黃精炭疽病病原鑒定及藥劑篩選

桑維鈞　宋寶安　練啟仙　李小霞　熊繼文　曾令祥

摘要根據病原菌形態特征和致病性等特點，黃精炭疽病的病原菌鑒定為半知菌亞門刺盤孢屬的Colletotrichumclrczl'lan~(Perk．)Vogl。供試的5種殺菌劑對病原菌菌絲的抑制作用結果表明，64％(口惡)霜·錳鋅WP、75％代森錳鋅WP濃度為800μg／mL以上時抑菌率達100％；90％三乙膦酸鋁WP濃度為1125μg／mL時的抑菌率為96．3％，15％三唑酮WP濃度為188μg/mL時抑菌率為85．2％，69％烯酰嗎啉WP濃度為l 380μg/mL時抑菌率為51．9％，863．g／mL時抑菌率僅35．2％。

關鍵詞黃精炭疽病；病原鑒定；藥劑篩選

中圖分類號S 435．672

近年來貴州省重點發展的地產中藥材主要有石斛、半夏、天冬、黃精、淫羊藿、草烏、白術、白芍、玉竹、吳茱萸等。黃精(Polygonatumsibiricum Red．)是百合科(Liliaceae)多年生草本植物，在貴州俗稱“老虎姜”，興義稱為“觀音臺”，解放前均為自產自銷，由于品質優良，解放后遠銷江蘇、浙江等地。黃精具有提高免疫力、降血脂、降血糖、抗菌、抗腫瘤、抗病毒等作用，在研制新藥和開發保健品方面有廣泛發展前景。由于野生黃精產量低，近年來又被大量采挖，不能滿足市場需要，目前在貴州鳳崗、湄潭、興義、大方等地有大面積栽培。然而，隨著栽培面積的不斷增加，病蟲害發生逐年加重。調查發現，炭疽病是黃精上的一種重要病害，主要危害葉片及莖桿，病重時造成全株枯死，地下部分腐爛，嚴重影響了黃精的生產，但對該病的研究尚無系統的報道。2003—2005年，從基地采集病株標樣分離、鑒定，并進行了殺菌劑的室內篩選試驗，現將結果報道如下。

1材料與方法

1．1病害發生特點調查

調查并采集貴州省鳳崗縣、湄潭縣、大方縣、興義市等中藥材基地的黃精炭疽病的典型癥狀標本，記錄發病特點和病株率、病葉率等。

1．2病原菌鑒定

1．2．1分離培養

在對自然發病組織上的病菌鏡檢觀察的基礎上進行組織分離。剪取病健交界處約5 mm的組織，先在70％的酒精中浸幾秒鐘，再用0．1％的升汞滅菌2min，用無菌水洗3次，然后置于PDA上培養，長出菌絲后，取菌落邊緣菌絲再轉置PDA上培養。在顯微鏡下觀察菌絲、產孢結構等形態，并測其大小。

1．2．2致病性測定

將分離純化的病菌配成懸浮液，用噴霧法接種黃精新葉，接種后用塑料薄膜保濕48h，用無菌水作為對照，定期觀察發病情況。發病后從病組織上取子實體鏡檢，描述病原菌形態特征，測其大小。將自然發病與接種發病的病原菌進行形態比較，參考有關文獻確定病原菌的種類。

1．3藥劑對病菌菌絲生長的抑制作用

1．3．1供試藥劑

供試藥劑有90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑(fos—etyl-aluminium，夏邑華泰化工有限公司)；69％烯酰嗎啉可濕性粉劑(dimethomorph，青島東生藥業公司)；64％(口惡)霜·錳鋅可濕性粉劑(hymexazol+man—cozeb，西安近代農藥科技股份有限公司)；75％代森錳鋅可濕性粉劑(mancozeb，杜邦中國有限公司)；15％三唑酮可濕性粉劑(triadimefon，四川國光農化有限公司)。

1．3．2抑菌試驗

將待測菌株接種在PDA平板上25℃恒溫培養4 d，用90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑，69％烯酰嗎啉可濕性粉劑，64％霜·錳鋅可濕性粉劑，15％三唑酮可濕性粉劑，75％代森猛鋅可濕性粉劑配制成不同濃度PDA平板，將已培養好的病菌用打孔器的把菌落打成直徑5 mm的菌餅，然后移到含藥PDA平板上，另設清水空白對照。每個處理重復3次，恒溫培養后，測量菌落直徑，計算抑菌率。計算公式如下：

抑菌率＝[(對照菌落直徑一5)－(處理菌落直徑一5)]／(對照菌落直徑一5)X100％。

2結果與分析

2．1危害特點

調查發現，黃精炭疽病主要危害葉片和莖桿，發病輕的田塊，株發病率達13％，葉發病率達20％～30％，發病嚴重的田塊，株發病率達20％，葉發病率達50％以上。該病在葉片上或葉尖或葉緣產生圓形、半圓形、橢圓形或不規則形病斑；直徑為0．5～2．0 cm，多數為1 cm左右。病斑初期褪綠，后期整個病斑中央變為黃白色，病斑外圍呈黃褐色，濕度大時，病斑擴展迅速，嚴重時造成葉片大量枯死。莖部受害后形成褐色稍凹陷的病斑，其上產生大量黑色小點，后期莖桿枯死。

2．2病原菌鑒定

2．2．1病原菌的致病性測定

試驗結果表明，接種發病植株的癥狀與田間植株癥狀相同；取病部組織分離，在PDA上培養，鏡檢病原菌，其分生孢子盤和分生孢子的形態特征和田間病株上的病原菌一致。

2．2．2病原菌的形態及鑒定

鏡檢病原菌，分生孢子盤為淺褐色，直徑170μm左右；產生大量剛毛，剛毛深褐色，具隔，表面光滑，頂端尖，長為90—295 pm，放射狀排列于分生孢子盤上；分生孢子梗棒形或圓柱形，密生于分生孢子盤上；分生孢子鐮刀形，無色，單胞，兩端略尖，大小為(17．3～27．6)pmX(2．4～3．6)pm，內含顆粒狀物質，有油球。純化的菌株在PDA上，菌落邊緣整齊，菌絲體較發達，毛絨狀，初期白色，后期基質變為黑褐色。根據病原菌的形態特征、培養特性和致病性測定結果，參考有關文獻，確定引起該病的病原菌為Colletotrichumcircinans(Berk．)Vogl．。

2．3藥劑對病菌菌絲生長的抑制作用

由表1可以看出，對黃精炭疽病菌菌絲生長有較強抑制作用的殺菌劑有64％(口惡)霜·錳鋅可濕性粉劑和75％代森猛鋅可濕性粉劑，在兩種濃度下對病菌的抑菌率均達100％；90％三乙膦酸鋁可濕性粉劑為85％以上，15％三唑酮可濕性粉劑和69％烯酰嗎啉的抑菌率相對較低。

3結論與討論

由于省內各藥材基地的中藥材栽培大都是單一品種成片種植，隨著栽培時間的延長，一旦有侵染性病害發生，條件具備時往往會逐年加重，造成大面積感病。因此，針對我省黃精炭疽病的發生特點，在進行殺菌劑的室內篩選試驗的基礎上，有待在病區進行防治試驗以驗證試驗結果，并結合其他防治技術的應用，提前預防，以減輕該病的危害。