新生兒缺氧缺血性腦病患兒血清中lncRNA H19和miR-19a的表達及臨床意義

［摘 要］目的 探討新生兒缺氧缺血性腦病（HIE）患兒血清中長鏈非編碼RNA H19（lncRNA H19）和miR-19a的表達情況及臨床意義。方法 選取2017年2月至2019年9月邯鄲市中心醫院收治的93例HIE患兒為研究對象（HIE組），根據HIE嚴重程度將患兒分為輕癥組48例、中癥組29例和重癥組16例，選擇同期在院健康新生兒85例為對照組；采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）法檢測血清lncRNA H19和miR-19a水平，并進行新生兒神經行為評分（NBNA）；采用Pearson相關性分析患兒血清lncRNA H19和miR-19a的相關性，以及二者分別與NBNA評分的關系。對患兒進行兩年的隨訪，根據隨訪結果將其分為預后良好組72例與預后不良組21例；再根據血清lncRNA H19、miR-19a水平的平均值將其分為高表達和低表達，分析血清lncRNA H19和miR-19a水平與HIE患兒預后的關系。結果 HIE組患兒血清lncRNA H19水平明顯高于對照組，而miR-19a水平明顯低于對照組，經比較差異均具有統計學意義（t值分別為22.144、21.842，P＜0.05）。輕度組、中度組、重度組HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平及NBNA評分比較，差異均有統計學意義（F值分別為38.363、131.168、136.265，Plt;0.05）。lncRNA H19與miR-19a存在結合位點；Pearson相關性分析顯示，HIE患兒血清lncRNA H19與miR-19a水平呈顯著負相關（r=-0.524，P＝0.000）。HIE患兒血清lncRNA H19水平與NBNA評分呈顯著負相關（r=-0.608，P＝0.000），miR-19a水平與NBNA評分呈顯著正相關（r=0.535，P＝0.000）。HIE患兒血清lncRNA H19高表達的預后良好率明顯低于低表達，血清miR-19a高表達的預后良好率明顯高于低表達，經比較差異均有統計學意義（χ2值分別為6.561、4.736，P＜0.05）。結論 新生兒HIE患兒的血清lncRNA H19和miR-19a水平呈異常表達，其水平與NBNA評分相關，二者可反映HIE患兒疾病嚴重程度及預后情況。

［關鍵詞］新生兒；缺氧缺血性腦病；長鏈非編碼RNA H19；微小RNA-19a；神經行為評分

Doi：10.3969/j.issn.1673-5293.2025.02.012

［中圖分類號］R174 ［文獻標識碼］A

［文章編號］1673-5293（2025）02-0083-06

Expressions and clinical significance of lncRNA H19 and miR-19a in serum of neonates with neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy

ZHAI Lina，ZHANG Xiaoli，YAN Lijuan，ZHAI Shufen，PING Lili

（Department of Neonatology，Handan Municipal Central Hospital，Hebei Handan 056000，China）

［Abstract］ Objective To explore expressions of long non-coding RNA H19 （lncRNA H19） and microRNA-19a （miR-19a） in serum of neonates with

hypoxic ischemic encephalopathy （HIE） and their clinical significance. Methods A total of 93 neonates with HIE who admitted to Handan Municipal Central Hospital from February 2017 to September 2019 were selected as research subjects.According to severity of HIE，the neonates were divided into three groups：mild HIE group （48 cases），moderate HIE group （29 cases） and severe HIE group （16 cases）.85 healthy

neonates in our hospital in the same period were selected as the control group.Real-time fluorescent quantitative PCR （qRT-PCR） was applied to detect serum lncRNA H19 and miR-19a levels.Neonatal Behavior Neurological Assessment （NBNA） was performed on all neonates.Pearson correlation analysis was used to analyze correlations between serum lncRNA H19 and miR-19a levels，and relationship between the two indexes and the NBNA scores. Results Compared with the control group，the serum lncRNA H19 level of the neonates in the HIE group was higher，while the miR-19a level was lower，and the differences were significant （t=22.144 and21.842 respectively，both Plt;0.05）.Moreover，the serum lncRNA H19 level elevated with increase in severity of HIE，and the serum miR-19a level and NBNA score lowered with decrease in severity of HIE （all Plt;0.05）.There were significant differences in serum expression levels of lncRNA H19 and miR-19a and NBNA scores among the mild HIE group，the moderate HIE group and the severe HIE group （F=38.363，131.168 and 136.265 respectively，all Plt;0.05）.The bioinformatics website ENCORI showed that lncRNA H19 and miR-19a had common binding sites.Pearson correlation analysis shown that the serum lncRNA H19 level was negatively correlated with the serum miR-19a level and NBNA scores （r=-0.524 and -0.608 respectively，both P=0.000），while the serum miR-19a level was positively correlated with NBNA scores （r=0.535，P=0.000）.The good prognosis rate of these neonates in the high lncRNA H19 expression group was significantly lower than that in the low lncRNA H19 expression group，and the good prognosis rate of these neonates in the high miR-19a expression group was significantly higher than that in the low miR-19a expression group，the differences were both significant （χ2=6.561 and 4.736 respectively，both P＜0.05）. Conclusion LncRNA H19 and miR-19a abnormally expressed in the neonates with HIE，and their serum expression levels are related to NBNA scores.The expression levels of lncRNA H19 and miR-19a in serum can reflect severity of the disease and prognosis of the neonates with HIE.

［Key words］ neonate; hypoxic-ischemic encephalopathy; long non-coding RNA H19; microRNA-19a; behavior neurological assessment

新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxic ischemic encephalopathy，HIE）是臨床中常見的腦損傷相關疾病之一，主要是由于圍生期新生兒發生窒息而造成的腦部缺氧、缺血所引起的腦損傷，該疾病可使患兒發生一系列的并發癥，甚至死亡［1］。據統計，中國每年新生兒發生HIE的概率為活產兒的3%～6%，對患兒生活質量造成了嚴重的影響［2］。因此，尋找簡便、準確的生物標志物對HIE的臨床監測和預后有十分重要的意義。

長鏈非編碼RNA（lncRNA）的異常表達與多種疾病的發生密切相關［3］。H19位于人類第11號染色體上，在胚胎發育中呈高表達水平，出生后恢復低表達水平［4］。H19在冠狀動脈疾病［5］、腦卒中［6］等血管疾病中的關鍵作用已被證實。微小RNA（miRNA）是一類長為22～25nt的內源性小RNA，可調控人類約30%的基因表達，參與細胞的增殖、分化、凋亡、炎癥反應、機體代謝等重要生理病理過程［7］。微小RNA-19a（miR-19a）是miRNA家族中重要的一員。Mayer等［8］研究表明，miR-19a低表達的慢性冠狀動脈患者的死亡風險較高表達患者明顯增加。另有研究發現，miR-19a在心肌梗死組織樣本中表達降低，其在心血管疾病中發揮治療作用［9］。但lncRNA H19、miR-19a在新生兒HIE中的相關研究較為少見。因此，本研究探討了新生兒HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a的表達變化情況及臨床意義，旨在為準確地評估新生兒HIE的進展狀況及預后提供方便、特異性強的血清標志物。

1研究對象與方法

1.1研究對象

選取2017年2月至2019年9月邯鄲市中心醫院收治的93例新生兒HIE患兒為研究對象，將其分為HIE組，根據HIE嚴重程度［10］將其分為輕癥組48例、中癥組29例和重癥組16例；選擇同期在院健康新生兒85例為對照組。

在93例HIE組患兒中，男49例，女44例；胎齡為36～42周，平均（38.84±1.86）周；順產48例，剖宮產45例；體重為2.56～3.64kg，平均（3.02±0.43）kg。在85例對照組患兒中，男48例，女37例；胎齡為37～42周，平均（39.15±2.05）周；順產49例，剖宮產36例；體重為2.60～3.72kg，平均（3.11±0.46）kg。

1.2納入與排除標準

納入標準：①新生兒HIE患兒均符合HIE診斷標準［11］；②出生24h內發病；③一般臨床資料和隨訪資料完整。

排除標準：①患有先天性遺傳疾病；②合并心、肺異常；③合并腦部其他疾病；④孕婦妊娠期間患有宮內感染。

本研究已通過邯鄲市中心醫院醫學倫理委員會批準（編號：2017-01083）。本研究中患兒家屬均了解并簽署知情同意書。

1.3觀察指標

在患兒出生后立即檢查Apgar評分，共檢測五項體征，＜4分為重度窒息，4～6分為輕度窒息，7～10分為正常。對新生兒進行神經行為評分（Neonatal Behavior Neurological Assessment，NBNA）［12］，共20項，每項0～2分，共計40分；NBNA評分＜35分為異常，35～36分為可疑異常，＞36分為正常。

1.4方法

1.4.1樣本的采集

在患兒出生2h內采集靜脈血3mL，4℃條件下以3 000r/min離心10min，收集上層血清，保存在-80℃冰箱中待檢。

1.4.2患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平的檢測

在血清樣本中加入Trizol試劑（武漢純度生物公司）提取總RNA，并將RNA反轉錄為cDNA，進一步行實時熒光定量PCR（qRT-PCR）試驗，嚴格按照2xSYBR Green PCR Master Mix試劑盒（北京易默生物公司）說明書進行操作。

qRT-PCR條件：95℃預變性10min，95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，循環35次。lncRNA H19和miR-19a的內參分別為GAPDH和U6，引物序列見表1。相對表達量按照2-ΔΔCT法進行計算。

1.5隨訪情況

采取電話、微信或門診的方式，對患兒進行兩年時間的隨訪，截止日期為2021年9月，期間無失訪情況。隨訪時，若患兒出現NBNA評分＜35分、癲癇、癱瘓或死亡中的任意一項，則納入預后不良［13］，根據隨訪結果將其分為預后良好組（72例）與預后不良組（21例）。

1.6統計學方法

應用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x-±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較行單因素方差分析，采用SNK-q檢驗行進一步比較；計數資料以例數（百分率）［n（%）］表示，組間比較采用χ2檢驗；以Pearson相關性分析患兒血清lncRNA H19與miR-19a的相關性，以及二者分別與NBNA評分的關系，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 HIE組與對照組患兒一般資料的對比

HIE組與對照組患兒性別和分娩途徑的比例，以及胎齡、體重比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；HIE組患兒Apgar評分明顯低于對照組，經比較差異具有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.2 HIE組與對照組患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平的對比

HIE組患兒血清lncRNA H19水平明顯高于對照組，而miR-19a水平明顯低于對照組，經比較差異均具有統計學意義（P＜0.05），見表3。

2.3不同嚴重程度HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平及NBNA評分的對比

患兒血清lncRNA H19水平隨著HIE嚴重程度的加重而升高，miR-19a水平及NBNA評分隨著HIE嚴重程度的加重而降低，輕度組、中度組、重度組HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平及NBNA評分比較，差異均有統計學意義（Plt;0.05），見表4。

兩兩組間比較顯示：輕度組HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平及NBNA評分分別與中度組、重度組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；中度組HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平及NBNA評分與重度組比較，差異均有統計學意義（Plt;0.05），見表4。

2.4 HIE患兒血清lncRNA H19與miR-19a水平的關系

在中山大學開發的生物信息網站ENCORI中（https：//rnasysu.com/encori/）顯示，lncRNA H19與miR-19a存在結合位點，見圖1；進一步行Pearson相關性分析，結果顯示，HIE患兒血清lncRNA H19與miR-19a水平呈顯著負相關（r=-0.524，P＝0.000），見圖2。

2.5 HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平與NBNA評分的相關性分析

HIE患兒血清lncRNA H19水平與NBNA評分呈顯著負相關（r=-0.608，P＝0.000），miR-19a水平與NBNA評分呈顯著正相關（r=0.535，P＝0.000），見圖3。

2.6 HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平與預后的關系

根據血清lncRNA H19、miR-19a水平的平均值，將其分為高表達和低表達。對HIE患兒進行兩年時間的隨訪，其中預后良好組72例，預后不良組21例。HIE患兒血清lncRNA H19高表達的預后良好率為66.67%，顯著低于低表達預后良好率的88.89%；HIE患兒血清miR-19a高表達的預后良好率為86.96%，顯著高于低表達預后良好率的68.09%，經比較差異均有統計學意義（P＜0.05），見表5。

3討論

新生兒窒息導致的缺氧、缺血是HIE發生的主要原因，該疾病可造成不同程度的腦性癱瘓、癲癇等腦部疾病發生，嚴重者甚至發生死亡［14］。目前，臨床上針對HIE的進展判定主要是通過CT、MRI等方式，但多次輻射可對患兒造成不可避免的二次損傷，且存在假陽性情況，特異性低［15］。抓住治療時間窗可減少HIE發展為永久腦損傷的風險。因此早期監測及治療對提高患兒的預后效果是十分重要的。

3.1對lncRNA H19的研究進展及本研究結果

lncRNA最初被認為是基因中的“噪音”，隨著深入研究發現，lncRNA在多種生物學功能中發揮著重要作用，其過度表達或缺失與疾病的發生密不可分［16］。H19為lncRNA家族中最早發現的基因之一，具有高保守性及同源性，在胚胎發育、個體發育中具有關鍵作用［17］。李鵬飛等［18］研究發現，急性缺血性腦卒中患者單個核細胞中lncRNA H19水平明顯升高。本研究顯示，與對照組相比，HIE組患兒血清lncRNA H19水平明顯升高，且lncRNA H19水平隨著HIE嚴重程度的加重而升高，其與NBNA評分呈負相關。這提示lncRNA H19參與了HIE的發生及病理發展，其可反映HIE疾病的進展程度。本研究隨訪結果發現，lncRNA H19高表達患兒預后良好率顯著低于低表達。這提示可通過及時監測HIE水平的變化預測患兒的預后情況，并制定合理的治療方案，降低致殘率。

3.2對miR-19a的研究進展及本研究結果

miRNA是一類具有高度保守性的內源性小RNA，通過與對應的靶基因相結合而調控基因的表達，雖然miRNA只占基因組的2%，但參與許多疾病的發生，且miRNA在血液中穩定存在，具有可多次重復檢測的優點［19］。miR-19a在神經系統疾病和血管疾病中發揮著關鍵作用。Fang等［20］研究表明，在腦缺血損傷小鼠模型中，組蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）升高，miR-19a表達下調，其機制可能是過表達的HDAC3通過抑制miR-19a表達來激活Janus激酶/信號轉導和轉錄激活因子3（JAK1/STAT3）信號通路，進而促進細胞凋亡。Xiao等［21］研究發現，缺血性卒中患者、MCAO/R大鼠模型和OGD神經元細胞模型中lncRNA H19水平均明顯升高，敲低lncRNA H19可減輕氧糖剝奪神經元細胞的凋亡，減輕MCAO/R大鼠腦梗塞體積和神經元凋亡，并且證明了可通過lncRNA H19/miR-19a/Id2軸調節缺氧誘導的神經元凋亡。Gao等［22］研究表明，在缺血再灌注（I/R）腦組織中，lncRNA H19表達上調而miR-19a下調，其機制可能是通過H19/miR-19a-3p/蛋白酪氨酸磷酸酶基因（PTEN）軸來調節磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）通路，從而激活氧化應激和細胞凋亡，加重腦組織損傷。本研究顯示，HIE組患兒血清miR-19a水平較對照組明顯降低，且miR-19a水平隨著HIE嚴重程度的加重而降低，其與NBNA評分呈正相關。這提示miR-19a可能在HIE的發生、發展中發揮保護作用。本研究顯示，lncRNA H19與miR-19a存在結合位點，進一步行Pearson相關性分析顯示，HIE患兒血清lncRNA H19與miR-19a水平呈顯著負相關。這提示二者可能存在靶向關系，共同參與了HIE的發生。另外，本研究還發現，miR-19a高表達患兒預后良好率更高。這提示在臨床中應加強對HIE患兒血清miR-19a水平的監測，對低表達患兒應采取重點干預，以減輕腦組織的損傷。

綜上所述，新生兒HIE患兒血清lncRNA H19和miR-19a水平呈異常表達，其水平與NBNA評分密切相關，二者可反映HIE患兒疾病嚴重程度及預后情況。本研究后續將繼續擴大樣本量，并展開多中心研究，進一步驗證本研究結果，為血清lncRNA H19和miR-19a作為HIE患兒疾病嚴重程度及預后的評估指標提供更充分的理論依據。另外，本研究也將增加基礎實驗，探究血清lncRNA H19和miR-19a在HIE中的詳細作用機制，為HIE的機制研究提供基礎數據。

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［專業責任編輯：江 遜］

［中文編輯：王 懿；英文編輯：楊周岐］

［收稿日期］2023-04-16

［基金項目］河北省重點研發計劃自籌項目（182777236）

［作者簡介］翟麗娜（1983—），女，主治醫師，碩士，主要從事新生兒神經系統疾病的研究。

［通訊作者］平莉莉，主任醫師。