針灸"足三里""關(guān)元"穴對陽虛大鼠免疫功能影響的比較研究

陳雄華　劉又香等

(湖北中醫(yī)學(xué)院針灸骨傷系,武漢430061)

摘要采用針刺、艾灸、針加灸不同的治療方法,選用"足三里"、"關(guān)元"兩個(gè)強(qiáng)壯穴位,選擇介導(dǎo)機(jī)體免疫的T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞為指標(biāo),以實(shí)驗(yàn)性"陽虛"大鼠為受試對象,對不同針灸療法、不同穴位進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明:針灸可調(diào)節(jié)機(jī)體低下的免疫功能,且針加灸的作用優(yōu)于單純的針或灸的治療;"足三里"穴的作用優(yōu)于"關(guān)元"穴。

主題詞陽虛/針灸療法陽虛/免疫學(xué)免疫系統(tǒng)/針灸效應(yīng)穴,足三里穴,關(guān)元

本項(xiàng)研究從"證"這一中醫(yī)整體思維出發(fā),選擇具有"免疫監(jiān)視"性的免疫指標(biāo)(T淋巴細(xì)胞亞群、體外抗體形成細(xì)胞)作為觀察指標(biāo),進(jìn)行針刺、艾灸、針加灸不同治療方法及"足三里""關(guān)元"兩個(gè)強(qiáng)壯穴位的比較研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wister大鼠80只,6～7周齡,200～250 g,雌雄兼用。同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供。

1.2主要藥品、試劑及工作液ゴ姿崆饣潑尼松懸液(AHP):原液125 mg/5 ml,(江蘇制藥廠產(chǎn)品);APAAP法免疫組化試劑盒(T-Subset-Rit)、淋巴細(xì)胞分層液(Ficoll-Urographin)(北京邦定泰克生物技術(shù)有限公司提供);5%和15%新鮮綿羊紅血球(SEBC)(同濟(jì)醫(yī)大免疫學(xué)教研室提供);豚鼠新鮮血清-補(bǔ)體、1%肝素、pH 7.2 Hanks液、磷酸鹽緩沖液等自行配制。

1.3主要儀器設(shè)備Olympus生物顯微鏡,國營華東電子管廠產(chǎn)酶標(biāo)儀,北京產(chǎn)水平離心機(jī),Sony恒溫培養(yǎng)箱,低溫電冰箱等。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1"陽虛"大鼠動(dòng)物模型的建立^[1]Wistar大鼠每日每鼠大腿肌肉注射AHP 3 mg/100 g體重,連續(xù)5天。大鼠出現(xiàn)拱背、蜷曲、肢尾冷、擠臥在一起、神疲,反應(yīng)遲鈍、被毛疏松、失去光澤、消瘦、少食等腰膝酸軟(游泳存活時(shí)間縮短)畏寒肢冷、精神不振、脫毛虛損狀。根據(jù)中醫(yī)陽虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)^[2],類似"陽虛"狀態(tài)。

1.4.2分組未造模前從80只大鼠中,隨機(jī)抽取10只作為正常生理組(A組)。余70只造模成功后,隨機(jī)分為7個(gè)組,每組10只。分別為:模型對照組(B組),針刺"關(guān)元"組(C組)、艾灸"關(guān)元"組(D組)、針刺"足三里"組(E組)、艾灸"足三里"組(F組)、針灸"關(guān)元"組(G組)、針灸"足三里"組(H組)。

1.4.3觀察指標(biāo)及檢測方法T淋巴細(xì)胞亞群:APAAP法即堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶橋聯(lián)免疫酶染色法^[3]。此法目前已廣泛應(yīng)用于淋巴細(xì)胞分化抗原的分析研究。其特點(diǎn)是將第一抗體--小鼠抗大鼠T亞群單克隆抗體與待測抗原結(jié)合,以第二抗體--羊抗鼠IgG二抗起橋抗體作用,即其中一個(gè)Fab段連接第一抗體,另一個(gè)Fab段連接APAAP復(fù)合物,再通過復(fù)合物中的堿性磷酸酶催化其底物顯色來顯示抗原的存在。其法的關(guān)鍵是外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分離:采血前大鼠空腹12 h后摘眼球采血。取肝素0.2 ml抗凝血2 ml,用PBS稀釋3倍,加入到含有3 ml淋巴細(xì)胞分離液的試管上層,血液沿管壁緩緩加入,使兩液間保持清晰界面。離心(2000 r/min)15 min。吸取血漿和分離液之間的單個(gè)核細(xì)胞層,加5倍PBS混勻,離心(1000 r/min)5 min,去掉上清沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。體外抗體形成細(xì)胞[3]