河南金銀花葉斑病病原鑒定、生物學特性及室內藥劑篩選

摘要

2021年在河南金銀花Lonicera japonica Thunb.產區調查發現了一種金銀花葉部病害。本研究采用組織分離法和葉片接種進行病原菌分離和致病性測定，結合形態學觀察和多序列（ITS、EF-1α及β-tubulin）聯合分析對病原菌進行鑒定，并進一步就病原菌生物學特性及其殺菌劑篩選開展了研究。結果表明，引起河南金銀花葉斑病的病原菌為多主棒孢Corynespora cassiicola，代表菌株JYH1的最適生長培養基為PDA，可利用多種碳源和氮源，菌絲生長最適溫度為28℃，最適pH為6，全光照條件下菌絲生長最優，菌絲的致死條件為57℃，10 min。室內殺菌劑篩選結果表明，咯菌腈對菌株JYH1的毒力最強，EC50為0.14 μg/mL;其次為戊唑醇和甲基硫菌靈。研究結果為金銀花棒孢葉斑病的發生規律及防治研究提供了重要參考。

關鍵詞

金銀花;" 葉斑病;" 多主棒孢;" 生物學特性;" 殺菌劑

中圖分類號：

S 435.67

文獻標識碼：" A

DOI：" 10.16688/j.zwbh.2024012

收稿日期：" 20240105""" 修訂日期： "20240327

基金項目：

國家中藥材產業技術體系（CARS-21）；河南省中藥材產業技術體系（HARS-22-11-Z1）；河南省農業科學院新興學科發展專項（2024XK06）

致" 謝：" 參加本試驗部分工作的還有江代禮、譚翰杰、張能和紀燁斌等同學，特此一并致謝。

* 通信作者

E-mail：

秦艷紅qinyanhong6040@163.com；王飛yunfeiren@163.com

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為并列第一作者

Identification and biological characteristics of pathogen causing leaf spot disease of Lonicera japonica in Henan province， and laboratory fungicide screening

LI Xuemeng，" LI Shaojian，" YANG Jin，" GAO Suxia，" WEN Yi，" QIN Yanhong*，LIU Yuxia，" LU Chuantao，" WANG Fei*

（Institute of Plant Protection， Henan Academy of Agricultural Sciences， Zhengzhou" 450002， China）

Abstract

In 2021， a new leaf spot disease on Lonicera japonica Thumb. was observed in Henan province. In this study， the pathogen was isolated and purified by conventional tissue isolation， and a pathogenicity test was carried out through leaf inoculation. The pathogen was identified by morphological observation and multi-sequence analysis （ITS， EF-1α and β-tubulin）. The biological characteristics and fungicides for its control were further studied. The results indicated that the pathogen causing leaf spot of L.japonica was Corynespora cassiicola. The most suitable mycelial growth medium for the virulent isolate JYH1 was PDA， and the isolate could utilize a variety of carbon and nitrogen sources. The optimum growth temperature was 28℃， and the optimum pH was six. Full light was more favorable for mycelium growth. The lethal condition for mycelia was 57℃ for 10 min. The results of laboratory fungicide screening showed that fludioxonil had the strongest toxicity against isolate JYH1， with EC50 values of 0.14 μg/mL， followed by tebuconazole and thiophanate-methyl. These results could provide an important reference for research on occurrence regularity and control method of leaf spot disease on Lonicera japonica.

Key words

Lonicera japonica;" leaf spot disease;" Corynespora cassiicola;" biological characteristics;" fungicide

金銀花Lonicera japonica Thunb.隸屬忍冬科Caprifoliaceae忍冬屬Lonicera，俗稱二寶花、雙花、銀花等，以干燥的花蕾或帶初開的花入藥，具有清熱解毒、抑菌、抗病毒、抗氧化、保肝利膽和提高免疫等藥理作用［1］，是我國確定的70種名貴藥材之一［23］，被譽為“廣譜抗菌素”，在三分之一的中醫方劑中可用到金銀花，金銀花配伍的中成藥有200余種。河南省金銀花常年種植面積達2萬hm2，干花年產量超1.3萬t，約占全國總產量的45%［4］。然而，多種病害如白粉病［5］、褐斑病［6］、葉斑病［7］和根腐病［8］等的發生嚴重影響了金銀花的產量和品質，極大制約了金銀花產業的發展。其中，多主棒孢引起的葉斑病于2016年在四川被首次發現［7］，2020年我國臺灣地區也報道了該病的發生［9］，該病田間癥狀表現為初期病斑呈褐色小點，逐漸發展成圓形或不規則的斑點，邊緣病健交界處呈淡黃色。2021年在對河南省金銀花產區進行病害調查時發現，金銀花葉斑病在各大產區發生普遍，田間病情指數高達13.57，發病率可達80%以上，為精準防治該病害，本研究對河南省金銀花產區采集的葉斑病樣品進行了病原菌分離純化、致病性測定、形態學和分子生物學鑒定，并進一步開展了病原菌生物學特性和殺菌劑篩選研究，旨在為金銀花葉斑病防治提供理論依據和技術支撐。

1" 材料與方法

1.1" 田間病害樣品采集與病原菌分離純化

2021年8月-9月于河南淅川縣、澠池縣和禹州市金銀花種植基地采集葉斑病樣品，采用組織分離法［10］進行病原菌分離純化。發病葉片經無菌水沖洗3次，晾干后于病健交界處剪取5 mm×5 mm大小的組織塊，依次用75%乙醇消毒30 s，5%次氯酸鈉消毒1 min，無菌水沖洗3次，放置于無菌濾紙上吸干水分，接種在含有硫酸鏈霉素（50 mg/L）的PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂）平板上，28℃恒溫培養2 d，從菌落邊緣挑取單菌絲純化2～3次后將菌株保存于25%甘油中，-80℃冰箱保存待用。

1.2" 致病性測定

1.2.1" 離體葉片接種菌塊

選取健康金銀花葉片，無菌水沖洗3次，放在鋪有吸水紙的托盤中;從預先培養好的真菌分離物菌落邊緣打取直徑5 mm的菌餅接種于葉片上，用濕潤無菌脫脂棉包裹葉柄處保濕，每個真菌分離物接

種9個葉片，以接種空白PDA瓊脂塊為對照，將托盤封上保鮮膜保濕，置于28℃培養箱（光周期L∥D=16 h∥8 h，相對濕度60%）中恒溫培養5 d，觀察記錄侵染發病情況。

1.2.2" 離體葉片接種孢子懸浮液

將分離菌株接種于PDA平板上，待長滿平板后加入滅菌水沖洗收集孢子，制成1×106個/mL的分生孢子懸浮液;選取健康金銀花葉片，無菌水沖洗3次晾干待用，將孢子液噴灑于金銀花葉片上，葉片放在鋪有吸水紙的托盤中，封上保鮮膜保濕。每處理接種9個葉片，以接種等體積的無菌水做對照，28℃培養10 d，觀察記錄侵染發病情況。

1.2.3" 盆栽金銀花接種孢子懸浮液

分生孢子懸浮液制備方法同1.2.2。將金銀花枝條扦插于花盆中培養90 d，待長出新鮮葉片后，將濃度為1×106個/mL的孢子液均勻噴灑于金銀花葉片上，每處理接種6片，以接種等體積的無菌水為對照。接種后套袋保濕，28℃培養10 d，觀察記錄侵染發病情況。

1.3" 病原菌鑒定

1.3.1" 形態學鑒定

選擇致病性最強的菌株進行鑒定。將

菌株接種于直徑9 cm的PDA平板上，28℃恒溫培養，觀察記錄菌落培養性狀，光學顯微鏡下觀察記錄分生孢子梗和分生孢子的形態、大小及色澤特征，并參照《植物病原真菌屬分類圖索》［11］對金銀花葉斑病病原菌的種類進行初步鑒定。

1.3.2" 分子生物學鑒定

采用CTAB法［12］提取菌株的基因組DNA，分別利用真菌核糖體內轉錄間隔區通用引物（ITS1/ITS4）、翻譯延長因子基因特異引物（EF728F/EF986R）和微管蛋白基因特異引物（Bt2a/Bt2b）（表1）進行PCR擴增［13］。擴增產物測序后，在NCBI數據庫（http：∥www.ncbi.nlm.nih.gov）中進行同源性分析。下載同屬真菌對應基因的序列，應用Geneious Prime對菌株的rDNA-ITS、EF-1α和β-tubulin基因序列串聯，用MEGA 7.0軟件進行系統發育分析，采用鄰接法（neighbor-joining，NJ）構建系統發育樹，系統樹各分支置信度（bootstrap）均進行1 000次的重復檢驗。

1.4" 病原菌生物學特性測定

1.4.1" 不同培養基對病原菌菌絲生長的影響

配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基（PSA）、馬鈴薯胡蘿卜瓊脂培養基（PCA）、胡蘿卜瓊脂培養基（CA）、燕麥瓊脂培養基（OMA）、玉米粉瓊脂培養基（CMA）和水瓊脂培養基（WA）等7種供試培養基。用打孔器在活化好的病原菌菌落邊緣打取直徑5 mm的菌餅，分別接種于上述7種培養基中央，每處理重復3次。置于28℃恒溫培養箱暗培養，7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.4.2" 碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響

用等質量的乳糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖、木糖醇、D-甘露醇和可溶性淀粉替代查氏培養基中的蔗糖作為碳源，用等質量的胰蛋白胨、牛肉浸粉、甘氨酸、硫酸銨、硝酸鉀和氯化銨替代查氏培養基中的硝酸鈉作為氮源，配成不同碳、氮源的培養基。接種病原菌后，置于28℃培養箱恒溫暗培養，7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.4.3" 溫度、酸堿度和光照條件對病原菌菌絲生長的影響

將菌餅接種于PDA平板上，分別置于溫度為5、10、15、20、25、28、30℃和35℃培養箱中暗培養;用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH溶液將PDA平板的pH值調為4、5、6、7、8、9、10和11共8個梯度，接種菌餅后置于培養箱中暗培養;將菌餅接種于PDA平板上，分別置于光暗交替（L∥D=12 h∥12 h）、全黑暗（L∥D=0 h∥24 h）和全光照（L∥D=24 h∥0 h）的恒溫培養箱中培養;上述處理均于7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.4.4" 菌絲致死溫度的測定

打取直徑5 mm的菌餅，置于提前預熱的裝有無菌水的2 mL離心管中，分別在35、40、45、50、55、60、65℃水浴鍋中各處理10 min，取出后迅速冷卻，將菌餅取出置于PDA平板上于28℃恒溫培養，5 d后觀察有無菌落生長。獲得菌絲致死溫度范圍后，以1℃溫度差設置溫度梯度，明確菌絲的致死溫度。每個處理3次重復。

1.5" 室內殺菌劑篩選

采用菌絲生長速率法［14］測定殺菌劑對金銀花葉斑病菌的毒力，選擇6種常用化學殺菌劑原藥： 97%戊唑醇、70%甲基硫菌靈、96%嘧菌酯、80%代森錳鋅、98%咯菌腈和95%噻呋酰胺。將預先配制好的藥劑母液用無菌水稀釋后，各濃度藥液與PDA培養基以1∶9（V/V）的體積比混勻，根據預試驗結果制成含不同終濃度藥劑的平板（表2）。從預先培養的病原菌菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅，接種到含藥平板上，28℃暗培養，以不加藥劑的PDA平板為陰性對照，每個處理設3個重復。待對照培養基上病原菌長滿平板時（直徑9 cm），測量所有處理菌落直徑，計算各殺菌劑的抑菌率。

抑菌率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-5）×100%。

分析各藥劑濃度對數值（x）和對應菌絲生長抑菌率的幾率值（y），根據不同殺菌劑對病原菌菌絲生長的毒力回歸方程y=a+bx，計算各供試藥劑對病原菌的抑制中濃度EC50。

2" 結果與分析

2.1" 田間病害樣品采集與病原菌分離純化

金銀花葉斑病5月中下旬零星發生，7月份隨雨季到來發生趨重，8月-9月為發病盛期;一般先由下部葉片開始發病，逐漸向上發展，高溫、多雨、潮濕條件有利于發病，植株生長衰弱時發生嚴重;發病初期在葉片上呈現暗褐色小點，后逐漸擴大呈圓形或橢圓形病斑，病斑邊緣黑褐色，中央黑色，病斑邊緣具明顯黃色暈圈;發病嚴重時，數個病斑擴展聯合成片，造成葉片組織變脆干枯，提早落葉（圖1）。從3個金銀花種植基地采集的葉斑病9個樣品上共計分離純化出80株真菌，形態學初步鑒定為棒孢屬真菌26株（JYH1～JYH26），鏈格孢屬真菌24株（JYH27～JYH50），鐮刀屬真菌19株（JYH51～JYH69），炭疽菌屬真菌11株（YH70～JYH80）。選取代表性菌株JYH1、JYH10、JYH17、JYH27、JYH51和JYH70

進行致病性測定。

2.2" 致病性測定

2.2.1" 離體葉片接種菌餅

利用病原菌菌餅分別接種金銀花離體葉片，接

種3 d后，病斑從接種部位輻射狀向四周擴展，接種

5 d后病斑即擴散至葉片邊緣位置，菌株JYH1、

JYH10、JYH17發病率依次分別為100%、83.33%和66.67%（圖2b～d），對照未發病（圖2a），菌株JYH27、JYH51和JYH70未發病。以致病力最強的菌株JYH1進行后續試驗。

2.2.2" 離體葉片接種孢子懸浮液

金銀花離體葉片接種菌株JYH1孢子懸浮液5 d

后，葉片上出現深褐色小點開始發病，接種10 d后逐漸擴大為圓形或橢圓形病斑，病斑周圍產生黃色

暈圈（圖2f）;對照未發病（圖2e）。

2.2.3" 活體葉片接種孢子懸浮液

金銀花活體葉片接種菌株JYH1孢子懸浮液5 d后，金銀花葉片上開始發病出現深褐色小點，接種10 d后逐漸擴大為圓形或橢圓形病斑，邊緣有明顯的黃色暈圈，且病斑處葉片組織變脆，與田間葉斑病癥狀相似（圖2h）。對照組金銀花生長正常，葉片無病斑（圖2g）。

從發病部位進行病原菌再分離，可分離到與JYH1形態特征完全一致的病原菌，完成金銀花葉斑病的柯赫氏法則驗證，確定菌株JYH1為金銀花葉斑病的病原菌。

2.3" 病原菌鑒定

2.3.1" 形態學鑒定

菌株JYH1在PDA平板上培養6 d，菌落圓形，邊緣整齊，菌絲灰褐色，呈絨毛狀（圖3a）。顯微鏡下觀察菌絲呈透明或半透明，有橫隔;分生孢子梗直、長，著生于菌絲頂端，無分枝（圖3b）。分生孢子圓柱狀或倒棍棒狀，直或稍彎曲，頂端鈍圓，具0～7個隔膜，單生或串生，大小為（11.23～127.23）μm×（3.81～10.73）μm（圖3c）。依據菌落及分生孢子形態特征將菌株JYH1鑒定為棒孢屬真菌。

2.3.2" 分子生物學鑒定

利用ITS、EF-1α和β-tubulin引物對菌株JYH1進行PCR擴增，測序結果經NCBI數據庫比對，菌株JYH1的ITS序列與已報道的多主棒孢Corynespora cassiicola一致性在99%以上，其EF-1α序列與C.cassiicola一致性為97%以上，β-tubulin序列與C.cassiicola一致性為98%以上，將上述所測序列提交GenBank數據庫獲得登錄號分別為：OR750480、OR734784、OR734785。選取分離自辣椒Capsicum annuum、茄子Solanum melongena、番茄S.lycopersicum、煙草Nicotiana tabacum、黃瓜Cucumis sativus、金葉女貞Ligustrum × vicaryi和草莓Fragaria × ananassa的C.cassiicola菌株，與金銀花葉斑病菌菌株JYH1進行多序列聯合系統發育分析，結果顯示來自8個寄主植物上的多主棒孢菌株形成6個分支，分離自同一寄主植物的病原菌以較高的置信度聚在一支，其中菌株JYH1在進化關系上與黃瓜植株上分離的C.cassiicola菌株親緣關系最近（圖4）。結合形態學與分子生物學鑒定將菌株JYH1鑒定為Corynespora cassiicola。

2.4" 病原菌生物學特性

2.4.1" 不同培養基對病原菌菌絲生長的影響

病原菌菌株JYH1在供試7種培養基上均能生長，培養7 d菌落直徑（圖5）從大到小依次為PDA（7.07 cm）gt;OMA（7.05 cm）gt;PSA（6.85 cm）gt;PCA（6.73 cm）gt;CA（5.60 cm）gt;CMA（5.18 cm）gt;WA（5.12 cm），菌株JYH1的最適培養基為PDA，菌絲生長最致密;其次為OMA培養基，菌絲生長密，稍厚;在CMA和WA培養基上生長速度最慢，且菌絲稀疏。

2.4.2" 碳、氮源對病原菌菌絲生長的影響

菌株JYH1在供試8種碳源和7種氮源培養基上均可生長，但對不同碳、氮源的利用程度不同。其在以D-甘露醇為碳源的培養基上生長最快，培養7 d菌落直徑最大，為7.47 cm;其次是以蔗糖、葡萄糖和木糖醇為碳源的培養基上，菌落生長較快，直徑

依次為7.38、7.32 cm和7.22 cm;以果糖為碳源的培養基上菌落

直徑最小，為5.83 cm（圖6a）。不同氮源中，菌株JYH1在以胰蛋白胨為氮源的培養基上生長最快，

菌落直徑大于以硝酸鈉為氮源的培養基，且菌絲旺盛;在以硫酸銨為氮源的培養基上菌落直徑最小，為6.05 cm（圖6b）。

2.4.3" 溫度、酸堿度和光照條件對病原菌菌絲生長的影響

病原菌菌株JYH1在5～35℃均能生長，5～10℃低溫生長速度緩慢，當溫度為25～30℃時，較適宜菌絲生長，培養7 d菌落直徑顯著大于其他溫度下的菌落直徑。最適生長溫度是28℃，菌落直徑最大，為7.07 cm（圖7a）。病原菌JYH1在pH 4～11間均能生長，且在pH為6時生長最好（圖7b）。病

原菌JYH1在光暗交替、全光照和全黑暗下均能良好生長，培養7 d時全光照與全黑暗條件下菌落直徑和菌落生長速率差異不顯著，顯著高于光暗交替下的菌落直徑和菌落生長速率（表3）。

2.4.4" 病原菌菌絲致死溫度

將分別在35～65℃的恒溫水浴鍋內處理10 min的菌餅接種在PDA平板上，置于28℃下黑暗培養5 d后，結果發現35～55℃處理后，菌絲能夠生長且能夠形成新的菌落，而在60℃及以上條件下菌絲不生長。進一步以1℃為梯度設置5個溫度處理，發現56℃處理10 min后能形成新的菌落，57℃及以上條件下處理后不能形成新菌落。說明病原菌JYH1菌絲在57℃下，持續處理10 min會完全死亡。

2.5" 室內殺菌劑篩選

室內殺菌劑篩選結果表明，供試的6種化學殺菌劑對金銀花葉斑病病原菌的毒力大小順序為：咯菌腈＞戊唑醇＞甲基硫菌靈＞噻呋酰胺＞嘧菌酯＞代森錳鋅。其中，咯菌腈對病原菌菌株JYH1的毒力最強，EC50為0.14 μg/mL;其次為戊唑醇和甲基硫菌靈，EC50分別為0.375 μg/mL和7.193 μg/mL;代森錳鋅的毒力最低，EC50為34.778 μg/mL（表4）。

3" 結論與討論

金銀花作為我國傳統的大宗藥材，目前國內外對其病害的報道相對較少。本研究首次報道了引起河南省金銀花葉斑病的病原菌為多主棒孢C.cassiicola，該葉斑病的癥狀表現為發病初期在葉片上呈現暗褐色小點，后逐漸擴大呈圓形或橢圓形病斑，病斑邊緣黑褐色，中央黑色，病斑邊緣具明顯黃色暈圈;發病嚴重時，數個病斑擴展聯合成片，造成葉片組織變脆干枯，提早落葉。不同于金銀花炭疽病可出現層紋形狀，后期葉片表面或散生黑色小點［15］;也區別于多喙莖點霉Phoma multirostrata引起的忍冬褐斑病在高濕環境時葉片會產生灰黑色霉狀物，導致葉片破碎，穿孔［16］。

多主棒孢是一種寄主范圍廣泛的植物病原真菌，已被報道可引起大戟科、茄科、葫蘆科、芝麻科、唇形科等多種寄主作物的葉斑病［1721］;Huang等［7］和Chang等［9］曾先后報道了四川和臺灣地區由C.cassiicola引起的金銀花葉斑病。薛制國等［22］的研究發現分離自冀東地區旱黃瓜上的多主棒孢存在培養性狀多樣性，供試菌株在菌落顏色、氣生菌絲致密程度上均表現出差異，本研究中菌株JYH1的菌落形態特征與旱黃瓜上的棒孢菌BBCL20052502相似，且兩個菌株的生長最適培養基均為PDA。Dixon等［23］針對采集自不同寄主植物的多主棒孢C.cassiicola的系統發育分析表明，該病原菌存在豐富的種內遺傳多樣性，且表現出一定程度的寄主特異性。基于多序列聯合分析，本研究選取分離自不同寄主植物的多主棒孢菌株進行系統發育分析，結果顯示所有棒孢菌株可分為6個分支，且來自同一寄主植物的分離物以較高的置信度聚在一支，其中菌株JYH1與黃瓜上分離的C.cassiicola菌株聚在一支，表明金銀花與黃瓜上分離的C.cassiicola菌株親緣關系最近。高葦等的研究表明來自黃瓜、番茄及茄子的多主棒孢菌株，其寄主來源與致病力分化之間具有顯著相關性，從而證明多主棒孢種內存在寄主專化性特征［24］，本研究中菌株JYH1是否可侵染其他寄主植物即是否具有寄主專化性特征還有待后續進一步驗證。

本研究中多主棒孢菌株JYH1可利用多種碳源和氮源，最適碳源和氮源分別為D-甘露醇和胰蛋白胨，這與已報道的分離自其他寄主植物的多主棒孢菌株不盡相同，如張笛等［25］報道的分離自黑龍江黃瓜上的多主棒孢最適碳源同為D-甘露醇，最適氮源為甘氨酸；王樹和等［26］報道的分離自洛陽金葉女貞上的多主棒孢最適碳源為麥芽糖，最適氮源為蛋白胨，說明分離自不同寄主植物的多主棒孢菌株利用碳、氮源的種類和能力均存在差異，這可能與其寄主來源和環境差異有關。另外，由于不同報道間所選取試驗用碳、氮源種類存在差異，分離自不同寄主植物的多主棒孢菌株利用碳、氮源的能力和種類差異還需要進一步深入研究。多主棒孢JYH1的適宜生長溫度范圍為25～30℃，最適溫度是28℃，全光照有利于其菌絲生長，與孫會杰等［27］報道的芝麻多主棒孢根腐病菌的結果一致，與本研究團隊前期調查田間金銀花葉斑病病情結果相吻合，高溫高濕可加重該病害的流行。多主棒孢JYH1的最適培養基為PDA，對酸堿度反應不敏感，酸性和堿性條件下都能生長，但pH為6時菌落直徑最大，這與河南省草莓棒孢葉斑病病原菌的研究結果相似［28］。該菌株菌絲57℃、10 min完全死亡，表明菌絲對溫度有較強耐受力。

本研究中篩選出來的對金銀花葉斑病菌毒力最強的殺菌劑為咯菌腈（EC50為0.14 mg/L），孫圣楠［29］對煙草棒孢葉斑病菌進行了殺菌劑室內篩選研究，雖然所選用藥劑種類與本研究不盡相同，但咯菌腈EC50（0.108 9 mg/L）及其抑制效果優于其他11種殺菌劑的結果與本研究一致;而本研究中代森錳鋅對金銀花葉斑病菌的毒力最弱（EC50為34.778 mg/L），與李晗［30］在測定重慶煙草棒孢葉斑病菌對10種殺菌劑的敏感性時發現代森錳鋅的毒力大小（EC50為1.940 mg/L）差別較大。因此，針對不同寄主來源的病原菌甚至同一寄主的不同病原菌菌株都有必要開展針對性的殺菌劑篩選工作，以更好保證科學的精準防控。本研究中篩選毒力最強的藥劑咯菌腈是基于室內的平板篩選，其對金銀花棒孢葉斑病的田間防治效果如何還需進一步驗證。

本研究通過形態學特征與多序列聯合分析相結合，鑒定出河南省金銀花葉斑病病菌為多主棒孢，并對其開展了生物學特性和殺菌劑篩選研究，研究結果可為金銀花葉斑病的診斷以及田間化學用藥的合理選用提供重要依據。

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（責任編輯：楊明麗）