利福霉素是Sensi·P等人于1957年首次從地中海諾卡氏菌發酵液中分離出的一類抗生素,其最顯著的生物活性是對革蘭氏陰性細菌和分枝細菌有抑制作用,其半合成產物之一的利福平是治療結核病的口服廣譜抗生素。
氣功在醫療保健、植物生長等方面的杰出作用已有很多報導,華北制藥廠還應用智能氣功處理潔霉素菌種提高了產量。我們用智能氣功處理利福霉素產生菌,并與紫外線誘變作用相比較,對氣功處理機制進行初步探討。
材料與方法
一、出發菌株1074-38
系浙江新昌制藥廠生產菌株。
二、培養基
1.斜面培養基:主要成份為蔗糖、蛋白胨等。
2.種子培養基:主要成份為葡萄糖、蛋白胨、豆餅粉等。
3.發酵培養基:主要成份為葡萄糖、魚粉、蛋白胨、豆餅粉等。
4.分離培養基:同斜面培養基。
三、培養條件
1.斜面種子:27℃,6天。
2.平皿培養:27℃,11~12天。
3.搖瓶種子:27℃,46~48小時,旋轉式搖床,220轉/分。
4.搖瓶分酵:接種量8%,26-28℃,144小時,旋轉式搖床,220轉/分。
四、誘變因素和處理方法
1.誘變因素為紫外線:波長2537A,功率30W。處理時將菌懸液置紫外燈下30cm處照一定時間,照射時伴以磁力攪拌。
2.處理因素為智能氣功:
將菌懸液交發功人處理一定時間。
3.誘變或處理后的菌懸液稀釋到10-5涂布于平皿培養。
五、篩選方法
常規搖瓶法。二級發酵。
六、測定方法
效價測定:按利福霉素SV化學效價測定法測定。721型分光光度計。455nm波長。
實驗結果
一、紫外線誘變
二、出發菌株情況
上表效價的明顯波動以及斜面菌絲顏色、光澤的參差不齊,說明這些菌種已有相當程度的退化。
三、智能氣功處理
四、罐上試驗
智能氣功選育出的菌種已開始應用于生產,發酵罐體積30噸,初步結果如下:
討 論
1.據報道,利福霉素種是抗噬菌體突變株,突變后伴隨著失去形成氣生菌絲和孢子的能力。該菌種屬于地中海諾卡氏菌,諾卡氏菌的特點是在培養15小時至4天內,菌絲體產生橫隔膜,分枝的菌絲體突然全部斷裂成長短近于一致的桿狀或球狀體或帶杈的桿狀體。因此實驗時處理的是其菌絲片斷懸浮液。
2.紫外線誘變時間與致死率之間存在著正相關性,誘變時間提高到一定程度能殺死所有菌絲片斷。誘變時間與各菌落效價分布之間有一種似鐘形曲線的關系,100秒左右的照射能使正向突變達到最高。
3.與紫外線相比,智能氣功處理有兩個明顯的獨特之處。一個是其致死率并不隨處理時間的增加而提高,而是在50%左右波動。另一個是其對菌懸液中低產量部分殺死更多,達到\"濃縮高單位\"的效應,而且正向突變率的分布顯示出向處理時間延長方面移動的上升趨勢。
4.許多菌種都已經過紫外線多次誘變,相應的抗性往往不可避免,以致繼續使用紫外線進行選育難以出現較大的突破。在這種情況下,用氣功處理或許不失為可行之道。
參考文獻
(1)張仲良等:東方氣功,1990340
(2)周家惠:國外藥學(抗生素分冊),1983(3):213
(3)武漢大學和復旦大學生物系微生物學教研室編:微生物學,67
(通聯:312500浙江新昌制藥廠 楊葉東)