液相色譜柱使用時間對水產品中磺胺類檢測結果的影響

中圖分類號：0657.7 文獻標志碼：A 文章編號：1004—6755（2025）06—0032—05

The influence of the usage time of Liquid Chromatography Column on the detection results of sulfonamides in aquatic Products*

MA Ruixin1，2，ZHANG Pengyan1'2，CAO Junmin1，ZHANG Chunming3 （1.Hebei Aquatic Technology Extension Station，Shijiazhuang O5oo35，China； 2.Hebei Station for Quality Inspectionand Monitoring for Aquatic Products，Shijiazhuang O5oo35，China; Tangshan Municipal Corpsof AgriculturalCoordinated Administrative Law Enforcement，Tangshan O630oo，China）

Abstract：The influence of the use time of Liquid Chromatography Column on the detection data of sulfonamide compounds in aquatic products was tested and compared. The test showed that after the Liquid Chromatography Column was used for a period of time，the retention time of 12 sulfonamides were all reduced and the detection results of Sulfadiazine was decreased significantly owing to the variation of matrix effect，the stability of detection data can be maintained by changing a new Liquid Chromatography Column or changing the mobile phase gradient.

Key words：aquatic products； sulfonamides；Liquid Chromatography Column; retention time；matrix effect

磺胺類化合物是水產養殖中廣泛使用的一類抗菌藥物，殘留限量為 100μg/kg^[1] 。水產品中磺胺類的檢測方法多用液相色譜一串聯質譜法2，利用液相色譜的分離能力和質譜的定性定量能力對磺胺類化合物進行定性定量分析。

在使用液相色譜一串聯質譜分析水產品中的磺胺類藥物時，基質效應是不容忽視的一個問題，它直接影響檢測數據的大小?；|效應是指樣品中除被測物以外的共流出組分對被測物測定結果的干擾和影響，表現為離子抑制和離子增強。離子抑制使檢測數據變小，離子增強使檢測數據變大。當待測物的保留時間發生變化時，共流出組分的種類或含量可能發生變化，導致產生不同的基質效應，從而影響檢測數據。液相色譜中影響保留時間的因素很多，其中一種是因為隨著色譜柱的使用時間延長，固定相逐漸受到破壞，待測物的保留時間出現緩慢漂移，這種原因引起的基質效應變化最直觀地反映在質量控制數據上。但由于使用液相色譜一串聯質譜法進行定量檢測時，采集對象為待測物電離后產生離子的質荷比（m/z） ，而共流出組分產生的離子質荷比 （m/z） ）與待測物不同，不被質譜所采集，因此共流出組分在譜圖中看不到，從而導致分析質控結果不滿意的原因時容易忽略基質效應的變化。

筆者在利用農業部1077號公告—1—2008《水產品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜一串聯質譜法》2進行水產品磺胺類化合物的檢測時發現，磺胺嘧啶和磺胺二甲基嘧啶隨著色譜柱的使用時間延長，其質控回收率變化較大，特別是磺胺嘧啶的回收率不能滿足分析要求。為查找原因和解決問題，本文進行了數據比對分析，提出了解決方案。

1 試驗部分

1.1 主要儀器、試劑與材料

LC-20AD液相色譜儀（日本島津）—QTRAP4500三重四極桿質譜儀（美國ABSCIEX）、百分之一電子天平（賽多利斯）、旋轉蒸發儀（瑞士BUQI）、TDZ5—WS離心機（湖南湘儀）、MS3渦旋混合器（IKA）GM200刀式研磨儀（德國萊馳）。

12種磺胺類標準物質（Dr.Ehrenstorfer）、2種氘代內標物（WiTEGA）均為固體，標準溶液的配制和保存方法按農業部1077號公告—1—2008 執行。

乙腈、正己烷（色譜純，Merck）、乙酸銨（色譜純，Honeywell），甲酸（分析純，國藥）。

無水硫酸鈉干燥柱 （15g/60mL ，安捷倫），濾膜 （0，22μm ，PALL）。

試驗所用水為超純水。

1.2 試樣制備

分析樣品為鱸魚，按照標準[3進行樣品制備。

質控樣品為未檢出磺胺類的鱸魚，加標量 25μg/kg 。

1.3 樣品前處理

稱取 （5±0.02）g 試樣于 50mL 聚丙烯離心試管中，加入 2_μg/mL 氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶和氘代磺胺間二甲氧嘧啶內標混合物 100μL ，渦旋混合 30s ，避光放置 10min ，加入 20mL 酸化乙腈（乙腈/甲酸 =99/1，V/V） ，渦旋混合 2min ，超聲提取 10min，4 000r/min 離心 5min ，上清液過無水硫酸鈉干燥柱入 150mL 雞心瓶中。殘渣中加入 20mL 酸化乙腈（乙腈/甲酸 =99/1，V/V） 重復提取一次，合并提取液，于 40°C 旋轉蒸發至干，加人 1.0mL20% 甲醇溶液溶解殘渣，再加入2mL 正己烷渦旋混合 30s ，靜置后取下層溶液，轉入 2mL 具塞聚丙烯離心管中，以 10 000r/min 離心 5min ，取下層清液過 0.22μm 濾膜，供液相色譜一串聯質譜儀分析。

1.4液相色譜－串聯質譜條件

液相色譜條件：色譜柱KinetexF5（50mm×3.0mm，2.6μm） ，進樣量 2μL ，柱溫 ，樣品室溫度 15^°C ，流動相A為 5mmol/LZ 酸銨溶液（含 0.1% 甲酸），B為 甲醇（含 0.1% 甲酸），流速 0.6mL/min ，梯度洗脫程序 1：0～1min，20%B 1～3min . 20% B～80% B; 3～3.5min . 80% B;3.5～3.6min，80%B～20%B;3.6～5min，20%B

串聯質譜條件：電噴霧離子源（ESI），多反應掃描（MRM）正離子模式，噴霧電壓 5500V ，氣簾氣 30PSi ，碰撞氣Medium;溫度 550^°C ；霧化氣：55PSi；輔助加熱氣：55PSi。質譜參數見表1。

2 結果與討論

2.1新舊色譜柱對保留時間和測定結果的影響采用新拆封的同一品牌、規格型號的色譜柱（簡稱新色譜柱）和使用一段時間后的色譜柱（簡稱舊色譜柱），分別進樣相同的標準溶液和質控樣品溶液，其他儀器條件不變，12種磺胺類化合物的保留時間和回收率變化見表2。

由表2可以看出，色譜柱使用一段時間后，12種磺胺類藥物的保留時間均出現明顯的縮短，其中SD的回收率出現明顯下降，下降幅度為 43.4% ，SM2的回收率升高明顯，升高幅度為 21.7% ，SMT、SMM的回收率也有明顯上升，幅度為 16%～18% 。其余化合物的回收率變化幅度不顯著，均低于 10% 。使用舊色譜柱，12種磺胺類藥物中，SD的回收率降至44.8% ，不能滿足分析要求，其余11種化合物的回收率仍在合理范圍之內]。

2.2 改變流動相梯度對保留時間和檢測結果的影響

使用舊液相色譜柱，12種磺胺類化合物的離子質量色譜圖峰型未發生明顯改變，只是保留時間發生了變化。SD、SM2、SMM、SMT的質量色譜圖變化見圖1，說明舊色譜柱仍然可以使用。改變流動相梯度洗脫程序過程中發現：隨著初始流動相中甲醇含量的降低，除SQX和SDM外，其余磺胺類藥物的保留時間逐漸延后，SD的回收率逐漸增大。當調整流動相梯度使SD的保留時間與新色譜柱相當時，SD和SM2的回收率均與新色譜柱相近，12種磺胺類藥物的回收率均滿足分析方法要求4]。調整后的流動相梯度洗脫程序2為：

2～3min ， 80% B； 3～3 .1min， 80%B～10%B 。其他儀器條件不變，仍然使用相同的標準溶液和質控樣品溶液，各化合物的保留時間和回收率見下頁表3。

由表3可以看出，相對于舊色譜柱使相梯度洗脫程序1的分析結果，SM2、SD的回收率發生明顯變化，SM2變化幅度超過 20% ，SD的回收率變化最明顯，變化幅度為 93.75% 。SMZ、SM1、SMT回收率變化次之，變化幅度在 13%～16% ·SQX、SDX、SIZ、SMM、SCP、SDM、ST受梯度變化影響最小，變化幅度在 6% 以下。

2.3實際樣品的測定結果

實際樣品中發現兩個鱸魚樣品中的SD有檢出。按流動相梯度洗脫程序1，用新色譜柱檢出的結果分別為樣品 1：57.9μg/kg 和樣品 ;使用舊色譜柱的檢測結果分別為樣品1 ：28.3μg/kg 和樣品 2：4.15μg/kg 。用舊柱按流動相梯度洗脫程序2的檢測結果分別為樣品 1：54.4μg/kg 和樣品2 ：7.70μg/kg ，與上述質控樣品的回收率變化一致。

3結論

KinetexF5液相色譜柱對12種磺胺類化合物的保留能力隨著使用時間延長而下降，保留時間提前?；前粪奏ぃ⊿D）和磺胺二甲基嘧啶（SM2）的回收率受色譜柱使用時間和流動相梯度的變化影響最為顯著，除與其分子結構有關外，還因為共流出組分發生變化引起了不同的基質效應。由于磺胺嘧啶和磺胺二甲基嘧啶定量使用的內標物與其結構差異比較大，不能有效抵消基質效應所致。為保證檢測數據的可靠性，當發現質控數據不滿足要求時，建議更換新色譜柱；或仍使用原色譜柱，通過調整流動相梯度達到分析要求。

參考文獻：

[1］中華人民共和國農業農村部，中華人民共和國國家衛生健康委員會，國家市場監督管理總局.食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量：GB31650—2019[S.北京：中國農業出版社，2019：34.

[2]中華人民共和國農業部.水產品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜一串聯質譜法：農業部1077號公告一1—2008［S].北京：中國農業出版社，2008：1-12

[3]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.水產品抽樣規范：GB/T30891-2014[S].北京：中國標準出版社，2014：13.

[4]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會：實驗室質量控制規范食品理化檢測：GB/T27404—2008[S].北京：中國標準出版社，2008：31.

（收稿日期：2025-03-18）