SORT1在胃癌組織中的表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)的影響

中圖分類號(hào)：R735.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1000-503X（2025）03-0343-11

DOI：10.3881/j.issn.1000-503X.16238

Expression of SORT1 in Gastric Cancer Tissue and Its Effect on Gastric Cancer Cell Biology

XIAO Linyu’，DUAN Ting2，XIA Yongsheng3，CHEN Yue’，YAN Xingzhou’，HU Jianguo ^{4，5 1} Department of Rehabilitation， ² Departmentof EmergencyMedicine，DepartmentofGastrointestinal Surgery， ⁴ Clinical Laboratory ， （204號(hào) ⁵ Anhui Province Key Laboratory of Basic and Translational Research of Inflammation-Related Diseases， TheFirst Afiliated Hospital of Bengbu Medical University，Bengbu，Anhui 233OO4，China

Correspondingauthor：HUJianguo Tel：O552-3086013，E-mail：jghu9200@bbmc.edu.cn

ABSTRACT： Objective To investigate the expression of SORT1 in the gastric cancer tissue and analyze its relationship with clinical prognosis of patientsas wellas thepathwaysand mechanisms involved ingastric cancer progression.MethodsThe Gene Expresson Profiling Interaction Analysis database，Western blot，and immunohistochemistry were employed to predict and analyze the expression of SORT1 in the gastric cancer and the adjacent tissue.Theclinical case information of 109 patientswho underwent radical surgery for gastric cancer in theFirstAfiliated HospitalofBengbuMedical UniversityfromApril2015toApril2017wascollected toanalyze therelationshipof SORT1 with the clinicopathological parameters and prognosis of the patients.Cell proliferation was detected by the CCK-8 assay and colony formation assay，while cell migration and invasion were assessed by the scratch assay and Transwellassy，respectively. Western blot was employed to determine the expression of proteins related to epithelial-mesenchymal transition（EMT）in gastriccancercells，folowed by further analysison molecular mechanism through which SORT1 regulates EMT in gastric cancer cels.ResultsWestern blot and immunocytochemistry results showed that SORTl was highly expressed in the gastric cancer tissue （ P=0.003 ， Plt; 0.001），which was positively correlated with malignant progression of tumors（all Plt;0.05 ）.The KaplanMeier survival analysis revealed shortened postoperative survival periods for the patients with high expresion of SORT1（ Plt;0.001 ）.The Cox regression model indicated that SORT1 expression was an independent risk factor affecting the 5-year survival rate after surgery for gastric cancer patients（ Plt;0.001 ）.Up-regulation of SORT1 expression promoted the proliferation，migration，invasion，and EMT of gastric cancer cells（all Plt; 0.05），while down-regulation of SORT1 showed the opposite effects（all Plt;0.05 ）.Western blot results showed that high expression of SORT1 promoted the expression of β -catenin，cyclin D1，and c-Myc（all Plt; 0.05）.Moreover，in vitro use of the Wnt/ β - catenin pathway inhibitor（XAV939） effectively suppressed the EMT enhancement caused by high expression of SORT1 in gastric cancer cells （all Plt;0.05 ）.Conclusions SORT1 is highly expressed in gastric cancer and afects patients’postoperative survival periods.It is involved in the proliferation，migration，and invasion of gastric cancer celsand may promote the EMT of gastric cancer cells by activating the Wnt/ β -catenin pathway.

Key Words：gastric cancer；SORT1；prognosis；epithelial-mesenchymal transition； W_nt/β -cateninpathwayActaAcad Med Sin，2025，47（3）

胃癌是臨床上最常見(jiàn)的癌癥之一，也是導(dǎo)致全球癌癥死亡的主要原因[1-2]。盡管在胃癌的臨床治療方面已取得了一些進(jìn)展，但在提高患者術(shù)后生存率和改善預(yù)后方面仍面臨挑戰(zhàn)[3]。胃癌的預(yù)后較差，這主要與癌細(xì)胞的異常增殖、遷移及侵襲等惡性行為密切相關(guān)[4-5]。然而，癌細(xì)胞的惡性行為受到復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，因此探索有助于改善胃癌預(yù)后的分子靶點(diǎn)具有重要的臨床意義。SORT1是一種編碼分揀蛋白的基因，存在于人體的肝臟、乳腺和卵巢等器官，并參與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[6-7]。既往研究表明，SORT1在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常并影響其進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)SORT1不僅在結(jié)直腸癌細(xì)胞中高表達(dá)，而且與患者的預(yù)后不良相關(guān)[8]。此外，抑制SORT1的表達(dá)能夠有效抑制腫瘤的進(jìn)展。SORT1通過(guò)激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號(hào)通路促進(jìn)肝癌進(jìn)展，而下調(diào)其表達(dá)可抑制乳腺癌和卵巢癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[9-I1]。但目前關(guān)于 SORT1 在胃癌中的研究報(bào)道較少。因此，本研究旨在探究SORT1在胃癌中的表達(dá)情況，并分析其與胃癌患者預(yù)后的關(guān)聯(lián)性，從而評(píng)估其在臨床上的潛在應(yīng)用價(jià)值。

1材料和方法

1.1 材料

人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1、胃癌細(xì)胞系（HGC-27、MGC-803和SGC-7901）購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)。RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，CCK-8試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)股份有限公司，BCA蛋白定量試劑盒、ECL試劑盒購(gòu)自上海雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司，SORT1、GAPDH購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）相關(guān)蛋白E-鈣黏著蛋白（E-cadherin）、N-鈣黏著蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）以及 β -連環(huán)蛋白（ β -catenin）、細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、c-Myc購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，XAV939基質(zhì)膠購(gòu)自上海MedChemExpress公司，Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Corning公司。敲減、過(guò)表達(dá)及對(duì)照慢病毒載體委托上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司合成。

1.2 病例資料

納入2015年4月至2017年4月蚌埠醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的患者369例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病理診斷為原發(fā)性胃癌；（2）成功施行胃癌根治術(shù)；（3）術(shù)前均未接受過(guò)放療和化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)前接受放療和化療（ n=46 ）；（2）合并其他部位惡性腫瘤（ n=18 ）；（3）臨床資料不完整（ n= 80）；（4）成功實(shí)施胃癌根治術(shù)后5年內(nèi)因非胃癌因素死亡（ n=49 ）；（5）隨訪資料不完整（ n=67 ）。

通過(guò)電子檔案系統(tǒng)收集患者的年齡、性別、腫瘤最大直徑、腫瘤臨床分期等資料，并從病理科調(diào)取患者的胃癌及癌旁組織病理蠟塊；采用電話回訪明確患者的術(shù)后總生存期，隨訪截止時(shí)間至2022年4月，中位隨訪時(shí)間為60個(gè)月。本研究通過(guò)蚌埠醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審查編號(hào)：倫科批字［2021]第221號(hào)）。

1.3基因表達(dá)譜交互分析及Kaplan-MeierPlotter分析

在基因表達(dá)譜交互分析數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//gepia.cancer-pku.cn/）輸入靶基因，基于箱線圖的基因表達(dá)，選取癌癥基因組圖譜和基因型-組織表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)的樣本，對(duì)胃癌及癌旁組織中SORT1的差異表達(dá)進(jìn)行分析。通過(guò)Kaplan-MeierPlotter 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//kmplot.com/analysis/）評(píng)估基因SORT1（探針：212797_at）與胃癌患者總生存時(shí)間的關(guān)系。

1.4基因本體功能及京都基因與基因組百科全書富集分析

從cBioPortal數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.cbioportal.org/）中獲取與Sortilin相關(guān)的胃癌基因，并篩選出Plt;0.05 的基因。將這些基因?qū)隓avid數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/），選擇Homosapiens作為基因類型，進(jìn)行基因本體（geneontology，GO）功能分析和京都基因與基因組百科全書（Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes，KEGG）通路富集分析。采用微生信－在線生物信息學(xué)分析、可視化云平臺(tái)（https：//www.bioinformatics.com. cn/ ）生成條形圖以進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化。

1.5免疫組織化學(xué)染色

將患者胃癌及癌旁組織病理蠟塊制成 4μm 切片，置于 60^°C 烘箱中烤片，常規(guī)脫蠟后采用檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，加入一抗SORT1（1：2000） 4‰ 孵育過(guò)夜，再加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育30min ，PBS洗滌后進(jìn)行DAB顯色反應(yīng)，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，梯度脫水后以中性樹膠封片。采用PBS緩沖液代替一抗設(shè)置陰性對(duì)照。于光學(xué)顯微鏡下觀察拍照，并采用ImageJ軟件分析SORT1的相對(duì)積分光密度（integraloptical density，IOD）值。

1.6 細(xì)胞培養(yǎng)及分組

將所有細(xì)胞株培養(yǎng)于含 10% 胎牛血清和 1% 雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基中，待細(xì)胞密度生長(zhǎng)至 50% ～60% 時(shí)，分別轉(zhuǎn)染敲減對(duì)照（si-NC）慢病毒、敲減SORT1（si-SORT1）慢病毒、過(guò)表達(dá)對(duì)照（LV-NC）慢病毒、過(guò)表達(dá)SORT1（LV-SORT1）慢病毒，與正常對(duì)照于 37^qC 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后更換新鮮培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染 ^72h 后，使用熒光顯微鏡觀察感染效率，加人嘌呤霉素（ 1mg/L ）篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，篩選時(shí)間為 7d_o LV-SORT1組胃癌細(xì)胞饑餓培養(yǎng) 6h ，加入 Wnt 信號(hào)通路抑制劑XAV939（10 μmol/L）孵育細(xì)胞24h[12]，作為抑制劑（XAV939）組。

1. 7 Westernblot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平

收集胃癌組織、癌旁組織及各組細(xì)胞，加入RIPA裂解液提取總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。各組取 40μg 蛋白于SDS-PAGE凝膠中進(jìn)行電泳，將目的蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜上，經(jīng) 5% 脫脂牛奶室溫?fù)u床封閉¹h ，加入 1：2000 一抗SORT1、E-cadherin、N-cadher-in、Vimentin、 β -catenin、Cyclin D1、c-Myc、 β -actin和 GAPDH4^°C 孵育過(guò)夜，次日孵育相應(yīng)的過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，TBST洗滌后采用凝膠成像系統(tǒng)曝光采集圖片，并使用ImageJ軟件分析目的蛋白灰度值。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖

收集穩(wěn)定表達(dá)的各組細(xì)胞以每孔1000個(gè)細(xì)胞密度接種于96孔板中，分別在0、24、48、72、96、 120h 向每孔加人 10μL 的CCK-8溶液，于 37^°C 孵育 ¹h 采用酶標(biāo)儀在 450nm 處測(cè)量吸光度值。

1.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖

將消化后的各組胃癌細(xì)胞重懸于含 10% 胎牛血清的培養(yǎng)基中，以每孔500個(gè)細(xì)胞密度接種于6孔板中[13]，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 14d 。細(xì)胞經(jīng) 4% 多聚甲醛固定 15min ，洗滌后加入 0.1% 的結(jié)晶紫染液染色 30min ，采集圖片并統(tǒng)計(jì) gt;50 個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)。

1.10 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移

將各組細(xì)胞接種于6孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞完全融合，采用 200μL 移液器無(wú)菌槍頭在孔板中央畫一條垂直的豎線，PBS清洗2次，加入無(wú)血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng) 24h 后，每組選擇3個(gè)視野于顯微鏡下拍照觀察，計(jì)算細(xì)胞的遷移率。遷移率 Σ=Σ （ 0h 劃痕寬度 -24h 劃痕寬度） /0h 劃痕寬度 ×100% 。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。

1.11Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲

將基質(zhì)膠與預(yù)冷的無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)基按 1：8 的比例進(jìn)行稀釋， 60μL 基質(zhì)膠垂直加人Transwell小室的上室， 37^°C 孵育 ^3h 。將 200μL 含無(wú)血清 培養(yǎng)基的細(xì)胞懸液以 2×10⁴ 個(gè)/孔的密度接種于無(wú)基 質(zhì)膠和涂有Matrigengel基質(zhì)膠的上室，另將 500μL 含10% 胎牛血清的培養(yǎng)基加入下室，于 37^°C 、 5% CO₂ 環(huán)境下培養(yǎng) ^48h 后，采用 4% 多聚甲醛固定細(xì)胞30min ， 0.1% 結(jié)晶紫染色 30min 。在顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野進(jìn)行拍照，并進(jìn)行計(jì)數(shù)分析。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次取平均值。

1. 12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS27.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Tukey多重檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用 χ² 檢驗(yàn)。采用受試者工作特征（receiveroperatingcharacteristic，ROC）曲線計(jì)算約登指數(shù)，并將最大約登指數(shù)對(duì)應(yīng)的截?cái)嘀底鳛樽罴呀財(cái)嘀怠２捎肒aplan-Meier法繪制胃癌患者的生存曲線；采用Cox回歸模型分析胃癌患者預(yù)后的影響因素。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1SORT1在胃癌組織中的表達(dá)水平

通過(guò)基因表達(dá)譜交互分析數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織SORT1表達(dá)顯著高于正常組織（ Plt;0.05 ）（圖1A）。Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，與癌旁組織相比，SORT1在胃癌組織中呈高表達(dá)（ P=0.003 ）（圖1B、1C）。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，SORT1高表達(dá)于胃癌組織中（ Plt;0.001 ）（圖1D、1E）。

2.2SORT1與胃癌患者臨床參數(shù)的相關(guān)性

ROC曲線分析顯示，以SORT1相對(duì)表達(dá)量2.930為截?cái)嘀担s登指數(shù)為 56.34% ），將胃癌患者分為SORT1高表達(dá)組（ n=54 ）和低表達(dá)組（ n=55 ）。該曲線預(yù)測(cè)胃癌患者術(shù)后5年生存率的靈敏度為 84.91% ，特異度為 71.43% ，準(zhǔn)確度為0.818（ Plt;0.001 ）（圖2）。SORT1表達(dá)量與胃癌臨床病理學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，SORT1的高表達(dá)與癌胚抗原（carcinoembry-onic antigen，CEA）""（ P=0.002 ）、糖類抗原19-9（CA19-9）""（ P=0.001 ）、 T3～T4 期（ Plt; 0.001）和 N2～N3 期（ P=0.016 ）顯著相關(guān)（表1）。

Mr：相對(duì)分子質(zhì)量

A.基因表達(dá)譜交互分析數(shù)據(jù)庫(kù)分析SORT1的表達(dá)；B.Westem blot檢測(cè) SORT1蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)；C.蛋白相對(duì)表達(dá)量的定量分析；D.免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)SORT1的表達(dá)；E.相對(duì)積分光密度值的定量分析

圖1SORT1在胃癌組織中的表達(dá)

2.3胃癌組織中SORT1表達(dá)量與患者生存預(yù)后的相關(guān)性

Kaplan-MeierPlotter數(shù)據(jù)庫(kù)（ n=875 ）及Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，SORT1高表達(dá)組胃癌患者術(shù)后生存率均顯著低于低表達(dá)組（ P 均 lt;0.001 ）圖3）。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，CEA（ P= 0.021）、CA19-9（ P=0.037 ）、T分期（ P=0.038 ）、N分期（ P=0.032 ）以及SORT1表達(dá)量（ Plt; 0.001）是影響胃癌患者術(shù)后5年生存率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（表2）。

2.4SORT1表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響

Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1比較，胃癌HGC-27、MGC-803及SGC-7901細(xì)胞中SORT1蛋白表達(dá)水平均顯著升高，其中SGC-7901細(xì)胞的表達(dá)水平最高（ P 均 lt;0.001 ）（圖4A）。采用慢病毒轉(zhuǎn)染干預(yù)SGC-7901細(xì)胞中SORT1的表達(dá)，Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，LV-SORT1組SORT1的表達(dá)顯著升高（ P 均 lt;0.001 ）（圖4B），而si-SORT1組SORT1的表達(dá)顯著降低（ P 均 lt;0.001 ）（圖4C）。CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)SORT1可顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖（ Plt;0.001 ），而敲減SORT1可顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖（ Plt; 0.001）（圖4D、4E）。

圖2SORT1表達(dá)量對(duì)胃癌患者術(shù)后5年生存率的受試者工作特征曲線

表2胃癌患者術(shù)后總生存期的單因素和多因素分析

si-SORT1：SORT1敲減組；LV-SORT1：SORT1過(guò)表達(dá)組；與對(duì)照組比較， ^aPlt;0.05

A.Westem blot檢測(cè)正常胃黏膜上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞系中SORT1的表達(dá)水平及定量分析；B、C.Westem blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)（B）和敲減（C）SORT1后SGC-7901細(xì)胞中SORT1表達(dá)的變化及定量分析；D.CCK-8法檢測(cè)過(guò)表達(dá)和敲減 SORT1對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響；E.克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)和敲減 SORT1對(duì)SGC-7901細(xì)胞克隆的影響及定量分析

圖4SORT1表達(dá)對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

2.5SORT1表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響

細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，LV-SORT1組的SGC-7901細(xì)胞的遷移及侵襲能力顯著增強(qiáng)（ P=0.020 ， Plt;0.001 ， P=0.001 ），而敲減SORT1后，細(xì)胞的遷移及侵襲能力明顯受到抑制（ P=0.006 ， P=0.006 ， P=0.010 ）（圖5）。

2.6SORT1表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞EMT進(jìn)程的影響

Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，上調(diào)SORT1可抑制上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)（ P=0.048 ），促進(jìn)SGC-7901細(xì)胞間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin和Vi-mentin蛋白的表達(dá)（ P 均 lt;0.001 ）；而下調(diào)SORT1則結(jié)果相反（ Plt;0.001 ， P=0.030 ， P=0.019 ）（圖6）。

2.7 SORT1對(duì) Wnt 通路的調(diào)控作用

GO 和KEGG富集分析顯示，SORT1功能作用可能與 Wnt 通路相關(guān)（圖7A、7B）。與對(duì)照組比較，LV-SORT1組細(xì)胞 β -catenin、CyclinD1及c-Myc蛋白表達(dá)上調(diào)（ Plt;0.001 ， Plt;0.001 ， P=0.002 ），而si-SORT1組細(xì)胞 β -catenin、CyclinD1及 σ_c -Myc蛋白表達(dá)下調(diào)（ P=0.008 ， P=0.029 ， P=0.001 ）（圖7C）。與LV-SORT1組比較，加入 Wnt 通路抑制劑XAV939顯著抑制 β -catenin （ Plt;0.001 ）、CyclinD1 Plt;0.001 、c -Myc（ Plt;0.001 ）、N-cadherin（ Plt;0.001 ）和Vim-entin（ P=0.014 ）蛋白的表達(dá)，促進(jìn)E-cadherin蛋白的表達(dá)（ P=0.040 ）（圖7D、7E）。

A.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；B.Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力圖5SORT1表達(dá)對(duì)SGC-7901細(xì)胞遷移及侵襲的影響

E-cadherin：E-鈣黏著蛋白；N-cadherin：N-鈣黏著蛋白；Vimentin：波形蛋白圖6Westernblot檢測(cè)各組胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的表達(dá)水平

3討論

胃癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率均位居第2位的惡性腫瘤，其防治受到廣泛關(guān)注[14-15]。因此，積極尋找可用于評(píng)估胃癌患者遠(yuǎn)期生存率的生物標(biāo)志物至關(guān)重要，這對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。多項(xiàng)研究表明，SORT1具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，可通過(guò)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等影響腫瘤細(xì)胞的存活能力[16]。SORT1作為促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的輔助因子，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、結(jié)直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，并與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)[8-9，17-20]以上證據(jù)提示SORT1可能在胃癌進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，值得進(jìn)一步探索。

本研究首先通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)分析、Westernblot及免疫組織化學(xué)檢測(cè)，證實(shí)SORT1在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著升高。進(jìn)一步分析患者臨床資料發(fā)現(xiàn)，SORT1高表達(dá)與胃癌的惡性進(jìn)展呈顯著正相關(guān)。多因素分析結(jié)果顯示，SORT1的表達(dá)水平是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。上述結(jié)果初步表明SORT1與胃癌之間存在密切關(guān)聯(lián)，提示其可能通過(guò)多種生物學(xué)過(guò)程參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，但其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步闡明。

為探究SORT1影響胃癌患者預(yù)后的潛在機(jī)制，本研究在細(xì)胞水平驗(yàn)證了SORT1的生物學(xué)功能。既往研究顯示，SORT1在肝癌組織中呈高表達(dá)，可維持并促進(jìn)癌細(xì)胞的致瘤活性與病理進(jìn)程[11]；在結(jié)直腸癌中，SORT1可通過(guò)激活腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展[2I]。為深入探討SORT1是否參與胃癌細(xì)胞的惡性表型，本研究采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建了SORT1過(guò)表達(dá)及敲減的SGC-7901胃癌細(xì)胞模型。CCK-8法及克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示，SORT1過(guò)表達(dá)顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，SORT1過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。EMT是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在EMT過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞獲得侵襲性特征，能夠浸潤(rùn)周圍基質(zhì)，從而為腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境[2-23]。Westerm blot 結(jié)果顯示，SORT1過(guò)表達(dá)顯著誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT。因此，SORT1可能通過(guò)促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及EMT過(guò)程，加速胃癌惡性進(jìn)展，相關(guān)分子機(jī)制仍需深入探究。

基于GO功能及KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，SORT1可能通過(guò)調(diào)控 Wnt/β -catenin信號(hào)通路發(fā)揮作用。Wnt信號(hào)通路的經(jīng)典分支為 Wnt/β -catenin通路，其在進(jìn)化上高度保守，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化及組織穩(wěn)態(tài)等多種生理過(guò)程[24]。然而，該通路的異常激活可促進(jìn)腫瘤發(fā)生[25]，并通過(guò)介導(dǎo)EMT參與包括胃癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的遷移和侵襲過(guò)程[26-30]。機(jī)制研究表明，SORT1過(guò)表達(dá)可激活 Wntβ -catenin通路，而敲減 SORT1則產(chǎn)生相反效應(yīng)。此外，采用 Wntβ -catenin通路特異性抑制劑XAV939能夠顯著逆轉(zhuǎn)SORT1過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的 Wnt 通路蛋白表達(dá)上調(diào)，并有效抑制胃癌細(xì)胞EMT進(jìn)程。由此可見(jiàn)，SORT1對(duì)胃癌細(xì)胞EMT的調(diào)控作用可能部分依賴于 Wnt/β -catenin通路的激活。鑒于胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為受到復(fù)雜精密的分子信號(hào)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控，本研究雖聚焦于SORT1- Wnt/β -catenin信號(hào)軸，但不能排除其他信號(hào)途徑參與SORT1介導(dǎo)的胃癌惡性進(jìn)展，后續(xù)研究將對(duì)此進(jìn)行更深人的探索。

圖7SORT1表達(dá)對(duì) Wnt 通路和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

β -catenin： β- 連環(huán)蛋白；CyclinD1：細(xì)胞周期蛋白D1A.基因本體功能分析；B.京都基因與基因組百科全書通路富集分析；C.Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中 Wnt 通路蛋白的表達(dá)水平及定量分析；D、E. Wnt 通路抑制劑XAV939干預(yù)后，Westernblot檢測(cè) Wnt 通路蛋白（D）和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白（E）的表達(dá)水平和定量分析

綜上，本研究結(jié)果表明，SORT1在胃癌中高表達(dá)且與患者不良預(yù)后顯著相關(guān)，其通過(guò)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及EMT過(guò)程參與腫瘤進(jìn)展，且促EMT作用可能與激活 Wnt/β -catenin通路有關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)揭示了SORT1在胃癌進(jìn)展及預(yù)后中的重要作用，深入探究其機(jī)制將有助于更全面地理解胃癌的不良預(yù)后，為疾病的治療提供新的思路。

利益沖突 所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明肖林雨：設(shè)計(jì)并實(shí)施實(shí)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果可視化、撰寫論文；段婷、夏勇生、陳悅：實(shí)驗(yàn)實(shí)施、數(shù)據(jù)收集及整理；閆興洲：審閱及修訂論文；胡建國(guó)：指導(dǎo)研究、修訂論文、提供基金支持

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（收稿日期：2024-06-24）