定點突變內皮抑素Zn²⁺的結合位點及突變基因的克隆表達

摘要：從人胚肝組織中提取總RNA，以逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法獲得人內皮抑素編碼序列，采用定點突變技術將His2和His4雙突變為Leu2和Val4．將突變基因eDNA插入含有T7啟動子的質粒pET-28b中構建表達質粒pMendo，轉化大腸桿菌BL21(DE3)，篩選表達菌株B121-Mute，表達菌株經IPTC誘導后以包涵體方式產生大量內皮抑素突變蛋白。 SDS-PAGE分析表明，表達的重組蛋白占菌株可溶性蛋白質的30％。復性、純化的內皮抑素突變蛋白純度達到98％，失去抑制人臍靜脈內皮細胞增殖的活性。

關鍵詞：內皮抑素；克??；突變；大腸桿菌

中圖分類號：Q784

文獻標識碼：A

文章編號：1671—5489(2005)01-0106-06