季節因素對奶牛體內性控胚胎生產質量和胚胎移植效果的影響

中圖分類號：S823 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006—6500.2025.02.008

Effect of Seasonal Factors on the Qualityof Sex-controlled Embryo Production and Embryo Transfer Ef. fectinDairy Cows

GUO Shuang1，LIU Erfeng2，WANG ，SUN Guangkun3， JIA Hangfei2， WANG Hongying （1.TianjinAgriculturalDevelopmentServiceCenter，Tianjin3o61，China;2.TianjinJialiheAnimal HusbandryGroupompany Limited，Tianjin30404，China;3.Tianjin Tianshiniu Seed Industry CompanyLimited，Tianjin，China）

Abstract：Inordertostudytheimpactoftheseasonalfactorsonthequalityof theembryoproductionandtheefectofembryotransplantation，thistestchosetousetheembryomethdinTanjintoproduce536dairyembryosintheTanjnareaofwhichBorabove levelBorabovethenumberofembryoscanreach366 pieces，andthenumberofembryoscanbeusedby4.58heads;36Odairy embryos can be transplanted，with an average tire rate of 5 6 . 3 9 % . The test results showed that the seasonal factors had a certain impact onthequalityofdairyembryoproductionandembryonictransplantationefect.Withthearivaloftheotseason，thenumberofembryosproductionandthenumberofembryosinthebodyofdairybodywouldbereduced.SignificantlybelowApril，thediferencewas significantly level （ P ? transplanted in May and June.In conclusion，seasonal factors have agreat impact on the quality of embryoproductionandembryotransplantationfectontheintealcontrolofdairycows，embryoproductionndembryotransplantation in Tianjin should not be carried out ina hot season.

Keywords：different seasons; embryonic production;embryo transplantation; effect

胚胎移植技術是加快奶牛遺傳改良進程，提高優質高產核心群性能和數量的關鍵技術，利用胚胎移植技術能減少優良種畜世代間隔和遺傳進程，增加優秀母畜的后代數，提高優秀種畜的利用率，在畜牧生產與科研實踐應用廣泛。近年來，隨著國內外奶牛養殖規模化程度以及設施化水平的提升，胚胎生產移植技術應用普及率顯著提高，奶牛胚胎移植產業化應用得到快速發展。胚胎質量和移植效果是決定胚胎移植成本、效益和成功率的關鍵，大量研究表明，胚胎生產過程中，技術人員的操作熟練程度、無菌環境、胚胎質量分級評估精準度均會影響胚胎質量，供體受體牛的健康狀況、同期發情和超數排卵效果、藥品選擇、胚胎冷凍與解凍程序、技術人員操作水平等因素對胚胎生產質量和胚胎移植成功率同樣重要，上述諸多影響因素均與溫度、濕度等季節因素存在一定關聯性3。本研究以荷斯坦牛為供體牛和受體牛生產移植性控胚胎，對比分析了不同季節條件對奶牛體內性控胚胎生產質量、可利用率和移植受體牛妊娠率的影響，以期為奶牛胚胎生產、胚胎移植技術產業化應用提供必要的參考價值。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗時間和地點試驗地點選擇在天津地區某規?；膛?，試驗時間在2024年4一8月。

1.1.2試驗奶牛供體牛群和受體牛群均選擇年齡在13＼～14月齡、體質量達到 3 5 0 k g 以上的荷斯坦奶牛青年母牛，體況評分為3＼～3.5；供體牛共計105頭，受體牛共計400頭，供體牛和受體牛根據牛群結構、牛群發育階段隨機選取。

1.1.3試驗材料FSH（500單位·瓶-）孕酮陰道栓（ 支-）沖胚液均購自上海達特希爾生物科技有限公司；戈那瑞林 （ G n R H ， 1 0 0 g ·支-）氯前列醇鈉（ ·支-）均購自天澤恩源（天津）有限公司；沖胚管購自日本富士平公司，奶牛性控凍精選自ABS公司同一頭種公牛、同一批次冷凍精液。

1.2 方法

1.2.1供體超排受體供體超排采用孕酮FSH方案。具體方案：第0天埋植孕酮陰道栓；第5天至第8天，每天間隔 1 2 h 肌肉注射FSH，FSH總注射劑量為500單位·頭-；同時，第7天上午和下午肌肉注射 0 . 6 m g P G ，下午撤除孕酮陰道栓；第9天觀察供體發情，供體發情 1 2 . 2 4 h 后，分別進行一次人工授精，每次使用2支細管冷凍精液。

1.2.2胚胎回收人工授精后第7天，采用非手術方法回收胚胎，每側子宮大約使用 2 5 0 m L 沖胚液，對于超排效果好的一側，可根據實際情況多使用沖胚液對宮角進行沖洗，胚胎回收液收集到集卵杯中。

1.2.3胚胎鑒定與評估在體視顯微鏡下對胚胎質量進行鑒定與評估，胚胎質量分為A級、B級和C級，胚胎發育階段分為致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚和擴張囊胚4個階段。

1.2.4受體同期發情PG一次注射法：在任意一天（記為0d）給母牛注射PG，母牛在注射PG后2＼～4d集中發情。PG兩次注射法：在任意一天（記為0d）給母牛注射PG，無論母牛是否發情，第10＼～12天，第二次注射一定劑量的PG，母牛在第一次注射后13＼～15d集中發情。采用尾根涂蠟標記法結合人工觀察法記錄受體發情情況。

1.2.5胚胎移植與妊娠診斷

（1）將發情第7天（發情當天記為0d）的受體母牛固定在保定欄內或頸枷上。

（2）對受體牛進行直腸檢查，檢查母牛繁殖器官發育是否正常，觸診受體牛兩側卵巢上黃體和卵泡情況，通過黃體的大小、質地判斷黃體等級。受體牛胚胎移植時，黃體直徑大小應超過 1 . 0 c m ，質地稍硬而具有彈性，黃體基部充實，突出卵巢表面并有“排卵點\"的發育標準。

（3）對符合標準的受體牛進行尾部硬膜外麻醉，清洗消毒受體牛外陰部。

（4）對照供體牛采胚記錄表和合格受體牛的發 情記錄，確保受體牛發情階段和受體牛胚胎胚齡相 吻合。

（5）解凍胚胎，嚴格按照胚胎解凍要求解凍。

（6）重新將胚胎裝人 0 . 2 5 m L 胚胎細管中（一步細管法不需要重新裝管）。

（7）把裝有細管的移植槍套上移植槍外套管，外面再套上無菌移植外套膜。

（8）移植操作方法：輕輕分開受體牛的外陰部，將移植槍小心插入子宮頸外口。同時，用另一只手伸入直腸，握住子宮頸，確保移植槍的頂端能夠推開塑料外套膜，并順利穿過子宮頸。隨后，用深入直腸的手輔助將移植槍送達黃體側子宮角的大彎深處，并托起子宮角內的移植槍，緩慢而穩定地推入鋼芯，確保胚胎位于子宮角部。在胚胎放置妥當后，緩慢抽出移植槍，并用手指輕柔按摩子宮角3。整個移植過程必須輕柔且緩慢進行，以避免移植槍頂到或劃傷子宮內膜，這是確保移植成功的關鍵。

（9）做好受體牛移植記錄。

1.2.6測定指標胚胎回收后，統計每頭供體牛可用胚胎數、平均可用胚胎數等胚胎生產情況。胚胎鑒定評估后，統計可用胚胎質量和發育階段分布情況。胚胎移植后，統計移植受體頭數、妊娠受體頭數和胚胎發育30d移植妊娠率。

1.3數據分析

本研究使用SPSS25.0軟件對胚胎質量分布、可用胚胎數量、受體牛30d妊娠率等相關數據進行差異顯著性分析，組間差異用卡方檢驗，結果用百分比表示， Plt;0 . 0 5 表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1季節因素對性控胚胎生產質量的影響由表1可見，4—7月，80頭供體奶牛超排獲得

366枚可用胚胎，平均可用胚胎數4.58枚，不同季節條件下奶牛超排產生總胚胎數量、可用胚胎數量、胚胎質量差異較大，隨著月份的推移，各試驗組奶牛超排產生總胚胎數和可用胚胎數呈逐步降低趨勢，不同月份間差異顯著（ ? P lt; 0 . 0 5 。4—7月，隨著月份的推移，各試驗組A級和B級胚胎數量均呈降低趨勢。與4月和5月比較，7月生產胚胎的數量均顯著降低（ ? - 0 . 0 5 ），C級胚胎數量沒有明顯變化趨勢，各試驗組A級、B級、C級胚胎比例未表現出明顯的變化趨勢（ Pgt;0 . 0 5 ）。

2.2季節因素對胚胎移植受體牛妊娠率的影響

由表2可見，5一8月，360頭受體奶牛進行了性控胚胎移植，受孕牛頭數共計203頭，平均30d妊娠率達到 5 6 . 3 9 % 。隨著月份的推移，受孕牛頭數呈顯著降低趨勢。與5月和6月相比，7月和8月受孕牛頭數顯著降低，組間差異達到顯著水平（ P lt; 0.05），8月受孕牛頭數最低，僅為43頭。隨著月份的推移，胚胎移植受體奶牛妊娠率呈顯著降低趨勢。8月受體牛30d妊娠率最低，僅為 4 7 . 7 8 % ，顯著低于其他月份移植后受體牛妊娠率平均水平（ Plt;0 . 0 5 ）。與7月和8月相比，5一6月胚胎移植的受體牛 3 0 d 妊娠率顯著升高，組間比較差異均達到顯著水平（ P lt; 0 . 0 5 ） 。

3討論與結論

3.1討論

3.1.1 季節因素對性控胚胎生產質量的影響胚胎

移植技術可以充分發揮雌性優良個體的繁殖潛力并提高繁殖性能，在全球范圍內被廣泛應用。平均可用胚胎數是反映胚胎生產效率的重要指標。本研究中，80頭供體奶牛超排共獲得366枚可用胚胎，頭均采胚數為6.7（536/80）枚，頭均可用胚胎數4.58枚·頭-，頭均可用胚胎數占比達到 6 8 . 2 8 % ，高于高海霞等[2]研究結果。供體牛頭均可用胚胎數占比達到6 8 . 2 8 % ，低于郝海生等研究結果。這可能與超數排卵處理方法、藥物劑量、人工授精時間有關。從胚胎鑒定評估等級數量和質量分布來看，氣候條件也會影響供體牛超數排卵數量，進而導致生產的胚胎數量和質量出現較大差異，這與劉大偉等研究結論一致。天津地區夏季高溫高濕氣候環境條件對奶牛的應激刺激較大，會影響奶牛生殖內分泌系統，從而影響奶牛的超數排卵效果，導致A級和B級可用胚胎整體數量和質量的降低。朱玉林等研究發現，極端條件下激素誘導荷斯坦牛同期發情的效果較差，具有A、B級功能性黃體的受體牛占發情牛的比例較低，受體牛的可用率同樣降低。這表明季節條件對胚胎移植工作效率產生較大影響。

3.1.2季節因素對胚胎移植受體牛妊娠率的影響胚胎質量是影響胚胎移植妊娠率的重要因素，是保證胚胎移植有效性和提高移植妊娠率的重要前提。本研究中，5—8月共移植冷凍胚胎360枚，受孕奶牛203頭，平均受胎率達到 56 . 3 9 % ，平均受胎率高于劉宜存研究結果且低于汪志國等研究結果。原因主要是冷凍胚胎移植在胚胎冷凍、保存、解凍程序方面對胚胎移植受胎率產生了一定的影響，具有較大的優化提升空間。

季節是個籠統的概念，是外界環境因素的一個重要組成部分，包括溫度、濕度、氣流、光照等自然環境條件的綜合，溫度、濕度等這些季節因素對牛群繁殖生理狀況都會產生一定的影響，很大程度上通過影響母牛排卵時間和干擾受精過程，從而影響超數排卵結果8。季節因素對胚胎移植受體奶牛妊娠率也會產生較大影響，天津地區位于暖溫帶半濕潤季風氣候區，年平均氣溫較高，特別是夏季，受西北太平洋副熱帶高壓氣候影響，高溫高濕、雨熱同期持續時間較長，對奶牛繁殖工作造成較大影響。本研究中，4—5月春季胚胎移植受胎率最高，7—8月受胎率顯著降低，這與孫鳳俊研究結果一致。原因可能與本地區溫度、濕度及光照等氣候條件的影響因素有關。張立研究表明，在我國不同地區，季節因素對胚胎移植受胎率影響不同，北方地區以夏、秋季節為好，南方地區以春、冬季節為好。夏季奶牛處于熱應激或臨近熱應激狀態，環境高溫會影響奶牛發情及超排卵表現，進而導致受胎率降低。殷宗俊等92認為，春季和秋季氣候適宜，飼料營養成分高，有利于提高胚胎移植受體牛妊娠率。蔡周山等以西雜母牛為受體移植奶牛性控胚胎，平均妊娠率達到 5 4 . 0 6 % ，春、秋季受胎率高于夏季，這與本研究結果一致。

3.1.3影響胚胎生產質量和移植效果的因素分析超數排卵、人工授精、胚胎采集、胚胎檢測、胚胎冷凍與解凍等生產環節，技術人員的操作熟練程度和無菌環境條件均會影響胚胎的生產質量，胚胎質量的準確評估對胚胎移植成功率同樣重要[314。目前，胚胎質量形態學分級評估主要是基于IETS制定的標準，人為主觀因素容易對質量接近的胚胎等級評定產生影響，胚胎評估人員需要進行反復的實踐操作，以提高胚胎質量評估工作的精準度9，15]。供受體牛的健康狀況、同期發情和超數排卵效果、培養液等藥品來源、胚胎冷凍與解凍程序、技術人員操作水平等因素同樣會影響胚胎質量和移植成功率，上述諸多影響因素均與溫度、濕度等這些季節因素存在一定關聯性[]。

3.2 結論

在高溫高濕季節開展胚胎生產和移植工作，供體牛超排獲得的總胚胎數量和可用胚胎數量均顯著降低，受體牛移植受胎率同樣出現降低趨勢，季節因素對胚胎生產質量和胚胎移植成功率造成較大影響。因此，天津地區胚胎生產和移植應避開夏季炎熱高濕的月份，并且技術人員要規范操作胚胎生產和移植的每一個環節，才能有效提高胚胎的生產質量和移植效果。

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