貴州銅仁發(fā)現(xiàn)砂鱉

關(guān)鍵詞：新紀(jì)錄；銅仁市；砂鱉；鱉屬

鱉屬（Pelodiscus）隸屬于龜鱉目（Testudines）鱉科（Trionychidae），廣泛分布于俄羅斯、朝鮮半島、日本、中國以及越南北部，同時已人工引入馬來西亞、泰國、菲律賓以及美國的夏威夷群島等地［1］。目前，鱉屬共包含7個有效種，中國均有分布［1?2］。

砂鱉［Pelodiscus axenaria（Zhou，Zhang amp; Fang，1991）］是周工健等［3］1991年描述的鱉屬物種，模式產(chǎn)地位于湖南。由于鱉屬物種間形態(tài)相似度較高、種內(nèi)形態(tài)變異較大等原因，目前砂鱉的形態(tài)識別特征尚不明確，但此前的多個分子遺傳學(xué)研究已經(jīng)證明了砂鱉的有效性［4?10］。砂鱉個體較小，常棲息于水質(zhì)清澈的砂礫石底質(zhì)的江河上游和寬闊溪流中。由于棲息地被破壞、人為捕撈和環(huán)境污染等原因，砂鱉數(shù)量銳減，2016年《中國脊椎動物紅色名錄》將其列為瀕危等級［11］。目前僅湖南省、廣東省和廣西壯族自治區(qū)有分布記錄［10］。

此前，研究人員認(rèn)為貴州省分布的鱉屬物種僅有中華鱉［P. sinensis（Wiegmann，1835）］一種［10，12?15］。2024年3月，筆者在貴州省銅仁市碧江區(qū)的野外調(diào)查中采集到2號雄性鱉屬物種標(biāo)本，綜合形態(tài)特征比較和分子系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定所采集標(biāo)本為砂鱉，為貴州省首次記錄（圖1）。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本采集與形態(tài)鑒定和測量

于2024年3月5—7日在貴州省銅仁市碧江區(qū)（27°43′ N，109°5′ E）采集到2號雄性鱉屬物種標(biāo)本。取少量肌肉組織保存于95%的乙醇溶液中，整體標(biāo)本在10%的福爾馬林中固定1 d后轉(zhuǎn)入75%乙醇溶液中永久保存。標(biāo)本存放于青海大學(xué)標(biāo)本館（標(biāo)本號：LFR2024013、LFR2024014）。

標(biāo)本測量依據(jù)周工健等［3］、唐業(yè)忠［16］和Gong etal. ［1］的研究，使用卷尺（精度1 mm）和電子游標(biāo)卡尺（德國美耐特不銹鋼數(shù)顯卡尺，0 ～ 200 mm，精度0. 1 mm）對標(biāo)本進(jìn)行外部形態(tài)測量。形態(tài)量度指標(biāo)包括體全長、背甲長、背甲寬、腹甲長、頭長、頭寬、吻突長、尾長、眼徑、眼間距、內(nèi)腹甲寬和內(nèi)腹甲高。

1. 2 分子實驗與系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析

使用血液/細(xì)胞/組織基因組提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）提取2號標(biāo)本的肌肉組織總DNA。采用引物Gludg（5′-TGACTTGAARAACCAYCGTTG-3′）和CB3（5′-GGCAAATAGGAAATATCATTC-3′）擴(kuò)增線粒體Cyt b 基因［17］。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性4 min；95 ℃變性40 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，35個循環(huán)；72 ℃終延伸10 min。PCR產(chǎn)物使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，產(chǎn)物由上海邁浦生物科技有限公司測序。原始序列使用DNAStar軟件進(jìn)行編輯拼接［18］。

根據(jù)Gong et al.［1］的研究，從GenBank下載鱉屬7個物種27條序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析（表1），選取滑鱉［Apalone mutica（Lesueur，1827）］、山瑞鱉［Paleasteindachneri（Siebenrock，1906）］和幼發(fā)拉底鱉［Rafetus euphraticus（Daudin，1801）］作為外群［6］。將以上Cyt b 序列導(dǎo)入MEGA X軟件［19］中，使用ClustalW 對獲得的序列進(jìn)行比對，并人工矯正比對結(jié)果。使用未校正距離模型（uncorrected genetic distance，P-distance）計算鱉屬物種間遺傳距離，并在IQTREE1. 6. 12［20］中使用最大似然法（maximum likelihood，ML）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。新獲得的序列上傳至GenBank 數(shù)據(jù)庫（GenBank 登錄號：PP682562、PP682563）。

2 結(jié)果

2. 1 形態(tài)特征及描述

采集到的2號鱉屬標(biāo)本均為成年雄性，標(biāo)本的形態(tài)學(xué)量度見表2。其中，標(biāo)本LFR2024013體全長193 mm，背甲長76. 8 mm，背甲寬72. 3 mm，腹甲長74. 2 mm，頭長44. 1 mm，頭寬29. 4 mm，眼徑2. 5 mm，眼間距3. 3 mm，吻突長4. 7 mm，尾長31. 1 mm。背甲橢圓形，長略大于寬；背甲中央有隆起脊骨，形成中央突起，向兩側(cè)傾斜；體背革質(zhì)較薄，可印出背甲骨板；體背皮膚較光滑，背部中央無明顯疣狀突起，僅裙邊和肩部有少量顆粒疣狀突起；內(nèi)腹甲呈“⌒”形，寬22. 6 mm，高9. 7 mm，夾角 gt; 90°；吻長，呈管狀，兩個鼻孔著生于吻的前端；四肢強(qiáng)健，每肢具五指（趾），僅前三指（趾）具爪，蹼膜發(fā)達(dá)；尾粗長，可伸出裙邊。

生活時，砂鱉頭背、側(cè)面以橄欖棕色為主，頭背前端散布少量黑褐色小斑點；眼周具不規(guī)則、斷續(xù)的黑褐色斑點和線紋，略呈放射狀排布；唇橄欖綠色，散布黑褐色、乳白色小斑點；頭腹灰棕色，前端顏色較深，向后逐漸變淺；頸側(cè)無白色斑紋；體背橄欖棕色，中央具稀疏的黑褐色網(wǎng)狀花紋，體背外側(cè)及裙邊具對稱的不規(guī)則黑褐色斑；體腹面乳白色，腹中央具1枚黑褐色斑；四肢背面橄欖棕色，四肢腹面淺灰色，前肢腋下具一枚深色斑（圖2，圖3）。

2. 2 分子系統(tǒng)發(fā)育分析和遺傳距離

對2號樣本的Cyt b 基因進(jìn)行擴(kuò)增和測序，有效序列長度為781 bp。最大似然系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示，鱉屬所有的物種聚在一支，呈單系（圖4）。采自貴州銅仁的2號樣本與湖南、廣東和廣西的砂鱉種群以高支持率聚為一支（SH 100/UFB 100），再與黃山馬蹄鱉（Pelodiscus huangshanensis Gong，Peng，Huang，Lin，Huang，Xu，Yang amp; Nie，2021）和石片鱉（P. shipian Gong，F(xiàn)ritz，Vamberger，Gao amp; Farkas，2022）以較高支持度構(gòu)成姊妹群（SH 73/UFB 81）。

基于線粒體基因Cyt b 序列比對與遺傳距離分析顯示，貴州銅仁的2號樣本與湖南的砂鱉遺傳距離為1. 1%，與廣西的遺傳距離為2. 3%，與廣東的遺傳距離為2. 1% ～ 2. 5%，低于鱉屬種間的遺傳距離。上述分子系統(tǒng)學(xué)分析結(jié)果支持本研究所采集的2號鱉屬標(biāo)本為砂鱉。

3 生境描述

銅仁市碧江區(qū)位于貴州省東北部，地處云貴高原東部邊緣，武陵山脈腹地，向湖南湘西低山丘陵過渡的斜坡地帶，與湘、渝相鄰，屬中亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候，境內(nèi)山峰林立，支流縱橫，森林覆蓋率達(dá)68. 21%，年均濕度較高。本次所采集的砂鱉標(biāo)本于2024年3月被發(fā)現(xiàn)于碧江區(qū)宋家壩村附近的淺河灣中，該河屬沅江流域，系洞庭湖水系的一大支流。海拔約260 m，多彎曲，河床多由砂石、淤泥沉積而成，較為穩(wěn)定，深潭與淺灘具存，符合砂鱉生存和繁衍需求。

4 討論

砂鱉是周工健等［3］在湖南龜鱉野生資源調(diào)查中采集到的鱉屬新種，其形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活習(xí)性、繁殖習(xí)性及分布區(qū)域與中華鱉明顯不同，按其發(fā)現(xiàn)地主要俗稱（砂鱉，鐵殼，灰殼）定名為砂鱉。2022年，Gonget al. ［10］將江西和湖南的部分砂鱉種群描述為一個新種：石片鱉，并對砂鱉重新研究，研究指定了砂鱉的新模，對其形態(tài)進(jìn)行了詳細(xì)描述，并總結(jié)了砂鱉的幾種常見色斑類型。本次新采集到的砂鱉標(biāo)本總體形態(tài)與Gong et al. ［10］研究中的砂鱉形態(tài)基本相符，但仍有區(qū)別：（1）體背黑褐色斑紋較稀疏，僅體背邊緣處具數(shù)枚對稱分布的黑褐色斑塊（vs. 體背密布深灰色至黑褐色斑紋，呈蝶狀或網(wǎng)狀）；（2）體腹面乳白色，僅前肢腋下和腹部中央具黑色或深灰色斑（vs.腹甲及四肢腹面散布深灰色斑塊）；（3）尾腹面兩側(cè)無黑斑（vs. 尾腹面兩側(cè)具黑斑）。這些形態(tài)上的變化可能是部分個體色型的改變，或是物種地理種群變異的結(jié)果。

砂鱉對棲息環(huán)境要求較高，僅分布于水質(zhì)清澈、水質(zhì)優(yōu)異的砂礫石底質(zhì)的江河上游和溪流中。造成砂鱉資源減少主要有3方面原因［1，10］：一是棲息環(huán)境被破壞，環(huán)境污染、開墾灘涂、修建護(hù)岸堤壩和開采河砂礫石，使砂鱉賴以生存繁衍的資源被消耗殆盡；二是砂鱉生長緩慢、繁殖率低，砂鱉3 ～ 4齡達(dá)到性成熟，單次產(chǎn)卵量僅4 ～ 8枚［3，21］；三是人為捕捉的影響，通過走訪銅仁地區(qū)水產(chǎn)市場及當(dāng)?shù)鼐用癜l(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)厣镑M與中華鱉有同域分布的現(xiàn)象，但當(dāng)?shù)鼐用裨缫颜J(rèn)識到砂鱉和中華鱉的區(qū)別，在捕捉到鱉類后，會將砂鱉挑出單獨(dú)售賣。由于砂鱉生長緩慢、種群恢復(fù)能力弱，因此亟須開展生物學(xué)和人工馴養(yǎng)繁殖技術(shù)研究，為保護(hù)和恢復(fù)物種資源提供技術(shù)支撐。

洞庭湖水系位于長江中游右岸，包括湘江、資水、沅江和澧水4條大河及汨羅江、新墻河等許多中小河流。洞庭湖水系及湖區(qū)包括湖南省的絕大部分及貴州、湖北、廣西、重慶、江西和廣東的一小部分［22］。砂鱉已知分布在湖南、廣東和廣西等地（圖1），主要沿湘江和沅江流域分布。沅江流域多為山區(qū)，湘江多丘陵，支流密布。本研究新增紀(jì)錄點為貴州省銅仁市碧江區(qū)的淺河灣，該河屬于沅江流域，屬于洞庭湖水系，與砂鱉的已知主要分布區(qū)為同一水系。此次新紀(jì)錄點的發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)大了砂鱉已知的分布范圍，對其地理分布、基礎(chǔ)生物學(xué)和遺傳多樣性研究具有重要意義，未來應(yīng)加強(qiáng)對該物種的檢測與研究。