer Gab2 occurs early in breast cancer development[J].Int J Cancer,2010,127(6):1486-1492.

[7]王磊,秦錫虎,王旭芬,等.Shp2蛋白在乳腺癌中的表達及臨床意義[J].吉林醫學,2011,32(36):7692-7694.

[8]Brummer T,Schramek D,Hayes VM,et al.Increased proliferation and altered growth factor dependence of human mammary epithelial cells overexpressing the Gab2 docking protein[J].J Biol Chem, 2006,281(1):626-637.

[9]Lassmann S,Werner M,Waller CF,et al.Gab2 signaling in chronic mueloid leukemia cells confers resistance to multiple Brc-Abl inhibitors[J].Leukemia,2013,27(1):118-129.

[10]Wang Y,Sheng Q,Spillman MA.Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J].Oncogene,2012,31(20):2512-2520.

Expression and significance of protein tyrosine phosphatase Shp2 and adapter protein Gab2 in endometrialcarcinoma.

LI Mei-yan1,LU Jing2,HAN Xin-yan1,WANG Ju-rong1.The First Department of Gynaecology1,Department of Reproductive Medicine2,Handan Central Hospital,Handan 056008,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of protein tyrosine phosphatase 2(Shp2)and the adapter protein Gab2 in endometrial carcinoma,and to analyze the correlation between the two proteins as well as that between their expression and prognosis.MethodsThe expression levels of Shp2 protein and Gab2 protein were detected by immunohistochemical SP method in 50 patients of endometrial carcinoma(cancer group),50 patients of endometrial atypical hyperplasia(precancerous lesion group)and 30 subjects of normal proliferative phase endometrium(normal group). The correlation between the expression and the clinicopathological parameters of endometrial carcinoma were analyzed, as well as the correlation between the two proteins.ResultsThe positive expression rate of Shp2 protein was 0.00%, 12.00%,64.00%in normal group,precancerous lesion group,cancer group,respectively,and the positive expression of Gab2 protein was 3.33%,38.00%,58.00%,respectively,with statistically significant difference between the three groups (P＜0.05).The positive expression rate of Shp2 protein and Gab2 protein showed no statistically significant difference between groups of different muscle layer infiltration depth and the groups with or without lymph node metastasis(P＜0.05). Multivariate survival analysis showed that the total survival rate of patients with positive expression of Shp2 protein was decreased significantly,and the total survival rate of patients with positive expression of Gab2 protein was also significantly decreased.The expression of Shp2 protein was positively correlated with the expression of Gab2 protein in endometrial carcinoma(r=0.368,P＜0.05).ConclusionThe expression of Shp2 protein and Gab2 protein may be involved in the occurrence,development and infiltration process of endometrial carcinoma,what can be used as new prognostic indicators for evaluating the prognosis of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma;Shp2 protein;Gab2 protein;Immunohistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2016）01—0010—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.004

2015-03-13)

李美艷。E-mail：lmy-200602744@163.com