糖尿病婦女與健康婦女陰道乳桿菌菌群特征比較

【摘要】 目的 觀察糖尿病患者與健康婦女陰道內乳桿菌屬內乳桿菌分布種類，活菌數量以及產生過氧化氫（H2O2）能力的差異。

方法 檢查60例健康婦女和60例糖尿病婦女陰道乳桿菌的分布，測定陰道乳桿菌數量與產生H2O2的能力，鑒定陰道內乳桿菌種類。結果 健康婦女陰道內優勢乳桿菌是嗜酸乳桿菌(44.7％)與唾液乳桿菌(19.1％)；糖尿病婦女陰道內優勢乳桿菌是嗜酸乳桿菌(36.4％)與發酵乳桿菌(27.3％)。健康婦女陰道內乳桿菌檢出率(78.3%)、平均活菌數量對數值（8.35±1.29）和產H2O2乳酸菌比例(87.2%)均顯著高于糖尿病患者（分別為18.3%，5.90±1.14 和27.3%，P<0.01)。結論 糖尿病患者乳桿菌菌種分布與健康婦女不同，且其乳桿菌檢出率、平均活菌數量對數值和產生H2O2的能力較健康婦女均顯著下降，提示糖尿病婦女中預防陰道菌群失調，防止陰道感染應引起重視。

【關鍵詞】 糖尿病；乳桿菌；菌群失調

文章編號：1003-1383(2007)03-0263-02中圖分

類號：R 378.992文獻標識碼：A

乳桿菌是健康婦女陰道內最重要的優勢菌屬，是陰道抵抗感染的天然屏障［1－3］。有報道表明，糖尿病患者抵抗能力低下，常常發生包括陰道感染在內的各種感染［4］。糖尿病患者陰道感染除了血糖上升導致的全身易感性外，陰道局部的菌群失調是否也起到了一定的作用，是我們關心的問題。本研究通過檢測糖尿病患者和健康婦女陰道分泌物中的陰道乳桿菌，觀察健康婦女與糖尿病陰道內乳桿菌屬內各類型和亞種的變化規律，探討糖尿病陰道感染疾病的發病機制。

資料與方法

1.實驗材料

(1)病例與分組：標本來源選自2003年11月至2007年3月在我院婦產科門診患者，研究對象入選標準：①2周內無全身應用抗生素及陰道局部用藥史。②3天內無性生活史。糖尿病診斷由兩名醫師詢問糖尿病診斷時間、診斷醫院、用藥史及血糖控制情況，診斷醫院至少為縣級以上醫院，診斷標準參照美國糖尿病協會1997年提出的診斷標準，即癥狀+空腹血漿葡萄糖大于或等于7.0 mmol/L，或隨機血糖大于或等于11.1 mmol/L，或口服葡萄糖耐量試驗2 hPG大于或等于11.l mmol/L。健康婦女60例納入健康組，年齡20－47歲；糖尿病婦女60例納入糖尿病組，年齡24－45歲。兩組患者年齡，體重等一般情況無顯著性差異。

(2)試劑與器材：乳桿菌培養基(LBs)采用乳桿菌選擇性培養基；H2O2鑒定培養基為MRS瓊脂培養基中加入0.25 mg/ml四甲基聯苯胺(TMB)和過氧化物酶0.01 mg/ml；APICH50乳桿菌菌種鑒定反應板采用法國梅里埃公司產品。

2.實驗方法

(1)標本取材：用滅菌的特制不銹鋼長柄定量小勺，陰道后1/3處采集分泌物0.2 ml，插入含1.8 ml滅菌的L－半胱氨酸稀釋液中，盡快10倍系列稀釋至10-6，分別接種于LBs，培養48 h。從可計數稀釋度內，調取形態、菌落進行鑒定，計數活菌數量。乳桿菌確定標準：①革蘭染色陽性，無芽孢，細長彎曲或呈球桿狀、桿狀，單個或雙鏈狀，無動力；②微需氧，在5%－10%CO2環境下能生長，但在厭氧環境下生長更好；③生長最適溫度為(30－40)℃，最適pH5.6－6.2；④觸酶陰性，不產色素；⑤分解葡萄糖。

(2)菌種鑒定以及產H2O2鑒定：①菌種鑒定：經過染色鏡檢、氧化酶、觸酶陰性等初步鑒定所選菌是否為陰道乳桿菌屬，然后將選出的乳桿菌接種到APICH50乳桿菌鑒定系統中，按說明書進行操作。②H2O2鑒定：將選出的乳桿菌接種到H2O2鑒定培養基，當細菌產生H2O2時，過氧化物酶氧化TMB，形成藍色菌落，證明產生H2O2陽性，記作LB(+)。

3.統計學方法 健康婦女與糖尿病婦女乳桿菌檢出率，乳桿菌H2O2陽性率以百分率表示，統計學分析采用卡方檢驗(前者采用Pearson Chi－Square，后者采用Likelihood Ratio)。活菌數量對數值用均數±標準差表示，統計分析采用獨立樣本t檢驗，所有統計分析均使用SPSS11.0軟件包，以P<0.05作為有顯著性差異。乳桿菌屬內菌株種類變化進行描述性分析。

結果

1.陰道內乳桿菌屬內菌株種類變化 健康婦女陰道內分離出的47例乳桿菌菌株種類分布如下：嗜酸乳桿菌21例(44.7%)、唾液乳桿菌9例(19.1%)、德氏乳桿菌4例(8.5%)、食果糖乳桿菌3例(6.4%)、發酵乳桿菌3例(6.4%)、彎曲乳桿菌2例(4.3%)、賴氏乳桿菌2例(4.3%)、食淀粉乳桿菌2例(4.3%)與干酪乳桿菌1例(2.1%)等，分離率以嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌為高；糖尿病婦女分離出的11例乳桿菌菌株種類分布如下：嗜酸乳桿菌4例(36.4%)、發酵乳桿菌3例 (27.3%)、彎曲乳桿菌2例(18.2%)、德氏乳桿菌1例(9.1%)和干酪乳桿菌1例 (9.1%)，分離率以嗜酸乳桿菌與發酵乳桿菌稍微高，未分離到唾液乳桿菌、賴氏乳桿菌、食

作者簡介：何英琳(1971-)，女，廣東省海豐縣人，婦產科主治醫師。

淀粉乳桿菌與食果糖乳桿菌。2.健康婦女與糖尿病婦女陰道內乳桿菌檢出率與活菌數量比較 60例健康婦女中47例陰道內分離出乳桿菌，檢出率78.3%，60例糖尿病患者中11例陰道內分離出乳桿菌，檢出率18.3%，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。47例分離出乳桿菌的健康婦女平均活菌數量對數值(Log10n/ml)8.35±1.29，11例分離出乳桿菌糖尿病婦女平均活菌數量對數值(Logl0n/ml)5.90±1.14，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)，見表1。

3.健康婦女與糖尿病婦女陰道內LB(+)乳桿菌比較 60例健康婦女47例分離到乳桿菌，其中分離到LB(+)乳桿菌41例；60例糖尿病婦女11例分離到乳桿菌，其中分離到LB(+)乳桿菌3例，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)，見表1。

討論

乳桿菌是健康婦女陰道內最重要的優勢菌屬，乳桿菌通過產生乳酸，維持酸性環境，以及產生H2O2、菌素等多種抑菌物質，抑制微生物生長。如果陰道內正常菌群數量減少，代之以病原菌，如陰道加德納菌、厭氧菌、類桿菌和支原體等，就會造成細菌性陰道病。陰道內乳桿菌屬在種類、數量上與功能的變化，影響陰道的生理、病理變化程度不同，會加大陰道對感染疾病的易感性［2，3］。不少報道表明，糖尿病與陰道感染關系密切。在糖尿病婦女中，無論是細菌性陰道炎，還是白色念珠菌的感染率，都較健康婦女大為增高。而且感染率隨血糖水平升高有上升的趨勢［5，6］。

糖尿病與感染密切相關的機制很多，包括全身免疫能力的降低和局部環境的改變。我們比較了糖尿病與健康婦女陰道內乳桿菌屬內菌株種類，乳桿菌陽性率、活菌數量與乳桿菌產H2O2 能力，發現：糖尿病婦女陰道內乳桿菌菌群分布與健康婦女有一定差異，健康婦女以嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌為主，而糖尿病婦女以嗜酸乳桿菌與食果糖乳桿菌為主。糖尿病婦女比健康婦女陰道內乳桿菌陽性率，活菌數量以及乳桿菌產H2O2 能力都要低。糖尿病婦女陰道乳桿菌菌群分布特征表明，其陰道防御體系功能低下，容易造成陰道感染。說明在糖尿病患者婦女診療過程中，保持陰道微生態系統，保持陰道菌群失調也應該引起重視。如合理選用抗生素，減少陰道微生態環境的損害，或者采用生物工程辦法，維持陰道局部菌群平衡，預防感染發生等。

糖尿病婦女與健康婦女陰道內乳桿菌菌群分布差異大，乳桿菌陽性率降低，活菌數量以及乳桿菌產H2O2 能力下降的機制包括：①陰道上皮高血糖狀態，糖的無氧酵解功能增強，乳酸以及血酮水平增高，陰道內酸性環境增強，造成陰道乳桿菌菌群分布變化［7］；②糖尿病患者免容易發生感染性疾病，使用廣譜抗生素，改變陰道內微生物之間的相互抑制關系［8］；③糖尿病患者免疫防御功能降低，中性粒細胞趨化、吞噬和殺菌能力降低，糾正菌群失調能力降低［7，9］。

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