雙術湯對大鼠的安全性及改善消化性不良的藥效作用研究

中圖分類號R965；R285 文獻標志碼A 文章編號00-0408（2025）09-1059-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.09.07

ABSTRACTOBJECTIVETostudythesafetyofShuangshudecoction inratsand itseficacyinimproving functionaldyspepsia （FD）inrats.METHODS Insafetytest，40ratswere divided into blank control group，Shuangshu decoction low-dose，mediumdose and high-dose groups [108，216， ，calculated by raw medicine，the same applies below]；they were given relevantmedicineintragastrically，forcontinuous14days.Themortalityandtoxicreactionsofratswererecorded，andtheorgan indexesoftheliver，idney，spleen，ungandheartofratswerecalculated；thepathologicalmorphologicalchangesintheliver，

kidney，spleen，lung，heart，stomach，duodenum，and colon were observed to evaluate the acute toxicity of Shuangshu decoction.Another 4O rats were grouped and administered in the same way for 3O consecutive days.The mortality and toxic reactions of the rats were recorded，and the corresponding organindexeswere calculated.The pathological morphological

changes inthecorespondingorgansereobserved，andbloodroutineandserumbiochemicalindicatorsweremeasured，inorder toasess thesubacute toxicityofShuangshudecoction.Inpharmacodynamicexperiments：5Oratsweredivided intoblankcontrol group，model group，and Shuangshu decoction low-，medium-，and high-dose groups （9.45，18.9， 3 7 . 8 g / k g ），with10rats in eachgroup.Exceptforblank control group，ratsinallothergroupswereusedtoestablishtheFDrat modelbysubcutaneous injection of loperamide（ ）.Rats in each group were administered the corresponding drug solution/normal saline intragastricall，onceaday，for14consecutivedays.Afterthelastmedication，fecalmoisturecontent，intestinal propulsionrate， gastricemptyingrateandserumlevelofmotilinwerealldetected，andinterstilcellofCajal（ICC）ultrastructureofratswas observed incolontissue.RESULTSThesafetyexperimentsshowedthatnodeathoccuredineachdosegroup，andnosignificant diference was found inorgancoeffcient，routine bloodandserum biological index，compared toblank control group （ Pgt;0 . 0 5 ） ； noabnormaitywasfoundinorganappearanceand pathologicalsections.Theresultsofthepharmacodynamicexperiments showed that，comparedwiththeblankcontrol group，thefecal moisturecontent，gastricemptyingrate，intestinalpropulsionrate，and serum motilin levels in the model group were significantly decreased （ Plt;0 . 0 5 ）；in the colonic tissue，the mitochondria in the ICC exhibitedsevereswelingwiththedisappearanceofcrstae，andtheendoplasmicreticulumwasdilated.Compared withmodel group，theratsin Shuangshudecoctionhigh-dosegroupshowed significant increases intheabovequantitativeindicators（ P lt; 0.05）；addionally，therewasalarge numberof mitochondriaintheICCofthecolonictisse，withclearcristae and egular arrangement.CONCLUsIONsShuangshudecoctionissafeandhasabeneficialimprovingefectonFDrats；itsmechanismof actionmaybeelatedtotheregulationofgastroitestinalhormoneexpresiotopromotegastrcemptyingandintestinalropulsion， as well as the repair of mitochondrial structure in ICCs to restore gastrointestinal function.

KEYWORDsShuangshu decoction；safety；pharmacodynamics；acutetoxicity；subacutetoxicity；functionaldyspepsia： gastrointestinal motility disorder

功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）為臨床常見病癥，以腹痛、腹脹、餐后飽脹、暖氣、食欲不振為主要癥狀，目前主要以質子泵抑制劑、促胃腸動力藥、抗抑郁藥治療，然而由于上述藥物的耐藥性及副作用使得治療效果欠佳2-3]。雙術湯是首批全國名老中醫(yī)、桂派名中醫(yī)秦家泰教授的經驗方，由麩炒蒼術、白術、厚樸、姜半夏、茯苓、陳皮等13味中藥材組成，具有補益脾胃、運化水谷、疏肝理氣之功。該方已在臨床應用20余年，主要用于FD、胃炎的治療。研究發(fā)現(xiàn)，雙術湯對FD有較好的臨床療效，且副作用較少4。然而，盡管雙術湯已在臨床實踐中積累一定經驗性應用證據，但系統(tǒng)性的安全性與藥效學評價缺失，制約了其臨床應用。基于此，本研究擬通過開展雙術湯的安全性及藥效學評價，以期為雙術湯的臨床應用提供更為充實的理論依據。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用的主要儀器有BC-2800vet型獸用全自動血液細胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）、D3024R型臺式高速冷凍離心機[大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）股份公司]、ME203E/02型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]、Chemray240型全自動生化分析儀（深圳雷杜生命科學股份有限公司）、JEM-1400型透射電子顯微鏡（日本電子株式會社）Donatello型自動脫水機（意大利Diapath公司）CryostarNX50型冰凍切片機[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]、JB-P5型包理機（武漢俊杰電子有限公司）CKX41型倒置光學顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 主要藥品與試劑

雙術湯由麩炒蒼術 、白術 、厚樸 1 0 g 姜半夏 1 0 g 茯苓 1 5 g 、陳皮 1 0 g 、生雞內金 1 5 g 、六神曲15g、炒麥芽 1 5 g 焦山楂 1 5g 川楝子 1 0 g 延胡索 石斛 組成，方中各藥材飲片均由廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院提供并由該院藥學部唐春麗主任中藥師鑒定為真品。

洛哌丁胺對照品（批號I2201550，純度 ? 9 8 % ）活性炭（批號E2305244）均購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；丙氨酸轉氨酶（alaninetransaminase，ALT）天冬氨酸轉氨酶（aspartatetransaminase，AST）、白蛋白（albu-min，ALB）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）、總蛋白（total protein，TP）尿素、肌酐（creatinine，Cr）、甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、葡萄糖（glucose，GLU）測定試劑盒（批號分別為20230706、20230707、20230418、20230615、20221219、20230525、20230613、20230607、20230608、20230606）均購自深圳雷杜生命科學股份有限公司；總膽紅素（totalbilirubin，TBiL）、鈉離子 ）、氯離子 ）、鉀離子中 ）檢測試劑盒（批號分別為2023003、2022003、2022004、2022005）均購自長春匯力生物技術有限公司；大鼠胃動素（motilin，MTL）檢測試劑盒（批號E-EL-R0639c）購自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；蘇木素-伊紅（HE）染色液（批號G1076）購自武漢賽維爾生物科技有限公司。

1.3實驗動物

本研究所用動物為健康的SD大鼠，共150只，6周齡，雌雄各半，體重 1 8 0～2 2 0 g ，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物生產許可證號為SCXK（湘）

2019-0004號。購入后，大鼠常規(guī)分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)期間自由飲水、進食。飼養(yǎng)室溫度為 ，相對濕度為4 0 % ～ 7 0 % ，明暗周期為 。本實驗符合動物研究倫理原則，并得到廣西中醫(yī)藥大學實驗倫理委員會的批準，倫理號為DW20240507-099。

2 方法與結果

2.1 受試藥物的配制

將雙術湯處方藥材飲片（共 1 8 0 g 加人到 6 0 0 m L 水中浸泡 0 . 5 h 后煎煮，煮沸后再煎 0 . 5 h ，過濾；濾渣再次煎煮 2 0 m i n 后過濾，將2次濾液混勻后煎至濃稠狀態(tài)，備用，此時藥液質量濃度為 （以生藥量計）。

2.2 安全性實驗

2.2.1 急性毒性實驗

取40只SD大鼠隨機分為空白對照組和雙術湯低、中、高劑量組，每組10只，雌雄各半。本研究根據《藥理實驗方法學》中藥物劑量設計原則[，使用最大生藥質量濃度（ 7 . 2 g / m L ，灌胃體積為 1 5 m L/ k g ，以不同的灌胃頻次（分別為每日灌胃1次、2次和3次）給予108、216、324 的雙術湯，連續(xù)給藥14d（空白對照組大鼠灌胃等體積生理鹽水），記錄各組大鼠死亡情況、毒性反應、體重變化。剖取各組大鼠臟器（肝、腎、脾、肺、心、胃、十二指腸、結腸，下同），稱質量，計算臟器指數（臟器指數 臟器質量/體重 × 1 0 0 % ，全文均僅計算肝、腎、脾、肺、心的臟器指數）。然后，將各臟器組織置于 4 % 多聚甲醛中固定，經石蠟包埋、切片等處理后進行HE染色，采用光學顯微鏡觀察各組織病理形態(tài)學變化。采用SPSS26.0軟件進行數據處理。符合正態(tài)分布的計量資料以 表示，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊時組間兩兩比較采用LSD檢驗，方差不齊時組間兩兩比較采用Tamhane's 檢驗。檢驗水準 α=0 . 0 5 。

由圖1可知，各組大鼠肝小葉結構完整、輪廓清晰，肝細胞索和肝血竇向周圍呈放射狀排列，細胞質豐富，肝細胞可見脂肪變性；腎皮質、腎小球分布均勻，腎小管上皮細胞圓潤、飽滿，腎間質無增生，無炎癥細胞浸潤；脾臟中紅髓、白髓分界清楚，紅髓有髓索和脾血竇，結構分界清楚，未見明顯異常；肺泡隔未見增厚，無炎癥細胞浸潤；胃組織黏膜層排列規(guī)整，腺體豐富，無炎癥細胞浸潤，無纖維增生；十二指腸黏膜無缺失，腺體排列規(guī)整，無炎癥細胞浸潤；結腸黏膜無缺失，腺體排列規(guī)整，無炎癥細胞浸潤；心肌纖維著色均勻，細胞分界清楚，心肌細胞橫紋清楚、明暗相間，間質未見異常。這提示，雙術湯未對大鼠臟器造成損傷（圖1僅展示了肝、腎、脾、肺的病理染色圖，全部圖片可掃描本文首頁二維碼，進人“增強出版”頁面查看附圖1）。由表1可知，與空白對照組比較，雙術湯各劑量組大鼠各臟器（肝、腎、脾、肺、心）指數差異均無統(tǒng)計學意義（ （Pgt;0 . 0 5 ）。

由于急性毒性實驗過程中雙術湯各劑量組大鼠均未出現(xiàn)死亡，無法得出雙術湯的半數致死量，因此，筆者根據毒性實驗設計原則，進一步通過最大耐受量法進行安全性評估：取20只SD大鼠隨機分為空白對照組和雙術湯組，每組10只，雌雄各半。根據以雙術湯最大生藥質量濃度（ 7 . 2 g / m L ）、大鼠最大灌胃體積（ 2 0 m L / k g） 每天灌胃3次的原則，設計雙術湯的最大給藥劑量為4 3 2 g / k g ，連續(xù)給藥14d（空白對照組大鼠灌胃等體積生理鹽水），記錄大鼠的死亡情況、毒性反應，并剖取其臟器進行病理觀察。結果顯示，實驗期間2組大鼠均無死亡，且活動自如，飲食、飲水正常；雙術湯組大鼠各臟器病理學形態(tài)與空白對照組比較無明顯差異（圖略），進一步證明了雙術湯對大鼠具有良好的安全性。

2.2.2 大鼠亞急性毒性實驗

取40只SD大鼠隨機分為雙術湯低、中、高劑量組及空白對照組，每組10只，雌雄各半。雙術湯低、中、高劑量組大鼠分別灌胃 1 0 8 ? 2 1 6 ? 3 2 4 g/ （ k g? d） 雙術湯藥液，空白對照組大鼠灌胃等體積生理鹽水，灌胃體積均為1 5 m L/ k g ，連續(xù)給藥30d，記錄各組大鼠死亡情況及毒性反應。末次給藥后，大鼠禁食不禁水 2 4 h ，腹主動脈采血，分離制備血清；將大鼠處死，剖取各臟器并稱質量。采用全自動血液細胞分析儀根據試劑盒說明書方法分別測定大鼠血清中白細胞、紅細胞、血紅蛋白、血小板、ALT、AST、TBiL、ALP、ALB、TP、Cr、GLU、TC、TG、 、 、尿素水平，然后同“2.2.1”項下方法計算臟器指數并觀察各組織病理學形態(tài)。

由圖2可知，各組大鼠的肝、腎、脾、肺、胃、十二指腸、結腸及心臟組織均未發(fā)生病理改變。這表明雙術湯對主要器官無結構性損傷，用藥安全性高，無亞急性毒性作用（圖2僅展示了胃、十二指腸、結腸、心臟的病理染色圖，全部圖片可掃描本文首頁二維碼，進入“增強出版”頁面查看附圖2）。由表 2 ～ 表4結果可知，與空白對照組比較，雙術湯各劑量組大鼠各臟器指數、血常規(guī)指標、血液生化指標差異均無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0 . 0 5 ，提示雙術湯對造血系統(tǒng)、肝腎功能及代謝無顯著影響。

2.3 藥效學實驗

2.3.1 分組、造模與給藥

取50只大鼠隨機分為空白對照組、模型組和雙術湯低、中、高劑量組 （ 9 . 4 5 ， 1 8 . 9 ， 3 7 . 8 g / k g ，分別為臨床等效劑量的0.5、1、2倍），每組10只，雌雄各半。除空白對照組外，其余各組大鼠均通過皮下注射洛哌丁胺 （ 3 . 5 m g / k g 2次/d，連續(xù)5d制備FD大鼠模型；當大鼠出現(xiàn)糞便干結、毛發(fā)雜亂、活動減少、體重減輕等情況，表明造模成功。造模成功后，空白對照組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，雙術湯各劑量組大鼠灌胃相應藥液，每天1次，連續(xù) 1 4 d 。

2.3.2 糞便含水率測定

實驗期間，每日采集新鮮糞便并稱質量（即濕質量），經電熱恒溫鼓風干燥機 烘烤 1 2 h 后稱質量（即干質量），計算糞便含水率[糞便含水率 （糞便濕質量一糞便干質量）/糞便濕質量 × 1 0 0 % ] 。結果（表5）顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠糞便含水率顯著降低 （ Plt;0 . 0 5 ） ；與模型組比較，雙術湯低、中、高劑量組大鼠糞便含水率均顯著升高 （ Plt;0 . 0 5 ）。

2.3.3 胃排空率及小腸推進率檢測

實驗前 禁食不禁水，末次給藥1h后，每只大鼠灌胃 1 m L 活性炭， 2 0 m i n 后腹主動脈采血（血樣備用），然后迅速處死，剖取胃、小腸、結腸組織，稱定全胃質量；剪開胃組織并洗凈，稱定胃凈質量，計算胃排空率{胃排空率 = [ 1 - （全胃質量一胃凈質量）/活性炭質量] × 。將小腸組織以直線展開，用尺子測量活性炭前部到幽門的距離，以及幽門到回盲部的全長，并計算小腸推進率（小腸推進率 活性炭前部到幽門的距離/幽門到回盲部的全長 × 1 0 0 % ）。結果（表5）顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠胃排空率、小腸推進率均顯著降低 （ Plt;0 . 0 5 ） ；與模型組比較，雙術湯高劑量組大鼠胃排空率顯著升高（ （Plt;0 . 0 5 ），雙術湯中、高劑量組大鼠小腸推進率均顯著升高 ? Plt;0 . 0 5 。

2.3.4 血清中MTL水平檢測

取“2.3.3\"項下各組大鼠血樣，分離血清，根據試劑盒說明書方法檢測大鼠血清中MTL水平。結果（表5）顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠血清中MTL水平顯著降低 （ Plt;0 . 0 5 ；與模型組比較，雙術湯中、高劑量組大鼠血清中MTL水平均顯著升高（ P lt; 0 . 0 5 ）。

2.3.5結腸組織中卡哈爾間質細胞超顯微結構觀察

取大鼠結腸組織（約 放人避光的電鏡固定液中固定，經脫水、包埋、聚合后，進行切片、染色，然后置于透射電子顯微鏡下觀察，采集圖像并觀察卡哈爾間質細胞（interstitialcellofCajal，ICC）的超微結構。結果顯示，空白對照組大鼠結腸組織中ICC可見嵴清晰、排列規(guī)整的正常線粒體。模型組大鼠結腸組織中ICC的線粒體重度腫脹、嵴消失，內質網擴張。雙術湯低劑量組大鼠結腸組織中ICC可見有較多腫脹的線粒體，且有少量脂滴空泡；雙術湯中劑量組大鼠結腸組織中ICC可見線粒體嵴模糊，內質網腫脹；雙術湯高劑量組大鼠結腸組織中ICC有大量線粒體，且嵴清晰、排列規(guī)整。結果見圖3。

3討論

FD是一種起源于胃、十二指腸區(qū)域的慢性功能障礙[，可歸屬于中醫(yī)的\"上腹痛”“飽脹感”“嘈雜感\(zhòng)"范疇。目前，F(xiàn)D的臨床推薦用藥有增加感染性疾病發(fā)生、骨質疏松、QT間期延長的風險[9-0]。而雙術湯副作用少，且在改善胃腸動力障礙方面有較好的療效，因此推廣雙術湯的臨床應用具有重要意義。

本課題組采用毒性實驗評估了雙術湯的安全性。在急性毒性實驗、最大耐受量實驗中大鼠均未出現(xiàn)死亡，結合臟器指數及病理觀察可知，雙術湯無急性毒性。在亞急性毒性實驗中，經雙術湯干預后，大鼠的血常規(guī)指標、生化指標、臟器指數及病理觀察結果均與空白對照組大鼠無明顯差異，說明雙術湯對大鼠無亞急性毒性。通過急性毒性、最大耐受量實驗、亞急性毒性實驗可知，雙術湯安全無毒，可為后續(xù)雙術湯的研究奠定基礎。

雙術湯以六君子湯為基礎化裁而成，后者已被證實能夠促進MTL的釋放以改善FD癥狀[]。MTL是一種促進胃強力收縮、加速腸道蠕動的消化道激素[12]。本研究結果顯示，經雙術湯干預后，F(xiàn)D大鼠的糞便含水率、胃排空率、小腸推進率、MTL水平均升高，表明雙術湯能夠通過提高MTL水平促進胃腸運動。ICC被認為是治療FD的關鍵調節(jié)介質和靶點，其是一類非神經元、間質起源的特殊類型細胞，主要功能是產生和調控胃腸道基本電節(jié)律、參與神經信號轉導、維持消化道正常功能[13-14]。正常ICC內含大量的線粒體，為細胞提供能量；若線粒體受損，則無法為ICC提供能量，從而引發(fā)胃動力障礙[15]。當細胞損傷時，線粒體會腫脹，基質變淺，嵴變短、變少甚至消失；在極度腫脹時，線粒體可轉化為小空泡狀結構[1]。內質網是維持蛋白質穩(wěn)態(tài)的細胞器，當細胞受損時會出現(xiàn)內質網擴張，從而呈現(xiàn)液泡化改變[]。本研究結果顯示，隨著雙術湯給藥劑量的提高，F(xiàn)D大鼠ICC的線粒體損傷明顯改善。這表明雙術湯能夠修復FD大鼠結腸組織中ICC的線粒體結構，從而保證胃腸運動的正常進行。

綜上所述，雙術湯具有較好的安全性，且對FD大鼠具有較好的改善作用；其作用機制可能與調節(jié)胃腸激素表達以促進胃排空與腸推進，修復ICC線粒體結構以恢復胃腸功能有關。本研究仍存在一定局限：毒性實驗未涵蓋長期毒性評估；雙術湯改善FD大鼠胃腸動力障礙的作用機制尚未完全闡明。未來需通過長期毒性實驗和機制研究，為雙術湯的臨床應用提供更全面的依據。

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